Download Interferencias en análisis de orina con tiras multireactivas

Interferencias en el
análisis de orina con tiras
multirreactivas
Sociedad española de Bioquimica Clínica y Patologia Molecular
Química clínica 2000;19 (1)
Ana Santo Quiles
URIANÁLISIS
ANORMALES Y SEDIMENTO
¿Cuando realizar urianálisis?
- En pacientes con evidencia o sospecha de transtornos
renales, urinarios, hepáticos y metábólicos
-
Por protocolos de hipertensión, DM…
-
Sospecha de infección de orina
CARACTERISTICAS MUESTRA DE ORINA
Composición sometida a múltiples variaciones (ppal
vehículo de excreción)
- Eliminación productos del metabolismo y sustancias
extrañas (fcos y sus metabolitos)
- Gran influencia de condiciones preanalíticas
- Recogida (1ª hora, >4horas en vejiga)
- Almacenamiento (<2h)
- Dieta, Fármacos…
- Características físicas: aspecto, color, olor volumen
-
CARACTERISTICAS MUESTRA DE ORINA
-
-
-
Composición sometida a múltiples variaciones (ppal
vehículo de excreción)
Eliminación productos del metabolismo y sustancias
extrañas (fcos y sus metabolitos)
Gran influencia de condiciones preanalíticas
- Recogida (>4horas en vejiga)
- Almacenamiento (<2h)
- Dieta, Fármacos…
LA ORINA EN EL LABORATORIO
DE RUTINA
ORINA
RECIENTE
ALARMA
Cobas u 601
ALARMA
UF-1000
MICROSCOPIO
TIRA MULTIREACTIVA
Cuadrados de material poroso con reactivos desecados
para la determinación cualitativa o semicuantitativa
PH
LEUCOCITOS
NITRITO
PROTEINAS
GLUCOSA
CUERPOS CETONICOS
UROBILINOGENO
BILIRRUBINA
SANGRE
AREA DE COMPENSACION
ESPECTROFOTOMETRIA
DE REFLECTANCIA
Se usa para medir la intensidad de un espectro determinado en
comparación con la intensidad de la luz procedente de una fuente
LED(diodos
patrón.
emisores de luz):
470, 555,620 nm
Un LED proyecta luz a una longitud de onda
definida, desde el ángulo pertinente, sobre la
superficie de una almohadilla. La luz se
proyecta en la almohadilla y se refleja con
una intensidad que depende del color de
dicha almohadilla. Un detector de fotodiodos
recoge la luz reflejada y transmite una señal
eléctrica que se transformara en valores
relativos usando una escala estándar de calib.
AREA DE COMPENSACION
Almohadilla blanca, sin reactivos, de las tiras
reactivas usada para determinar el color de la
orina y así intentar evitar falsos positivos a
causa de que la muestra de orina tenga un
color muy fuerte.
Permite la compensación instrumental para el
color intrínseco de la orina durante el análisis.
Una interferencia importante será la sustancias
que den color a la orina o que adquieran color al
entrar en contacto con las zonas reactivas y
enmascaren la coloración de la propia reacción
pH
Orina acida:
•Acidosis
Rango (4,5-9)
metabolica
•Diarrea cronica
+
Reacción ( dos indicadores) Directa con
los
iones
H
•Insuficiencia
respiratoria
rojo de metilo (de rojo a amarillo en rango de 4-6)
•Dieta proteinas
azul de bromotimol (de amarillo a azul de rango 6-9)
Significación clínica
Interferencias
Proliferación
Bacteriana
(ureaamoníaco)
Orina alcalina:
•Acidosis tubular
renal
•Alcalosis respir.
•ITU
Excesivamente
•Dieta vegetal y
mojada
citricos
sol. Amortiguadora acida de zona prot
DENSIDAD RELATIVA
Depende de la masa de solutos por unidad de volumen
VN: 1.003-1.035
El riñón varía el vol de orina y su [solutos] para mantener
homeostasis de los líquidos corporales y electrolítos
Reacción: Liberación de protones por un polielectrolito, en
presencia de cationes, vira el color del indicador (azul de
Positivas
bromotimol)
↑[]cationes como Ca
Interferencias↑[] proteinas
Negativas
Orinas alcalinas
PROTEINA
Rango ( NEG- 25-75-150-500 mg/dl)
Sensibilidad 12 mg/dl
Proteinurias de origen
glomerular:
Composición: Fisiológica excreción
<0,150 g
•Glomerulonefritis
( 60% p.plasmáticas (40% alb) y•Patologia
40% p.uroteliales)
vascular
•Enf. Autoinmunes
•Amiloidosis
Significación clínica
•Neoplasias
•Fármacos
: AINE,IECA...
Reacción ( principio de error proteico
de indicar de pH)
Indicador-H+ (Amarillo) + Prot (Alb) → Indicador (verde-azul) + Proteína-H+ (Solución amortiguadora pH)
INTERFERENCIAS
NEGATIVAS
Orinas muy diluidas
POSITIVAS
Farmacos
Bacterias
Con
las tiras actuales,
ORINA
un
pH
elevado (hasta
9)
Desinfectantes
con
ALCALINA
no afecta
al test
amonio
cuaternario
Orinas coloreadas
Capaces de desequilibrar la acción de la solución
amortiguadora que impregna la tira.
( hematuria,
bilirrubina...)
LEUCOCITOS

