Download T. cruzi

Seminario curso optativo:
`` ESTUDIO INTERDISCIPLINARIO DE LA ENFERMEDAD DE
CHAGAS´´
Chilote D. Paula
Rivero Mega M. Soledad
 Ramírez
Moreno Ernesto , Santiago
Guerrero José Luis
 2009

T. cruzi se encuentra ampliamente distribuido en el
continente Americano en correspondencia con la distribución
de transmisores del orden Triatominae.

El papel de los triatominos en el ciclo de vida del parásito
es fundamental pues en ellos T. cruzi se reproduce en fase
de epimastigote y se diferencia a la fase de tripomastigote
metacíclico que posee la capacidad de infectar al
hospedante vertebrado.

Se han realizado gran cantidad de
estudios tratando de demostrar la
presencia de alguna fase de T. cruzi en
saliva y por extensión, la transmisión del
parásito por esta vía, los resultados han
sido negativos en todos los casos.

Se ha estudiado la presencia de bacterias
en las glándulas salivales de los
triatominos
e
informes
verbales
preliminares indican la posibilidad de
encontrar cocos Gram positivo.

Si la saliva de triatominos albergara
bacterias
u
otras
simbiontes
potencialmente patógenos al humano,
existe la posibilidad de su transmisión
durante su alimentación.
 Investigar
la presencia de bacterias simbiontes
en la saliva de Triatoma infestans y discriminar
si son potencialmente patógenas para el
humano.
 Se
emplearon lotes de cuatro machos y de
cuatro hembras de Triatoma infestans, para
cada uno de los tres esquemas de
alimentación artificial que se probaron, los
cuales consistieron en lo siguiente:
1.
Se realizó una desinfección de la
proboscis y se tomó una muestra
de la zona externa de la misma
como control negativo.
2.
Se procedió a estimular la emisión
de saliva mediante contactos
suaves con la yema del dedo índice
directamente sobre el pronoto de
los ejemplares.
3.
Tras la emisión de saliva, se
colectó y se sembró.
Se procedió a embeber hisopos estériles con
solución salina estéril precalentada a 37º C,
se ofrecieron individualmente a los
triatominos para que se alimentaran
directamente del algodón rico en solución.
Se colocaron 2 ml de solución salina
isotónica en
recipientes estériles y se
taparon con una membrana de látex estéril,
se calentaron en baño Maria y se les
ofrecieron a los triatominos para que se
alimentaran a través de la membrana.

Se sembró masivamente el material biológico
colectado en placas con medio Agar Soya
Tripticasa y Gelosa Sangre respectivamente.

A continuación se procedió a incubar las placas a
37º C durante 24 horas.

Se determinó su morfología colonial, morfología
microscópica y tinción de Gram.

Se sembraron las siguientes pruebas bioquímicas:
Cátalasa, Oxidasa, Hemólisis, Vogues-Proskauer,
Lactosa, Maltosa, Rafinosa, Dextrosa, Arginina,
Manitol, Urea, Almidón, Bilis Esculina y
Novobiocina.

La metodología de estimulación del pronoto
arrojó resultados negativos, en ningún caso se
logró obtener saliva para ser sembrada en los
medios de cultivo.

En la metodología del hisopo, sólo dos
ejemplares se alimentaron de él y al sembrar no
hubo crecimiento bacteriano.

