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MANUAL DE PRÁCTICAS DE CITOEMBRIOLOGIA ESCUELA DE BIOLOGIA UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA 2013 UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS Y FARMACIA ESCUELA DE BIOLOGIA DEPARTAMENTO DE ZOOLOGIA GENETICA Y VIDA SILVESTRE Tercera edición: Jennifer Hernández Palacios Auxiliar de cátedra. Departamento de Zoología, Genética y Vida Silvestre Universidad de San Carlos de Guatemala Jenniffer Ortiz Profesora Departamento de Zoología Genética y Vida Silvestre Universidad de San Carlos de Guatemala Segunda Edición: Jorge Alexis Maza Vivar Auxiliar de Cátedra Departamento de Zoología, Genética y Vida Silvestre Universidad de San Carlos de Guatemala Andrea Cabrera Arreola Profesora Departamento de Zoología, Genética y Vida Silvestre Universidad de San Carlos de Guatemala Primera edición elaborada por: Carlos Chinchilla Profesor 2009-2010 Departamento de Zoología, Genética y Vida Silvestre Universidad de San Carlos de Guatemala MANUAL DE PRÁCTICAS DE CITOEMBRIOLOGIA Tercera edición Guatemala, enero de 2013 Lineamientos y Evaluación de Laboratorio Introducción: El Laboratorio de Citoembriología tiene como objetivo principal ayudar al estudiante a comprender los fundamentos revisados en la clase teórica. Además con la ayuda de material biológico, láminas fijas o frescas, así como los procedimientos de preparación, montaje y descripción de las mismas, les permitirán una visualización adecuada de los tejidos y estructuras. Metodología En todas las prácticas se contara con un instructor quien es el responsable de guiar y evaluar a los estudiantes en el desarrollo de las mismas. Durante el laboratorio se realizaran diferentes actividades: preparaciones y observación de láminas tanto fijas como frescas, también la observación y descripción de estructuras macroscópicas de material biológico fresco. Desarrollo y Evaluación En cada práctica, se realizara una evaluación por medio de un examen corto de lo que será tratado en la práctica. Esto incluye un cuestionario (antecedentes) que debe ser realizado previamente. Al finalizar cada práctica su instructor revisara lo trabajado durante el laboratorio dejando constancia de la aprobación de su trabajo mediante una firma. Evaluación: Activida d Ponderación Reportes 8 puntos Cortos 8 puntos Parcial I 2 puntos Parcial II 2 puntos TOTAL 20 PUNTOS Calendario de Actividades No. Titulo Fecha 0 lineamientos 25 de enero 1 Biología del sexo, comportamiento reproductivo 1 de febrero 2 Anatomía del aparato reproductor masculino y espermatogénesis 8 de febrero 3 Aparato reproductor femenino de los mamíferos y estructura del huevo de aves 15 de febrero 4 Ovogénesis y Ovulación 22 de febrero 5 Segmentación, Nidación y Placentación 1 de marzo A 1er examen parcial de laboratorio 8 de marzo 6 Preservación y fijación de especímenes animales 15 de marzo 7 Tejido sanguíneo y sistema circulatorio 5 de abril 8 Tejido nervioso y sistema nervioso 12 de abril 9 Tejido epitelial, tegumento, glándulas aparato digestivo 19 de abril 10 Tejido óseo y cartílago 26 de abril 11 Tejido muscular 3 de mayo B Examen final 10 de mayo Reglamento de Laboratorio: Es obligatorio presentarse con bata y el material que el instructor indique para la realización de la práctica. Todos los alumnos deben llevar su manual de laboratorio. Para tener derecho a examen final de laboratorio (y del curso en general), es imprescindible asistir al 80% de las practicas. Si el alumno llega tarde al laboratorio, pierde derecho al examen corto. Deben llegar no más de 10 minutos después de la hora. Durante el laboratorio se hablará en voz baja, para mantener un clima propicio que permita la concentración en las respectivas actividades. Queda terminantemente prohibido el uso de teléfonos celulares, reproductores, ipod, etc, así como también ingerir alimentos y fumar dentro del laboratorio. Durante el desarrollo de la practica los estudiantes deberán seguir los lineamientos establecidos en el instructivo; realizando los esquemas, descripciones y observaciones correspondientes. Finalmente el estudiante deberá presentar en el próximo día de laboratorio un reporte de lo observado y desarrollado en la práctica anterior, el cual debe realizarse en base al instructivo de presentación y elaboración de reportes, además de incluir el visto bueno de su instructor. Lineamientos para la elaboración de los reportes Realizar los reportes a computadora. Tamaño de letra No. 12 imprimirlas en forma dúplex (pueden reutilizar el papel) Esquema del reporte Resumen: debe de realizarse una breve revisión bibliográfica de los taxones observados en el laboratorio y de lo trabajado en el, contestando las siguientes preguntas: ¿qué se hizo? y ¿como se hizo? no extenderse mas de 25 líneas. Descripciones: realizar la correcta descripción de cada uno de los esquemas, únicamente lo que se logre observar durante la práctica. Se realiza en forma de tablas, indicando el número de cada esquema situado en anexos con su respectiva descripción. Discusión: aquí debe escribirse sobre lo que se logro observar y compararlo con la bibliografía, además de lo que no se logro ver y porque no. Debe de incluir la cita bibliográfica correspondiente. Conclusiones: como mínimo tres conclusiones. Referencias bibliográficas: tres referencias como mínimo (libros, artículos e internet), no se aceptan copias textuales, ni citas de sitios tales como: Wiki pedía, monografías.com, rincón del vago, etc. Anexos: Se adjuntan los esquemas obtenidos durante la práctica. Numerando y titulando cada uno, las estructuras deben estar correctamente señaladas. Solo se tomaran en cuenta los esquemas con el visto bueno del instructor. Ponderación del reporte: JMHP 2013 Componente Ponderación Resumen 10 puntos Descripcione s 20 puntos Esquemas 15 puntos Discusión 35 puntos Conclusiones 15 puntos Bibliografía 5 puntos TOTAL 100 PUNTOS Índice Índice ........................................................................................................................................................6 Práctica No.1 ............................................................................................................................................8 Biología del sexo y comportamiento reproductivo ..................................................................................8 Práctica No.2 ......................................................................................................................................... 11 Anatomía del aparato reproductor masculino y espermatogénesis .................................................... 11 Práctica No.3 ......................................................................................................................................... 16 Anatomía del aparato reproductor femenino y ovogénesis ................................................................ 16 Práctica No.4 ......................................................................................................................................... 23 Segmentación, nidación e implantación .............................................................................................. 23 Práctica No.5 ......................................................................................................................................... 27 Placentación ......................................................................................................................................... 27 Práctica No.6 ......................................................................................................................................... 