Rango ( NEG-25-100-500 /µl)

Sensibilidad 20 leucocitos / •Infeccion
µl

Significacion clínica (fisiológico 0-3/campo, 10µL)

Actividad enzimática de Esterasa de granulocitos

Reacción

•Inflamación
Interferencias
.
REACCIÓN
LEUCOCITARIA
Hidrólisis por la
Esterasa
leucocitaria
Ester de ácido
indoxilocarbónico
Indoxilo
Sal de
diazonio
Compuesto
púrpura
INTERFERENCIAS
POSITIVAS
 reac. cromatica
NEGATIVAS
 reac. cromatica






Ascorbato
Proteínas
Glucosa
Densidad
Antibióticos
Oxalato
Malla impregnada con
yodato que oxida al
Ác.ascórbico y elimina
la interferencia



Formaldehído
Agentes oxidantes
Orinas coloreadas
(bilirrubina,hematuria...)
NITRITO
Sensibilidad 0,07 mg/dl
Infección
bacteriana
Significación clínica (gramreducen
nitrato
•Dieta
rica en hortalizas
a nitrito: E.coli, Kleb, Enterobacter,
Citrobacter, Proteus)
Consideraciones
Reacción de Griess
Interferencias
y legumbres (nitratos)
•Excluir antibióticos
•Orina primera hora
(>4h en vejiga)
No vale para gram+,
enterococos, levaduras..
REACCIÓN DE GRIESS
BACTERIAS
nitrato
nitrito
Amina aromática
(Sulfanilamida)
sal de diazonio
Rosa rojizo
quinolina
INTERFERNECIAS
NEGATIVAS




POSITIVAS
 Reposo
Ascorbato
Urobilinógeno  Medicamento (color orina rojo)
pH bajo
Micciones frecuentes
GLUCOSA
Glu filtrada es reabsorbida en túbulo proximal
•Diabetes Mellitus
hasta un máximo.
•Alteraciones
Rango ( NORM- 50-100-300-1000
endocrinas mg/dl)
Sensibilidad 40 mg/dl•Enfermedad
Significación clínica
pancreática
•Fármacos
Reacción enzimática especifica
Interferencias
•Alteraciones
metabólicas
REACCION
2 etapas
Glucosa oxidasa
Glucosa
O2 aire
Gluconato
H2O2 + Cromóforo incoloro
Glucosa peroxidasa
No detecta lactosa,
galactosa ni
fructosa
Compuesto
coloreado
INTERFERENCIAS
NEGATIVAS








POSITIVAS
Ascorbato
Cetonas
 Oxidantes potentes
Salicilatos y derivados
El uso de tetrametilbenzidina
Acido nalidixico
como cromóforo ha solucionado
Densidad
elevadade estas interferencias
la mayoría
Cefalosporinas
Bacterias ( metabolizan la glu)
Temperatura ( orinas refrigeradas pueden inhibir la
reacción ya q es una reacción enzimática)
pulmones
CUERPOS
CETÓNICOS
Rango ( NEG-5-15-50-150 mg/dl)
•Causa Metabólica, DM
•Factores dietéticos,
Sensibilidad 5 mg/dl
inanición, malabsorción
•Aumento de
Significación clínica: requerimientos
metab ác. grasos
•Vómitos, diarreas
Nitroprusiato Na
Legal
AcReacción
Acetoacético de Ph
Compuesto
>7
(grupo metilcetona)
colorado
INTERFERENCIAS
ACETOACETATO
NEGATIVAS



