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TECNICAS DE
BIOLOGÍA MOLECULAR
IES JOAQUÍN TURINA
SEVILLA
ENDONUCLEASAS
O ENZIMAS DE RESTRICCIÓN
 Generan cortes internos en la molécula de
ADN
 Pueden generar extremos romos o
cohesivos
Enzimas de Restricción
Extremos cohesivos
Extremos romos
Clonación y uso de enzimas
Separación de fragmentos
 Geles de Agarosa
 Geles de
poliacrilamida
CLONACIÓN
PCR (reacción en cadena de
polimerasa) Componentes de la
reacción
 Polimerasa
 Primers
 dNTP’s
 Cloruro de magnesio
 Agua
 Buffer
SOUTHERN BLOT
1) Blood sample. 2) DNA is extracted from blood cells. 3) DNA is cut into
fragments by a restriction enzyme. 4) The DNA fragments are separated into
bands during electrophoresis in an agarose gel. 5) The DNA band pattern in the gel
is transferred to a nylon membrane. 6) Radioactive DNA probe, designed to
recognise specific DNA sequences, is prepared. 7) Probe DNA binds to the specific
DNA sequences on the membrane. 8) Excess DNA is washed off, but the DNA
pattern is invisible at this stage. 9) X-ray film is placed next to the membrane &
exposed to the radioactive DNA. 10) The developed X-ray shows the pattern of DNA
bands
SECUENCIACIÓN
VNTR
DNA fingerprinting
CLONACIÓN EN ANIMALES
COPY-CAT (EE.UU 2002)
PAMPA (Argentina 2002)
PROMETEA (Italia 2003)
Ian Wilmut and Dolly. In 1996, British embryologist
Professor Ian Wilmut created, the world's first sheep
cloned from an adult sheep cell. The research was
conducted at the Roslin Institute in Edinburgh,
Scotland.
Marcadores moleculares
Y sus aplicaciones
Tipos de Marcadores
 Directos o sea dentro del gen
(intragénicos)
 Indirectos usando a otro gen o marcador
cercano en el cromosoma para poder
identificar sus diferencias entre individuos
RFLP’s
 Pueden hacerse por Southern blot
 Pueden hacerse por PCR
Utilidad
 Detección de individuos portadores de un




gen recesivo.
Test de paternidad o trazabilidad.
Selección asistida por marcadores,
Salud publica,
Virología, etc
Por
Southern
blot
Por PCR y luego restricción
VNTRs o microsatélites
 Pueden hacerse por Southern blot
 Por PCR y geles de poliacrilamida o
agarosa
 Por SSCP
Cepas diferentes de Salmonellas