31 Histogénesis y Organogénesis .............................................................................................................. 31 Práctica No.7 ......................................................................................................................................... 38 Sistema Circulatorio y Sistema Nervioso .............................................................................................. 38 Práctica No.8 ......................................................................................................................................... 44 Sistema Tegumentario y Tejido epitelial .............................................................................................. 44 Práctica No.9 ......................................................................................................................................... 56 Sistema Digestivo, Respiratorio y Urogenital ....................................................................................... 56 Práctica No.10 ....................................................................................................................................... 63 Sistema Esquelético y Tejido conectivo ............................................................................................... 63 Práctica No.11 ....................................................................................................................................... 74 Sistema Muscular y Tejido muscular ..................................................................................................... 74 MANUAL DE PRÁCTICAS DE CITOEMBRIOLOGÍA, USAC Práctica No.1 Biología del sexo y comportamiento reproductivo INTRODUCCIÓN Desde el punto de vista evolutivo, reproducirse y pasar copias de los genes es el acto más importante en la vida de cualquier animal. El modo de reproducción que adoptan la mayoría de animales (sexo) parece ser genéticamente muy costoso. De ser tan costoso, ¿Cuál es la naturaleza de este costo? ¿Y por qué el sexo está tan difundido? Existen dos sexos: macho y hembras. ¿Por qué son tan diferentes en comportamiento y morfología? Muchas de estas características están asociadas con el apareamiento y algunas son extremas y muy costosas. Realizaremos un análisis a través de la revisión de estudios de caso para comprender los planteamientos antes expuestos. OBJETIVOS Que el estudiante al finalizar de la práctica: Se familiarice con conceptos básicos sobre sexualidad y comportamiento reproductivo Interpretar gráficos y a partir de ellos deducir patrones relacionados a sexualidad animal y comportamiento reproductivo EJERCICIOS Luego de realizadas las dos lecturas sobre sexualidad animal y comportamiento reproductivo realice los siguientes ejercicios: 1. El gráfico (a) muestra la relación entre el tamaño de un regalo nupcial (alimento) y el número de esperma transferido durante la cópula de la mosca escorpión o Mecoptera y (b) muestra la relación entre la duración de la cópula y la cantidad de esperma transferido. A. Explique cuál es la relación existente entre estos aspectos B. ¿Qué ventaja reproductiva tiene para el macho conseguir un alimento grande para dárselo 8 MANUAL DE PRÁCTICAS DE CITOEMBRIOLOGÍA, USAC de obsequio a la hembra? ¿Qué costo implica esto para el macho? 9 MANUAL DE PRÁCTICAS DE CITOEMBRIOLOGÍA, USAC 2. De los tres casos siguientes de nidación y proporción de sexo de tortugas, analice y responda las preguntas: Una especie de tortuga marina puso nidos tanto en la playa como en una zona con vegetación. Los nidos en la playa produjeron en su mayoría hembras, mientras que los nidos que puso entre la vegetación eran mayormente machos. Otra especie de tortuga colocó sus nidos únicamente en playa, cuando se revisaron los sexos de las tortugas producidas, se dieron cuenta que los huevos que estaban colocados en los bordes u orilla de los nidos eran machos, mientras que los que estaban en el centro del nido eran hembras. Otra especie de tortugas puso nidos en dos temporadas, una durante los meses de marzo-mayo y otra durante los meses de noviembre-enero (asuma que las condiciones climática son similares a los trópicos. Durante la primera temporada más del 80% de los huevos que puso fueron hembras, mientras que durante la segunda temporada fue similar la proporción de hembras y machos. A. ¿Qué factor(es) podría(n) estar determinando el sexo de estas especies de tortugas? B. En los últimos años se ha evidenciado el cambio climático alterando la temperatura. ¿Qué implicaciones tendría un incremento en la temperatura en la supervivencia de las especies? ¿Qué medidas podrían tomarse para la conservación de estas especies? 3. El siguiente gráfico muestra el éxito reproductivo en la mosca de la fruta (Drosophila melanogaster) A. Analice la relación entre el número de apareamientos y número de descendencia producida. B. ¿Por qué razón se da esta diferencia de éxito reproductivo entre machos y hembras? 1 0 MANUAL DE PRÁCTICAS DE CITOEMBRIOLOGÍA, USAC 4. En un estudio realizado con aves de la especie Euplectes progne se observó el número de nidos por macho en su territorio y se relacionó con el largo de la cola del mismo (gráfico a). Luego se realizó un experimento de corte y pegado de cola en los machos en el que obtuvo el gráfico (b). A. ¿Qué puede interpretar de las graficas y qué relación tienen con el éxito reproductivo? B. ¿Qué papel juegan las hembras en la determinación de estas diferencias? C. Además de belleza física que podría atraer a las hembras ¿Qué otras características implican una cola muy larga? ¿Qué consecuencias traería para el macho si la cola fuera demasiado larga? 5. En muchas aves se pueden observar diferencias muy marcadas entre machos y hembras (dimorfismo sexual), como se muestra en las aves de la figura a y b. Mientras que otras aves, no presentan un dimorfismo muy marcado (figura d) A. ¿Por qué cree que existe dimorfismo sexual en algunas aves? B. ¿Cómo esperaría que fuera el sistema de apareamiento entre los dos grupos? ¿En qué tipo de aves observaría especies monógamas y cuáles observaría comportamientos de cortejo muy elaborados? C. ¿Qué ventajas y desventajas considera que podría tener el dimorfismo? 1 1 Práctica No.2 Anatomía del aparato reproductor masculino y espermatogénesis INTRODUCCIÓN Aparato reproductor del macho Testículos Los testículos son órganos pares, su función es producir espermatozoos o gametos masculinos. En mamíferos se encuentran fuera de la cavidad pélvica, sostenidos por el escroto y el musculo Dartos, (excepto elefantes, cetáceos y desdentados), pudiendo estar situados detrás o delante del pene. En aves, reptiles y anfibios se encuentra dentro de la cavidad pélvica o abdominal. Internamente los testículos contienen unas estructuras conocidas como túbulos seminíferos (micro conductos donde se lleva a cabo la producción de espermatozoos o espermatogénesis) y una estructura llamada rete testis, que tiene como función la de recolectar los epermatozoos y luego trasladarlos hacia el epidídimo. En especies que presentan comportamiento reproductivo estacional los testículos pueden aumentar de tamaño durante la etapa reproductiva, pudiendo aumentar hasta 300 veces de tamaño durante la temporada reproductiva, como en el caso de las aves. En los testículos se lleva a cabo la producción de testosterona, a través de unas células especiales situadas entre los túbulos seminíferos llamadas células de Leydig y la producción de estrógenos a través de las células de Sertoli (estas se encuentran en los intersticios entre los túbulos seminíferos). Epidídimo Es un saco colector de los espermatozoos provenientes de los testículos. En él los espermatozoos terminan su maduración y adquieren movilidad. Conductos deferentes Llevan los espermatozoos desde el epidídimo hasta el conducto eyaculador. En peces desembocan en los conductos mesonéfricos (función urogenital) y luego en la cloaca, en anfibios desembocan en una estructura llamada urodeo la cual desemboca a la cloaca. Conducto eyaculador Es un segmento en forma de tubo conectado directamente con la vesícula seminal y la glándula bulbo uretral, luego desemboca en la uretra la cual a su vez se comunica con la próstata. Este conjunto de glándulas secretan los líquidos que al combinarse con los espermatozoos forman el semen. Órgano copulatorio Esta estructura es responsable de que el eyaculado pueda ser colocado dentro de la vagina o el útero. En primates y el ser humano se encuentra fuera de la cavidad pélvica, mientras que en otras especies esta alojado en la cavidad pélvica o cavidad abdominal. La morfología y tamaño puede variar entre especies. Por ejemplo, en carnívoros, algunos primates y roedores se presenta una estructura rígida accesoria al pene denominado báculo o hueso peniano, en felinos presenta filamentos en forma de espinas que estimulan la ovulación de la hembra. En marsupiales el pene es doble, correspondiendo a la anatomía del útero de la hembra. Por otro lado en las serpientes se presentan dos hemipenes, en los cocodrilos y en las tortugas el pene es muscular y carece de uretra, en vez de esto hay un canalículo central por donde pasa el semen. Uretra Conducto que conduce orina y semen al exterior de la cavidad pélvica. Esta estructura puede sobresalir más allá del pene en los ungulados, con el fin de lograr que la eyaculación se de directamente al interior del útero (en el resto de especies la eyaculación se lleva a cabo en la vagina). Espermatogénesis Es el proceso de formación celular que se lleva a cabo dentro de los testículos, donde cumplen función de producción de gametos y de secreción hormonal. Cada testículo esta recubierto por una capsula blanca, gruesa y muy resistente denominada túnica albugínea, constituida por tejido conectivo. En el borde posterior existe un engrosamiento de la cápsula denominado mediastino, a partir de éste se originan tabiques delgados que se extienden en dirección radial, dividiendo al testículo en aproximadamente 250 compartimientos cónicos denominados lobulillos del testículo, los cuales contienen las porciones terminales de los túbulos seminíferos que miden de entre 30 y 70 cm de largo y 250 micras de diámetro. La longitud de los túbulos del ser humano pueden exceder los 400 m. Dentro de los túbulos seminíferos se lleva a cabo un proceso de transformación celular que tiene como producto la formación de los gametos masculinos, y recibe el nombre de espermatogénesis. La espermatogénesis en especies silvestres depende de su naturaleza y la estacionalidad, por el contrario, en el ser humano se da de manera constante una vez iniciada la pubertad y no se detiene hasta la senectud, se inicia entre los 13 y 16 y puede terminar a los 80 años o más. La espermatogénesis dura dos meses en el ser humano, en las especies domesticadas existen variaciones y en las especies silvestres se tienen muy pocos datos: Cerdos: 8 días Bovinos: 14 días Roedores: 12 días Entre los factores reguladores de la espermatogénesis se pueden mencionar: La hormona luteinizante (LH) y Folículo estimulante (FSH), Testosterona y Estrógenos. Entre los órganos y células involucradas en la espermatogénesis se encuentran: Hipófisis, Células de Leydig y Sertoli. El proceso inicia cuando se activan las espermatogonias y se dividen por mitosis, luego crecen y sufren cambios hasta convertirse en espermatocitos primarios (2n). Cada espermatocito primario sufre división de reducción de su carga genética, primera división meiótica que da origen a dos espermatocitos secundarios con carga diploide (n). Ahora cada uno de los espermatocitos secundarios sufre la segunda división meiótica para formar dos espermatides (n), las espermatides sufren cambios celulares por medio de los cuales se transforman de forma gradual en espermatozoos (n), en un proceso denominado espermiogénesis. Los cambios celulares que se dan durante la espermiogénesis son: · Condensación del núcleo · Eliminación del citoplasma · · · · Formación del acrosoma Formación del cuello, pieza intermedia y cola Eliminación de la mayor parte del citoplasma Acondicionamiento de una sola mitocondria en el cuello del espermatozoo Posterior a la espermiogénesis los espermatozoos viajan hacia el epidídimo donde maduran funcionalmente (proceso de capacitación). OBJETIVOS Que el estudiante al finalizar la práctica sea capaz de: Conocer e identificar las estructuras anatómicas más importantes del aparato reproductor masculino. Identificar a nivel histológico las etapas en el desarrollo de las células germinativas. MATERIALES Microscopios Estereoscopios Papel limpia lentes Bandejas de aluminio Mango de bisturí Hoja de bisturí Laminas fijas de epidídimo corte de PROCEDIMIENTO a) Estudio de la anatomía del aparato reproductor Tome un aparato reproductor de un mamífero, de un pez, de un reptil y un ave, un testículo y colóquelos en bandejas de aluminio, observe y esquematice las siguientes estructuras: túnica albugínea ligamento escrotal mediastino plexo pampiniforme rete testis glándulas accesorias uretra conducto eyaculador epidídimo Realice una descripción tomando en cuenta las diferencias estructurales que pueda encontrar en los diferentes taxa. b) Estudio histológico de las células germinales masculinas En cortes transversales de testículo de rana, rata, mapache, venado, ser humano, localice los túbulos seminíferos y con los objetivos de 10X y 40X, observe y esquematice lo siguiente: espermatogonias células de Sertoli espermatides espermatocitos primarios espermatozoos células de Leydig En las mismas láminas localice la rete testis, observe y esquematice lo siguiente: Red de conductos interconectados Luz de los conductos Epitelio columnar simple Vellosidades luminales En cortes transversales de epidídimo de conejo, con los objetivos 10x y 40x observe y esquematice los siguiente Luz del conducto epididimario Agregados de espermatozoos Esterocilios CUESTIONARIO 1. De el nombre de las dos hormonas relacionadas con la producción de espermatozoos 2. ¿Qué órganos y células están involucradas directamente con la espermatogénesis? 3. ¿Cuáles son los principales cambios que sufre la espermátide para convertirse en espermatozoo maduro durante la espermiogénesis? 4. ¿Cuántos espermatozoos se pueden originar a partir de un espermatocito primario? 5. Investigue la función de las células de Sertoli 6. ¿Qué hormona es secretada por las células de Leydig? 7. ¿En dónde son almacenados los espermatozoos cuando no hay actividad sexual? 8. ¿Qué función cumple la próstata? 