Acetilsalicílico (oxida
al ac.acetoacético)
Bacterias (metabolizan
el ac.acetoacético)
Humedad
(nitroprusiato pierde
actividad)
POSITIVAS



Ftaleinas ( uso en pruebas
funcionales hepáticas y
renales)
Fcos con grupos
sulfhídricos ( IECA,
levodopa, acetlcisteína)
Orinas coloreadas
BILIRRUBINA
Producto metab grupo hemo (no conjugada
unida a alb, en hígado es conjugada con ác.
glucurónico y excretada con la bilis al intestino)
Rango ( NEG- 1-3-6 mg/dl)
•Ictericia obstructiva
Sensibilidad  0.6 mg/ dl•Cirrosis
•Hepatitis
Significación
clínica
•Sind. Rotor y
.
Dubin Johnson
Reacción
Interferencias
DIAZOREACCIÓN
Sal de diazonio + UROBILINOGENO
BILIRRUBINA
medio ácido
Compuesto azoico
Compuesto azoico
rosa-violeta
INTERFERENCIAS
NEGATIVAS




POSITIVAS
 Fcos q colorean orina
Ascorbato
Nitritos
Fcos
Tiempo y temperatura (inestable y sensible a la luz)
UROBILINOGENO
•Anemias
Rango (NORM-1-4-8-12 mg/
dl)
hemolíticas
•Insuficiencia
Sensibilidad 1.4 mg/dl
hepática
•Extravasación
Significación clínica
sanguínea
Reacción mejor que R. Erlich
Interferencias
.
DIAZORREACCIÓN
Sal de diazonio +
UROBILINOGENO
ph< 7
Compuesto azoico
rojo
INTERFERENCIAS
NEGATIVAS


Nitritos
Tiempo (fotooxidación)
POSITIVAS

Fcos q colorean orina
SANGRE
Rango (NEG -10-25-50-100-150-250 /µl)
Sensibilidad  7 eritrocitos/µl.
(Detecta
•Enfermedades
eritrocitos intactos, lisados, hemoglobina, mioglobina y cilindros hemáticos)
Significación clínica
Reacción
Interferencias.
glomerulares
•Litiasis
•Neoplasias
•Infecciones (cistitis...)
•Fármacos
(anticoagulantes)
•Traumatismo
REACCIÓN
Actividad Peroxidasa grupo Hemo
Peróxido de hidrógeno
Oxigeno
(presente en la zona reactiva)
Cromóforo
reducido
Cromóforo
oxidado
(coloración azulverdosa)
INTERFERENCIAS
NEGATIVAS




Ascorbato (propiedades reductoras)
Nitritos
Proteínas
Aceptores no específicos del
oxigeno (ácido úrico...)
POSITIVAS


