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Práctica experimental Detección de Compentes de ADN modificados generalmente en alimentos por polimerasa-reacción-cadena (PCR) Introducción Objetivos del experimento 1. Detección cualitativa de una modificación genética en alimentos. 2. Detección de modificaciones causadas por - El incio del virus del mosaico de la coliflor (CaMV) - La terminación de la nopalina sintasa (NOS) en agrobacterium tumefaciens Ambas secuencias son muy usadas para regulación de genes extraños a soja y maiz en ingeniería genética Procedimiento paso a paso 1. Paso: Aislar ADN - Extracción de Soja controlada sin componentes genéticamente modificados (-GMO) - Extracción de examen de alimentos (T) Procedimiento paso a paso 2. Paso: PCR Como control para material vegetal existente en alimentos y para una exitosa PCR: Amplificación de un código genético para una proteina en el fotosistema II con longitud de 455 Bp Como dos secuencias de ADN caraterísticos para una modificación genética en alimentos: Ampliación de un gen a) de CaMV-Iniciación con 203 Bp b) de NOS-terminación con 225 Bp Programa de tiempo de la cicladora 120``, 94 °C Desnaturalización 60``, 94 °C Desnaturalización 40 Ciclos 10`, 72 °C Completar 120``, 72 °C Elongación 60``, 59 °C Recocido Precedimiento paso a paso 3. paso: Electroforesis y evaluación Detección de productos de PCR por electroforesis en gel de agarosa Tinción de ADN y evaluación del gel ¿Contiene tu examen de alimentos ADN extraño? Resultado esperados PS II secuencia genética (455 Bp) Secuencia NOs (225 Bp) Secuencia CaMV (203 Bp) 1 1 2 2