9. Investigue la función del acrosoma 10. Esquematice las partes de un espermatozoo Práctica No.3 Anatomía del aparato reproductor femenino y ovogénesis INTRODUCCIÓN Aparato reproductor de la hembra Tiene como funciones específicas producir gametos femeninos, ser receptor de los gametos masculinos, proporcionar un medio y un ambiente adecuado para la fecundación de los óvulos y el desarrollo embrionario del nuevo individuo Genitales externos: son propios de la mayoría de mamíferos, sirven como receptáculo o plataforma de recepción en el momento de la copula. Cumplen la función de atraer al macho en etapa de celo, etapa durante la cual se puede notar hinchazón y cambios en la coloración (como en carnívoros y omnívoros). Están conformados básicamente por la vulva, labios mayores y menores, clítoris y el vestíbulo vaginal. Genitales internos: comprende estructuras reproductivas como los ovarios, el útero, las trompas uterinas y la vagina. El útero y los ovarios son las estructuras principales involucradas directamente con los ciclos reproductivos, la fecundación y la gestación. Obedecen a factores hormonales, durante el inicio de la pubertad y los ciclos reproductivos. Control del ciclo ovárico: Al inicio del ciclo ovárico los niveles hormonales se encuentran muy bajos. En ese momento el hipotálamo secreta la hormona liberadora de gonadotropinas (GnRH), la cual estimula a la hipófisis anterior (en el ser humano corresponde al inicio o día 1 de la menstruación). La hipófisis anterior produce la hormona folículo estimulante FSH (fin de la menstruación o día 5 en humanos), luego la FSH hace que el folículo primario termine su primera división meiótica e inicie la segunda división (día 7). Se da un aumento de células foliculares y se aumenta la producción de estrógenos (día 10). Los altos niveles de estrógenos estimulan al endometrio e hipotálamo el cual responde secretando la hormona luteinizante o LH (día 11). Las hormonas LH y FSH alcanzan sus niveles máximos, combinan sus efectos y logran así que termine la maduración del folículo de De Graaf (día 12). De forma repentina los niveles de estas hormonas caen (día 13), y ocurre la ovulación (día 14). Ovulación Durante el ciclo ovárico el folículo secundario se encuentra cerca de la superficie del ovario, previo a la ovulación se forma un abultamiento en la superficie del ovario por efecto del folículo, llamado estigma. Antes de la ovulación las Fimbrias de la trompa uterina o de Falopio se acerca al ovario. Se rompe el folículo de De Graaf por el estigma, el óvulo y el líquido folicular se introducen en el infundíbulo de la trompa uterina, y el óvulo es transportado por peristaltismo a través de la trompa uterina hacia el útero. Generalmente la fecundación se da en la trompa uterina. Si no ocurre la fecundación el óvulo se absorbe en el útero. Si hay fecundación, el ovocito secundario concluye su segunda división meiótica, el óvulo fecundado se implanta, se mantiene el endometrio y se detiene el ciclo ovárico normal. Estructura del huevo en aves El huevo de las aves al igual que el de los reptiles, es una estructura grande y hasta cierto punto compleja, que puede contener un óvulo fecundado. Su diseño y estructura permite el desarrollo de un huevo fuera del tracto reproductivo materno. Se compone de estructuras como la cáscara la cual esta constituida de carbonato de calcio, las membranas fárfaras y las chalasas. Su gran contenido de albúmina y vitelo permiten el desarrollo embrionario sin mayor dificultad. El ovocito se encuentra representado por una estructura pequeña discoidal alrededor del disco germinal, donde se encuentra el material genético. OBJETIVOS Que el estudiante al finalizar la práctica sea capaz de: Describir las estructuras que conforman el aparato reproductor femenino de los mamíferos. Reconocer los componentes morfológicos del huevo de ave y entender su función. Conocer la estructura interna del ovario del mamífero e identificar sus partes constitutivas. Identificar los diversos estados de desarrollo de los folículos ováricos y entender el ciclo reproductivo de la hembra de mamífero. Identificar en el microscopio los diferentes estados de las células germinales femeninas. MATERIALES Bandejas de aluminio Pizeta con agua destilada Mango de bisturí Hoja de bisturí Microscopios Objetivo de inmersión Aceite de inmersión Laminas con los tejidos a observar Papel limpia lentes Huevo crudo de gallina Huevo cocido de gallina PROCEDIMIENTO a) Estudio del oviducto de ave en fresco Observe el esquema que se le presenta a continuación y localice cada una de las partes señaladas en un oviducto fresco de gallina. Compare, realice sus anotaciones, discuta con sus compañeros de grupo y esquematice para su reporte: Figura 3.1 Oviducto Aves b) Estudio de la estructura del huevo de ave Tome un huevo de gallina, colóquelo en una bandeja de aluminio, rompa con mucho cuidado el extremo chato del huevo, retire la cáscara dura, observe las membranas fárfaras del cascaron, y la cámara de aire. Coloque el contenido en la bandeja con agua destilada y auxiliándose con el esquema que se le presenta observe: Vitelo Chalazas Albúmina densa Disco germinal Albúmina rala Membrana de la yema Con la ayuda de un bisturí realice el corte sagital de un huevo cocido de ave y observe las siguientes estructuras: Disco germinal Capa oscura de la yema Latebra Membrana de la yema Capa clara de la yema Figura 3.2 Conformacion del Huevo Figura 3.3 Desarrollo embrionario en el Huevo c) Estudio comparativo del tracto reproductivo en mamífero Tome los tractos reproductivos de cerca, vaca y perra, colóquelos en una bandeja de aluminio localice y compare la forma, la situación y el tamaño de las siguientes estructuras: Vulva Cuernos uterinos y ovario de cerda Vagina Ovarios Útero Realice un corte transversal de ovario, identifique la médula y la corteza ovárica. Discuta con sus compañeros las diferencias o similitudes encontradas, esquematice y realice sus anotaciones para el reporte d) Estudio histológico de las células reproductivas Observe un corte transversal del útero no grávido de coneja y uno de mujer, identifique y describa: Capa serosa del útero Miometrio Endometrio Discuta sobre las diferencias estructurales presentes a nivel de Miometrio En cortes transversales de ovario de coneja, de rata, de suino y de mujer identifique, describa y esquematice lo siguiente: Epitelio Folículos secundarios Hilio ovárico Folículo de De Graaf Médula Tecas Corteza Cuerpo lúteo Estroma cortical Corpus albicans Folículos primordiales CUESTIONARIO 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. ¿Que funciones tienen los genitales femeninos externos en mamíferos? Investigue los términos: menstruación, menarquía, menopausia ¿Cuáles son las capas del endometrio que se esfacelan durante la menstruación? ¿Cuál es la función de la cloaca, durante la cópula y posterior reproducción? Esquematice y compare la cloaca de anfibios, reptiles y aves De al menos dos ventajas y dos desventajas de la fecundación externa ¿Cuáles son las diferencias entre ovíparo, vivíparo y ovovivíparo? ¿Qué papel juega el hipotálamo en el proceso ovulatorio? ¿De qué manera interactúan la hipófisis anterior con el hipotálamo en el proceso ovulatorio de los vertebrados? ¿Qué cambios ocurren en el endometrio al inicio del ciclo ovulatorio? ¿Cuál es la carga genética del oocito en el folículo de De Graaf? ¿Qué transformación se da a nivel del cumulus oophorus en el momento de la ovulación? ¿Qué hormonas participan en el proceso de la maduración de los folículos y la ovulación? ¿Que cambios ocurren en el aparato reproductor después de la menopausia Mencione la duración de los ciclos ováricos en: humanos, perro, conejo, felino, reptil, anfibio y pez; compare brevemente. Figura 3.4 Cortes de Ovario Figura 3.5 Folículo de Graaf, Cuerpos lúteos y Cuerpo Blanco Figura 3.6 Cambios en los ovarios y el útero durante el ciclo ovulatorio Práctica No.4 Segmentación, nidación e implantación INTRODUCCIÓN Segmentación: Una vez fecundado el óvulo éste se divide en dos células iguales (fase de dos células); por un proceso de división mitótica. Al continuar la mitosis se forman cuatro y ocho células (las nuevas células se denominan blastómeros). Al formarse ocho células ocurre el fenómeno de compactación. Continúa la división y se forman 16 células dando lugar a una estructura conocida como mórula (3 días después de la fecundación en el ser humano). La mórula se divide y se forma el blastocito, estructura con una cavidad, una masa celular externa y otra interna. La masa interna dará origen a los tejidos del embrión mientras que la masa externa dará origen al trofoblasto y placenta. Implantación y nidación: en el ser humano la implantación o nidación esta bien caracterizada. Al final de la primera semana la masa celular externa se divide en citotrofoblasto y sincitiotrofoblasto, este último se interna en el endometrio (estroma), a través de proyecciones celulares que forman una masa sin núcleos, alcanza algunos capilares y se establece nutrición directa con la circulación materna Por parte del sincitiotrofoblasto comienza la producción de gonadotropina coriónica humana (hCG), cuya función es mantener la actividad del cuerpo lúteo a lo largo de la gestación (las pruebas de embarazo detectan los altos niveles hCG). En este momento el citotrofoblasto ya presenta una membrana y una cavidad exocelómica. En el embrioblasto aparece una cavidad (cavidad amniótica), y se forman dos capas diferentes de células: El epiblasto y el hipoblasto, a estas dos capas se les conoce en conjunto como embrión bilaminar. La membrana y la cavidad exocelómica se modifican para formar el saco vitelino primario. El epiblasto se encuentra en comunicación con la cavidad amniótica y el hipoblasto en contacto con el saco vitelino primario, a partir del hipoblasto se forma una masa celular conocida como placa procordal (indica la región craneal del embrión). A partir de membrana la vitelina se genera mesodermo extraembrionario el cual se expande y rodea el saco vitelino y al saco amniótico, se forman espacios conocidos como lagunas en el sincitiotrofoblasto que se fusionan con capilares maternos marcando el inicio de la circulación úteroplacentaria. OBJETIVOS Que el estudiante al finalizar de la práctica sea capaz de: Identificar y describir la estructura histológica del útero grávido Describir los factores de mayor importancia para la implantación del óvulo fecundado Describa los procesos de transformación por los que atraviesa el blastocisto en el momento de su segmentación e implantación. MATERIALES Preparaciones fijas de huevo de estrella de mar Laminas de útero preñado de rata, conejo o cerda Microscopios Papel limpia lentes PROCEDIMIENTO a) Segmentación: en una preparación fija de huevo de estrella de mar observe y esquematice la mórula. b) Útero: en una preparación fija de útero de conejo (no preñada), identificar: Perimetrio Miometrio Endometrio i. Capa compacta ii. Capa esponjosa iii. Capa basal iv. Capa funcional Glándulas endometriales c) Nidación e Implantación: en laminas de útero preñado de rata conejo o cerda identifique, esquematice y describa lo siguiente: Desarrollo glandular del endometrio Implantación de la blástula Sincitiotrofoblasto Trofoblasto Mesodermo extraembrionario Epitelio de los vasos CUESTIONARIO 1. 2. 3. 4. 5. Investigue sobre los cambios que se llevan a cabo en el endometrio y los ovarios después de la implantación ¿Cuál es la función del sincitiotrofoblasto? ¿Cómo se relaciona la implantación del blastocisto con el desarrollo de un gran cuerpo lúteo? Realice un listado de las transformaciones que sufre el bastocisto inmediatamente después de la implantación Defina los siguientes términos: Gonadotrofina coriónica humana, Blástula, Blastocito, Embrioblasto, Citotrofoblasto, Mórula, Hipoblasto, Epiblasto, Placa Procordal, membrana vitelina, Endodermo, Mesodermo, Ectodermo, Saco Vitelino ESQUEMAS DE AYUDA Figura 4.1 Ciclo de vida de un anfibio Figura 4.2 Segmentación en vertebrados Figura 4.3 Proceso de Implantación Práctica No.5 Placentación INTRODUCCIÓN Formación de la placenta El desarrollo de la placenta varía entre las especies, por lo general, se le clasifica según sus relaciones estructurales con el útero y por su forma. La estructura se determina principalmente por las capas celulares de las membranas extraembrionarias y el útero, que separan los dos sistemas vasculares. Existen, como máximo, seis capas de células entre los dos sistemas y en algunas especies muchas de ellas se erosionan durante la fijación. Clasificación de la placenta por el nivel de invasión del útero Según la cantidad de capas presentes, la placenta puede ser clasificada como: Epiteliocorial donde el nivel de erosión no es significativo y los nutrientes deben atravesar el tejido conectivo, los epitelios y los endotelios materno y embrionario; Sindesmocorial (o Mesocorial), cuando el nivel de erosión es mínimo y los nutrientes para el citotrofoblasto tienen que atravesar el tejido conectivo, el epitelio embrionario y los endotelios materno y embrionario; Endoteliocorial cuando los nutrientes sólo tienen que atravesar los endotelios materno y embrionario y Hemocorial en donde el nivel de erosión es máximo a tal punto que los capilares maternos son erosionados quedando el citotrofoblasto embebido en la sangre materna, obteniendo de forma directa los nutrientes a continuación se presentan esquemas que ilustran mejor estos aspectos: Figura 5.1 Barreras placentarias Clasificación de la placenta por su morfología Según la forma del área de fijación al útero, la placenta puede clasificarse en: Difusa: cuando la fijación se da por medio de una serie de puntos (cotiledones) dispersos de manera difusa sobre la superficie de la placenta. Cotiledonar: cuando los puntos de fijación o cotiledones son mucho más evidentes. Zonal: cuando la fijación de la placenta con el útero es a nivel de una banda situada alrededor del punto medio de la placenta a manera de cinturón. Discoidal: cuando el punto de unión es a nivel de un disco grande. Figura 5.2 Tipos de Placenta. Cuadro No.1. Ejemplos comunes de tipos de placentas Funciones de la placenta La placenta tiene tres funciones principales: Síntesis de glucógeno Transporte de gases y nutrientes Secreción endocrina, hormonas como la hCG Estas funciones son importantes para conservar la gestación y promover el desarrollo normal del útero, el glucógeno que sintetiza la placenta, colesterol y ácidos grasos son fuente de energía para el embrión y feto en desarrollo. OBJETIVOS Que el estudiante al finalizar de la práctica sea capaz de: Identificar y describir los diferentes tipos de placenta por su implantación y por su forma Identificar y describir las estructuras más importantes de la placenta Identificar y describir los componentes histológicos en cortes de placenta MATERIALES Microscopios Papel limpia lentes Estereoscopios Láminas de placentoma Placentas de: o Humano o Cerdo o Jirafa o Vaca o Perro Bandejas de aluminio Guantes de látex PROCEDIMIETO a) Estudio anatómico de la placenta En las placentas de humano, cerdo, jirafa, vaca y perro identifique, dibuje y describa: Corion frondoso Corion calvo Amnios Cordón umbilical Gelatina de Warton Venas y arterias Surcos b) Estudio histológico de la placenta En cortes histológicos de placentoma (cotiledón) de bovino y de oveja, observe y esquematice las siguientes estructuras. Amnios Vellosidades coriónicas Arterias Células sanguíneas CUESTIONARIO 1. 2. 3. 4. 5. 