Presencia de oxidantes
Peroxidasas microbianas
UF-100
CITOMETRIA DE FLUJO
 Citómetro de flujo con enfoque hidrodinámico que a través de
2 canales, uno para bacterias y otro para el resto de células, y
previa tinción fluorescente, cuenta las partículas de la muestra
integrando 3 señales de medición: tamaño, estructura y
fluorescencia
Analizan células en suspensión que interfieren de forma
individual con una fuente de luz provocando la emisión de
señales luminosas que permite diferenciar poblaciones celulares
dentro de la muestra analizada.
Dos tinciones con colorantes fluorescentes
Canal exclusivo de bacterias
PARAMETROS
ANALISIS
ALARMA
Eritrocitos (0-4269/µl)
Levaduras
Leucocitos (0-3724 /µl)
Cilindros patológicos
Células escamosas (0-147 /µl)
Células redondas pequeñas
Cilindros (0-50 /µl)
Cristales
 Bacterias (199-12762 /µl)
Espermatozoides
COMPARACIÓN CON EL MICROSCOPIO
UFC
MICROSCOPIO
OBSERVACION
Cast positivo
No se observan cilindros
La centrifugación los rompe.
Mucus
Si no hay proteínas, clasif errónea
Levaduras
Eritrocitos
Clasificación errónea
WBC
Leucocitos y trichomonas
No detecta trichomonas
Cristales negativos
Cristales
Alta concentración de
hematíes
Abundantes bacterias o cristales
de oxalato cálcico
Clasificación errónea
Los WBC,cuerpos grasos o cristales de fosfato pueden ser erróneamente
clasificados como SRC. (Alarma SRCMicroscopio)
muchas gracias por
vuestra atención!!
pH
VN: 4,5-8
Valorar con el resto de
parámetros
pH
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
pH: Refleja la capacidad renal para mantener una concentración adecuada de hidrogeniones
• En los adultos sanos varía entre 4.5 y 8.
– ↓:
• Tras ayuno nocturno
• Acidosis
• Dieta proteica
• Deshidratación
• Diarrea
• Bacterias productoras de ácido
– ↑:
• Tras comidas
• Alcalosis
• Dieta vegetariana
• Vómitos
• Bacterias que degradan urea (p.e. Proteus )
PROTEÍNAS
•
•
•
•
•
•
•
– Los individuos sanos excretan aproximadamente 100 mg/dia
de proteínas.
– El glomérulo normal solamente es permeable a proteínas con
peso molecular <20 kD. Una vez filtradas, las proteínas se
reabsorben en el túbulo proximal.
– Transitoria: ejercicio físico intenso, embarazo, frio extremo,
estrés, fiebre…
– Persistente
• Glomerular : No selectiva, predomina Albumina
• Tubular : Predominan proteinas de bajo peso molecular
(beta-2-microglobulina)
• Sobrecarga : Hemoglobinuria, Mioglobinuria, Bence- Jones
GLUCOSA
– Hiperglucemia.
– Umbral 180 mg/dL
– Existe en: DM, glucosuria renal,
intolerancia a la glucosa, hipertiroidismo,
hiperpitituarismo, sdme Cushing....
CUERPOS CETÓNICOS
– DM
– Precozmente en niños en ayunas
– Adultos con inanición
– Ayuno prolongado (dietas extremas,
anorexia nerviosa).
- Si vómitos y diarrea.
- Fiebre
LEUCOCITOS (PIURIA)
Recomendable el cultivo microbiológico
• Si negativo: inflamación no infecciosa
• Si positivo infección aguda.
– Sugestivo de infección los acúmulos
leucocitarios.
– En mujeres pueden aparecer por
contaminación vaginal
•
NITRITOS



Presencia de bacterias que reducen nitratos
a nitritos. Escherichia coli, Klebsiella,
Proteus, Staphylococcus, Pseudomonas…
Bacterias que no dan positiva la reacción:
(cocos gram positivos) Enterococci,
Streptococci, o Staphylococci
Puede haber infección y ser los leucos
positivos y los nitritos negativos.
UROBILINOGENOBILIRRUBINA
•
•
Urobilinogeno: Aumenta cuando existe un
recambio excesivo de bilirrubina en los
procesos hemolíticos y en una eritropoyésis
ineficaz. Ausente en la obstrucción biliar
completa.
Bilirrubina: Aumenta en enfermedades
caracterizadas por un excesivo recambio de
Hb debido a una disminución de la vida media
de los hematíes. Bb positiva y Ubg ausente
característico de ictericia obstructiva.
SANGRE
•
•
•
Causas urológicas: traumatismos, litiasis,
neoplasias, hiperplasia benigna de próstata,
angiomas...
Enfermedades generalizadas con
predisposición a hemorragias: púrpuras,
leucemias...
Causas nefrológicas: glomerulonefritis,
riñón poliquístico, vasculítis, infecciones...
ANALISIS DEL SEDIMENTO
URINARIO
•
•
•
•
•
Microscopía óptica
Centrifugación 1500-2000 rpm de un
volumen de orina de aproximadamente 10
mL de orina durante 5 min.
Decantación del sobrenadante y agitación
del sedimento.
Gota entre porta y cubre.
De menos a más aumentos.




Bacterias: Con forma de cocos o de
bacilos.
Trichomonas vaginalis: Movilidad.
Estructuras redondeadas u ovaladas con
flagelos.
Hongos y esporas: Son incoloras de forma
ovalada, algo más pequeños que los
eritrocitos.
Espermatozoides