La metodología de la membrana de Látex dio
resultados positivos en todos los casos de
alimentación de los triatominos por lo cual fue
la metodología de elección para el estudio y las
pruebas se realizaron por cuadruplicado.
Característica
Colonia A
Colonia B
Colonia C
Colonia D
Tamaño
1mm
3mm
1mm
1mm
Color
Blanco
Blanco
blanco
Blanco
Forma
Circular
Ameboide
Circular
Circular
Elevación
Convexa
Convexa
Convexa
Convexa
Superficie
Lisa
Lisa
Lisa
Lisa
Aspecto
Húmedo
Húmedo
húmedo
Húmedo
Borde
Entero
Ondulado
Ondulado
Entero
Luz Transmitida
Opaca
Opaca
Traslúcida
Opaca
Luz reflejada
Brillante
Brillante
Brillante
Brillante
Consistencia
Mucoide
Mucoide
Butirosa
Butirosa
Pigmento
difusible
S/pigmento
s/pigmento
S/pigmento
S/pigmento
Medio de cultivo
TSA
TSA
TSA
TSA
Tabla 1
Colonia A
Colonia B
Colonia C
Colonia D
Gram
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Morfología
Cocos
Cocos
Cocos
Cocos
Agrupación
racimos
Pares o
cadenas
pares
pares
Tabla 2
 Las
características macroscópicas y
microscópicas (tablas uno y dos) de las
bacterias obtenidas, no se correlacionan
con los grupos de microorganismos que
son potencialmente patógenos para el
humano y que en un momento podrían
causar septicemia o alguna infección
grave.
Experimento
Triatomino 1
Triatomino 2
Triatomino 3
Triatomino 4
1
A,B,D
A,B,C,D
A,B.C,D
Negativo
2
A,B,C,D
A,B,D
Negativo
A,B,C
3
Negativo
A,B,C,D
A,B,C,D
A,B,D
4
D
A,B,D
A,B,C,D
A
Tabla 3
Experimento
Triatomino 1
Triatomino 2
Triatomino 3
Triatomino 4
1
A,B
A,B,C
A,B,C,D
A,B,C,D
2
Negativo
A,B,C
Negativo
A,B,C,D
3
A,B
Negativo
Negativo
A,B
4
A,B,C,D
Negativo
A,B
A,B,C,D
Tabla 4
Bioquímica
Colonia A
Colonia B
Colonia C
Colonia D
Hemólisis




Lactosa
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Vogues Proskauer
Positivo
Positivo

Negativo
Maltosa
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo
Los
Negativo
Negativo
Positivo
Negativo
resultados
muestran
pocas
Dextrosa
Positivo
Positivo
Positivo

diferencias entre las bacterias
Arginina
Positivo
Positivo
Negativo

aisladas.
Rafinosa
Manitol
Positivo
Negativo
Negativo
Negativo
Úrea
Positivo
Positivo

Negativo
Almidón


Positivo

Bilis esculina


Positivo

Novobiocina
R
S

S
Oxidasa
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Catalasa
positivo
Positivo
Negativo
Positivo
tabla 5

Las pruebas bioquímicas (tabla 5) en
combinación con las características antes
referidas, permitieron establecer tres especies
de bacterias del genero Staphylococcus:
1. S. saprophyticus
2. S. hominis
3. S. caseolyticus
De importancia medica como
agente etiológico de
infecciones del tracto urinario
También se aisló Enterococcus sp., el cual no es
considerado patógeno para el humano, pero todas
las especies encontradas son potencialmente
capaces de causar septicemia en casos
excepcionales y de inmunocompromiso.
 Se
confirma la existencia de simbiontes en
saliva de T. infestans y no se descarta la
posibilidad de presencia de patógenos.

Los triatominos son potencialmente capaces
de transmitir a los simbiontes salivales, pues
se aislaron mediante un proceso equivalente
a su alimentación natural.
1.
Pan American Health Organization Regional Office of the World
Health Organization (PAHO/WHO). 2000. Geoepidemiological
Spaces for Surveillance and Control A Series of Four Maps. Pp 2-5.
2. Charles B. Bread, *Ravi V. Durvasula, and Frank F. Richards. 1998
Bacterial Symbiosis in Arthropods and the Control of Disease
Transmission. Vol 4 (4): 582- 584.
3. Eichler S, Schaub GA. Development of symbionts in triatomine
bugs and the effects of infections with trypanosomatids. PMID:
11971650 [PubMed - dexed for MEDLINE].
4. Barrow Ig and Rka Fel Tham. 1993. Cowan and Steel´s. Manual
for the Identification of Medical Bacteria. 3 RD ed. P54-57.
Cambridge University Prees.
5. Clementina Magos Lopez, Francisco Sánchez Villareal, Gonzalo
Gutiérrez, Roberto Tapia Conyer. 1992. Banco Nacional de Sueros
Vol. 34 (2).