6. ¿Qué es la decidua? Describa en qué consiste la unión útero plancenta ¿Qué es la membrana amniocorionica? Describa la forma en que funciona la circulación placentaria Esquematice un corte transversal de placenta y señale sus componentes Esquematice una vellosidad coriónica y sus componentes estructurales Figura 5.3 Placenta de los primates Práctica No.6 Histogénesis y Organogénesis INTRODUCCIÓN La asociación de células similares en láminas o agrupaciones forma tejidos y estos a su vez en conjunto forman órganos y sistemas. La diferenciación de los blastómeros producto de la segmentación, genera las tres capas de tejido germinal: ectodermo, mesodermo y endodermo. Estas capas se diferencian en tejidos formales a través del proceso de histogénesis. Posterior a dicho mecanismo la interacción de los tejidos y de las capas germinales produce la diferenciación de órganos (organogénesis). Frecuentemente dos capas germinales interactúan y se combinan para formar un órgano. Por ejemplo el tracto digestivo se deriva de endodermo y mesodermo. El músculo liso (mesodermos) se mezcla con el revestimiento del sistema respiratorio (endodermo). El integumento incluye una combinación de epidermis (ectodermo) y dermis (mesodermo). Figura 6.1 Derivados Ectodérmicos, Mesodérmicos y Endodérmicos Existen cuatro clasificaciones para los tipos de tejido maduro: tejido epitelial, conectivo, muscular y nervioso Tejido Epitelial Básicamente es un conjunto de células muy unidas, con muy limitada matriz extra celular en ellas. Usualmente cuenta con una capa basal que indica la polaridad del tejido. Según la forma de la célula puede clasificarse de la siguiente manera: Epitelio Simple Estratificado pseudoestratificado Forma Tejido/órgano Compuesto por una sola capa de células y Compuesto de más de Piel, boca y esófago (escamoso), uretra y una capa de células folículo de De Graaf en el ovario. tráquea (pseudoestratificado) Escamoso Cúbico Columnar o cilíndrico De Transición Células planas Revestimiento de las cavidades corporales. Endotelio: reviste las cavidades linfáticas y sanguíneas; y el mesotelio En forma de cubos Aparece muchos conductos Células alargadas y altas Tracto digestivo y otras estructuras tubulares Tipo de tejido Vejiga y conductos del sistema urinario pseudoestratificado Además existe otro tipo de tejido epitelial o epitelio glandular, que lo constituyen células secretoras y excretoras (glándulas endocrina y exocrina respectivamente). Pueden ser multicelulares o unicelulares. Entre las glándulas exocrinas existen dos tipos: tubulares y alveolares. Tejido conectivo Es una clasificación que incluye muchos tejidos que no se han incluido en las principales clasificaciones. Tienen en común el hecho de comunicar otros tejidos (tejido conectivo denso), o ser la matriz en la que están embebidos. También almacenan energía (adiposo), transportan gases y nutrientes (sanguíneo) y dan soporte (hueso y cartílago) Figura 6.2 Clasificación del tejido conectivo Tejido muscular Este tejido permite el movimiento del cuerpo y la reducción del diámetro de las viseras y los vasos. Se compone de células alargadas, las células musculares, que son capaces de acortarse. Se disponen de manera paralela y agrupada, formando haces y actuando cooperativamente. Por su longitud también se denominan fibras musculares. El músculo se clasifica en: Músculo estriado o esquelético: da soporte y por lo general es voluntario Músculo liso: permite el movimiento visceral y de los vasos, en su mayoría es involuntario Músculo cardiaco: similar al músculo liso pero particular del corazón y de un origen embrionario similar. Tejido nervioso Este tejido presenta únicamente dos tipos de células, las neuronas que se encargan de comunicar las señales o impulsos nerviosos enviados por el cerebro, o producidos por estimulación nerviosa. Las neuronas pueden ser: motoras, sensitivas e integradoras. El otro tipo celular es un conjunto de sustancias denominadas Neuroglia. Existen varios tipos de células gliales con diversas formas y funciones: astrocitos, oligodendrocitos, células ependimarias y de Schwann, microcitos y células satélites Figura 6.3 Tipos de Neuronas OBJETIVOS Que el estudiante al finalizar de la práctica sea capaz de: Identificar los principales tipos de tejido Describir la función general de los principales tipos de tejido Comparar las características generales entre los principales tipos de tejido MATERIALES Microscopios Papel limpia lentes Corte transversal de piel de mamífero Corte transversal de piel de anfibio (epitelial simple) Corte transversal de intestino de anfibio Corte transversal de glándula paratoide (epitelial estratificado o glandular) Corte transversal de embrión, grasa de rata (tej. adiposo) Corte transversal de tráquea Corte transversal de oreja Corte transversal de lengua de paloma (cartílago) Corte transversal de fémur embrionario (hueso) Células sanguíneas de perro y pollo (sangre) Corte transversal de miocardio de equino (músculo) Corte transversal de cerebelo de anfibio (nerviosas) Corte transversal y sagital de conejo tricómico PROCEDIMIETO a) Histogénesis Observe en el microscopio lo siguiente: En el corte transversal de piel de mamífero, intestino de anfibio, piel de anfibio y de glándula paratoide identifique y esquematice el tejido epitelial En el corte transversal de embrión y el montaje de grasa de rata identifique y esquematice el tejido adiposo En el corte transversal de tráquea de gallina, de lengua de paloma y de oreja de mamífero identifique y esquematice el tejido cartilaginoso, y además clasifíquelo (fibroso, hialino y elástico) En frotis sanguíneo de perro y de pollo identifique y esquematice las células de tejido sanguíneo En el corte transversal de miocardio de equino identifique y esquematice el tejido muscular (cardiaco) En el corte transversal de cerebelo de anfibio identifique y esquematice el tejido nervioso Para cada uno de los tipos de tejido observado, analice el órgano del cual deriva b) Organogénesis Observe en el microscopio lo siguiente: Corte transversal de embrión de conejo o Somitas o Hueso o Pulmones o Esófago o Corazón Corte tricrómico o Tubo neural o Riñón o Intestino o Hígado o Vértebra Corte sagital de embrión de rata o Cerebro o Corazón o Pulmón o Hígado o Intestino o Columna c) Derivados ectodérmicos, mesodérmicos y endodérmicos A continuación se presenta una lista de diferentes órganos y sistemas. Para cada uno de ellos diga cuál es su origen dérmico. Puede realizar tres columnas para clasificarlos o colocar el nombre a un lado. Riñones Pulmones Corazón Columna vertebral Globos oculares Cerebelo Epidermis Estomago Musculatura axial y esquelética Conducto urogenital Gónadas Hígado Hemisferios cerebrales Espina dorsal Dermis CUESTIONARIO 1. 2. 3. 4. Brevemente describa la neurulacion y la gastrulación Investigue en qué consiste la inducción (en la formación de tejidos y órganos) Describa el origen embrionario del tejido conectivo Esquematice las neurulas de vertebrados y compárelas Práctica No.7 Sistema Circulatorio y Sistema Nervioso (Derivado mesodérmico y Derivado ectodérmico) INTRODUCCIÓN Sistema Circulatorio En cooperación con el sistema respiratorio, el sistema circulatorio transporta gases entre los sitios donde ocurre la respiración externa (o intercambio gaseoso entre la piel y el medio a través de la respiración cutánea) y la interna (que se refiere al intercambio de gases entre la sangre y tejidos especializados del cuerpo). También tiene otras funciones importantes: ajusta los cambios de la presión sanguínea, transporta excesos de calor hacia la piel para ser disipados. Además productos de la digestión y el metabolismo (como la glucosa) son transportados para su almacenamiento temporal, también hormonas hacia los órganos que las utilizan y los productos de desecho hacia los riñones. Además, la sangre contiene células y señales químicas del sistema inmune. Básicamente el sistema circulatorio es un conjunto de tuberías que transportan fluidos. Por consiguiente la capacidad del organismo de ajustar inmediatamente los cambios fisiológicos, de las actividades físicas y metabólicas, depende de la rápida respuesta de este sistema. Sistema cardiovascular Sangre La sangre es una mezcla de elementos celulares, líquido, proteínas y metabolitos. Está constituida por cuatro elementos principales: Eritrocitos: hematíes o glóbulos rojos. Transportan oxígeno desde los pulmones hasta los tejidos periféricos. Contienen hemoglobina, la cual es producida por los riñones y está en el plasma. Varían en tamaño entre los vertebrados, desde 8 µm en los humanos, y 9 µm en elefantes, hasta 80 µm en algunas salamandras. En su mayoría no presentan núcleo (excepción: aves). Leucocitos: o glóbulos blancos. Desempeñan un papel defensivo, destruyendo los organismos infectantes como las bacterias y los virus, así como la eliminación de tejidos muertos o dañados. Plaquetas: trombocitos. Son la primera línea de defensa frente a la lesión de los vasos sanguíneos, adhiriéndose a los defectos y participando en el sistema de coagulación sanguíneo. Plasma: es una solución de proteínas en la que circulan los elementos celulares mencionados anteriormente y que transporta nutrientes, metabolitos, anticuerpos, hormonas, proteínas del sistema sanguíneo de la coagulación y otras moléculas por todo el organismo. a ca da ea fa ba a Figura 7.1 a) Eritrocitos (rojo) plaquetas (morado); b-f) leucocitos: b) neutrófilos; c) eosinófilos; d) basófilos; e) monocitos; f) linfocitos Arterias, venas y capilares Son los principales tipos de conductos sanguíneos, y varían en tamaño. Las arterias conducen la sangre fuera del corazón, las venas llevan la sangre hacia el corazón, y los capilares son pequeños conductos que se encuentran entre los dos primeros. Debido a las diferencias en función, su morfología e histología varía. Figura 7.2 Histología de arteria, arteriola, capilar, vénula y vena El corazón en los vertebrados Esta estructura no es más que una bomba que mueve la sangre a través de los vasos, no sólo a través del sistema circulatorio, sino también por aspiración, ya que crea una presión negativa que succiona la sangre hacia su interior. En tiburones, el corazón puede bombear 7.5 litros de sangre por hora; en una gallina en reposo, 24 litros por hora; en el humano, 280 litros por hora (cerca de 75 galones). Por el cuerpo de una jirafa, pueden circular cerca de 1200 litros de sangre por hora. Filogenéticamente, el corazón probablemente comenzó como una cavidad contráctil, como la que se encuentra dentro del sistema circulatorio del anfioxo. En la mayoría de peces el corazón es parte de una circulación simple. Las aves y mamíferos poseen un corazón de cuatro cavidades, persistiendo solamente dos de estas, que son observables en los peces, el atrio y el ventrículo, ambos divididos en derecho e izquierdo, para producir dos compartimientos anatómicamente separados. El corazón de los anfibios y reptiles está entre los derivados de los tetrápodos ancestrales. En los peces, este debe evaluarse a la luz de su función y estructura y las adaptaciones que presentaron estos últimos para sobrevivir en su medio. Sistema Nervioso El cerebro es el centro integrador de todas las acciones voluntarias e involuntarias de los vertebrados, en los cuales existen variaciones con respecto al grado de ciertas regiones del mismo. El cerebro está constituido básicamente por dos regiones; la corteza cerebral o sustancia gris, que forma parte de la capa más externa del tejido cerebral y en la que se concentran las neuronas y la médula o sustancia blanca constituida básicamente por esfingolípidos y esfingomielinas. La corteza cerebral es la encargada del desempeño de las tareas altamente complejas relacionadas con la inteligencia, mientras que la médula cerebral obedece a los aspectos primitivos como los instintos. A lo largo de la evolución de los vertebrados se puede observar el desarrollo de la corteza, de tal manera que en los mamíferos y en las aves se presenta el mayor desarrollo. A continuación se realizara el estudio de los componentes y regiones más importantes del cerebro de un mamífero así como sus funciones primordiales. Figura 7.3 Hemisferios cerebrales Células nerviosas (Neuronas) Son un grupo de células con gran actividad metabólica, forman una red de interconexión muy especializada y recogen la información de receptores sensoriales. Además procesan información y proporcionan un sistema de memoria y generan señales específicas que dirigen a células efectoras. En su estructura general, las neuronas cuentan con un cuerpo celular o axón, terminaciones axónicas y dendritas. Presentan un núcleo grande y redondeado que se encuentra situado en posición central. Presentan un aparato de Golgi y un retículo endoplásmico rugoso muy desarrollado, con gran cantidad de proteínas que forman gránulos en el citoplasma llamados sustancia de Nissl, la cual se encuentra presente en el cuerpo celular y en las dendritas. Figura 7.4 Estructura de neurona motora OBJETIVOS Que el estudiante al finalizar de la práctica sea capaz de: Describir la anatomía general del corazón y cerebro de los vertebrados Identificar los diferentes tipos de tejido hematopoyético y nervioso Identificar principales tipos de tejido que conforman el sistema circulatorio y nervioso y describir su función MATERIALES Microscopios Bandejas de aluminio Bisturíes Guantes de látex Cerebro de mamífero Corazón de bovino Corazones de vertebrados preservados Células sanguíneas de perro y gallina Lamina de corte de encéfalo Lamina de corte de médula espinal Lamina de corte de miocardio de equino PROCEDIMIENTO a) Estudio de la anatomía del corazón y sistema cardiovascular Tome el corazón de un bovino, observe, identifique y describa las diferentes partes (venas, arterias, aurículas), compare la anatomía del mismo con el corazón de diferentes especies de vertebrados. b) Estudio Histológico de células sanguíneas, vasos sanguíneos y corazón En una muestra de sangre de mamífero y de ave describa y esquematice los elementos celulares que observe o Eritrócitos o Leucócitos o Plaquetas o Granulocito o Monócito En un corte de arteria, localice y describa o Túnica intima o Túnica media o Túnica adventicia En un corte de corazón describa y esquematice el tejido muscular cardiaco (miocardio) c) Estudio de la anatomía del cerebro Tome el cerebro de un mamífero, identifique y describa las siguientes estructuras o Meninges o Cerebelo o Lóbulos: frontal, occipital, o Médula espinal parietal y temporal o Bulbo olfativo o Protuberancia o Quiasma óptico o Bulbo raquídeo o Nervios craneales Con la ayuda de un bisturí realice un corte sagital del cerebro e identifique lo siguiente: o Hemisferios cerebrales o Cuerpo pineal o Cuerpo calloso o septo o Plexo coroideo o Tálamo e hipotálamo d) Estudio Histológico de las células cerebrales En un corte de encéfalo localice, describa y esquematice: o Neuronas o o Células de Schwann o o Astrocitos Células de microglia Células ependimales En un corte de encéfalo localice, describa y esquematice: o Capa molecular o Células de Purkinje o Capa granulosa En un corte de médula espinal localice, describa y esquematice: o Sustancia blanca o Sustancia gris o Axones mielinizados CUESTIONARIO 1. Esquematice: circulación simple, circulación doble. De ejemplos de cada una 2. Realice esquemas de corazón generalizado de pez, anfibio, reptil, ave y mamífero 3. ¿Cuál es la diferencia fundamental en cuanto al desarrollo del cerebelo y bulbo raquídeo entre un ave y un mamífero? 4. ¿Cómo se logra el desarrollo del área olfatoria en mamíferos? 5. ¿Qué estructura(s) cerebral(es) se relaciona(n) con el desarrollo de la capacidad visual de las aves? 6. ¿Cuántos pares de nervios craneales existen en vertebrados? 7. Realice una breve revisión de literatura del desarrollo embrionario del sistema nervioso Práctica No.8 Sistema Tegumentario y Tejido epitelial (Derivado mesodérmico y Derivado ectodérmico) INTRODUCCIÓN Tejido epitelial El tejido epitelial está formado por células ordenadas en capas o láminas, su función específica es servir como revestimiento, protección y aislamiento de tejidos y órganos, tal como sucede en el caso de la piel, el intestino y la mucosa del aparato respiratorio. Constituye las unidades funcionales de glándulas secretoras, como las glándulas salivales y el hígado. Las células de este tejido presentan estrategias de adhesión que permiten un sello a nivel intercelular. Epitelio escamoso simple Está formado por una sola capa de células y núcleos aplanados y con citoplasma escaso, de manera que es difícil de identificar en el microscopio. Este epitelio puede ser nombrado de acuerdo a su ubicación, así por ejemplo cuando se encuentra recubriendo vasos se le denomina endotelio y cuando se encuentra entre dos o más tejidos, mesotelio. Forma parte de las membranas cerosas de las vísceras, se puede encontrar revistiendo cavidades celomáticas y protegiendo vísceras huecas o parenquimatosas del desgaste. Figura 8.1 Epitelio escamoso simple Epitelio cúbico simple Formado por una sola capa de células cuya altura, ancho y grosor aparentan ser iguales. El núcleo generalmente se encuentra casi en el centro de la célula. Este tipo de epitelio puede encontrarse como parte del recubrimiento de los ovarios, actuando como protección contra su desgaste. Figura 8.2 Epitelio cubico simple Epitelio cilíndrico o columnar simple En este tejido las células son alargadas, formando una sola capa ordenada, su altura es 2 o 3 veces mayor a su ancho, sus núcleos se encuentran en la base de la célula (posición basal). Su función específica es la de secretar moco. Se puede encontrar en el epitelio que recubre al estomago y la cérvix del útero (cuello uterino). Figura 8.3 Epitelio columnar simple Epitelio escamoso estratificado También se conoce con el nombre de queratinizado, se trata de un tejido adaptado al desgaste severo, cuenta con tres capas: basal, media y superficial. Las células de la capa superficial están muertas y son prácticamente impermeables. Las células de la capa basal pasan al estrato medio manteniendo una forma poligonal, luego se aplanan, mueren, se queratinizan y pasan a la capa superficial. Pueden perderse por descamación y desgaste. En la capa basal se encuentran los melanocitos (células que dan el color a la piel), cuyo color varía dependiendo de la adaptación de la especie al medio en el que se desarrolla; constituye la epidermis de la piel. En lo figura 8.4 se muestra un corte de tráquea de vaca (izquierda) y un corte de piel de la nuca de cerdo (derecha), observándose en esta ultima las células queratinizada. Figura 8.4 Epitelio escamoso estratificado Epitelio cilíndrico pseudoestratificado Es el epitelio propio del revestimiento de las vías respiratorias, una de sus funciones más importantes es secretar moco para mantener húmedas las vías respiratorias y libres de partículas, virus y bacterias. Sus células pueden ser ciliadas o caliciformes. En el primer caso los cilios sirven para mover el moco y sacarlo hacia la garganta. Figura 8.5 Epitelio cilíndrico pseudoestratificado Epitelio de transición Es un tipo especial de tejido epitelial, presente en la vejiga urinaria, se puede estirar sin afectar la estructura celular. Es el único tejido en presentar células poliploides. En la figura 8.6 de un corte de vejiga, se observa este epitelio relajado (izquierda) y contraído (derecha). Figura 8.6 Epitelio de transicion Sistema tegumentario La piel es un órgano compuesto, en la superficie está la epidermis, por debajo la dermis, y entre ellas se encuentra la membrana basal (lamina basal y lamina reticular). La epidermis se deriva del ectodermo y produce la lamina basal. La dermis se desarrolla del mesodermo y del mesenquima y produce la lamina reticular. Entre el tegumento y la musculatura se encuentra una region transicional y subcutanea constituida pore tejido conectivo y adipos, la hipodermis. Este es el órgano más grande del cuerpo consituyendo el 15% del peso corporal del humano. Al final de la neurulacion en el embrion, la mayoria de precursores de la piel estan designados. La superficie del ectodermo prolifera para producir la epidermis de varias capas. Esta profunda capa de la epidermis, el estrato basal (estrato germinativo), descansa sobre la membrana basal. Por divisiones mitoticas del estrato germinativo se forma la capa externa de celulas llamada peridermo. La dermis sobresale de muchas fuentes, principalmente del dermatoma. Los epimeros segmentados (somitas) se dividen, produciento el esclerotoma en la region media, la fuente de vertebras del embrion, y el dermomiotoma lateralmente. Las celulas internas del dermomiotoma se reareglan en el miotoma, la mayor fuente de musculo esqueletico. La pared del dermomiotoma se dispersa fuera por debajo del ectodermo como más o menos un dermatoma distintivo que se diferencia en el tejido conectivo de la dermis. Las células de la cresta neural migran en la region entre la dermis y la epidermis, contribuyendo al esqueleto y la pigmentación de la piel por medio de las células especializadas llamadas cromatóforos. Figura 8.7 Origen embrionario del tegumento Figura 8.8 Clasificacion y destino de las celulas y tejidos epiteliales Especializaciones del tegumento: Uñas, garras y pezuñas (cascos): las uñas son láminas bien compactas de células epiteliaes confinadas y localizadas en la superficie de los dedos; así pues, son producto del sistema queratinizante de la piel. La matrix de la uña forma nueva uña en su base empujando a la ya existente hacia adelante y sustituyendo la parte del borde libre de la uña que se gasta o rompe. Las uñas protegen los extremos de los dedos del inadvertido daño mecanico. Solamente los primates tienen uñas, en los demás vertebrados, el sistema queratizante al final de cada dedo forma garras o pezuñas. Las garras son expansiones quereatinizadas del extremo de los dedos, curvada y, lateralmente comprimidas. Se encuentran en algunos anfibios y en la mayoríade las aves, y mamiferos. Las pezuñas o cascos son laminas queratinizadas gruesas situadas sobre el extremo de los dedos de los ungulados. Cuernos y astas: la piel junto con el hueso por debajo de ella, contribuyen a constituir ambas estructuras. Al tomar forma, el hueso inferior se eleva, llevando consigo el tegumento que lo recubre. En los cuernos, el tegumento asociado produce una cubierta dura y cornificada que encaja perfectamente sobre el nucleo óseo que nunca está ramificado. En las astas, la piel que recubre el hueso (llamada “terciopelo”) aparentemente forma y proporciona el soporte vascular para el crecimiento del hueso. Eventualemente el terciopelo se desprende y el hueso queda al descubierto. Las verdaderas astas ocurren en miembros de Cervidae (venados, alces); mientras que entre los mamiferos, los verdaderos cuernos se encuentran en la familia Bovidae (ganado, antilopes, ovejas, cabras, bisontes), y a diferencia de las astas, se encuentran en ambos sexos. Barbas de ballena: es el tegumento dentro de la boca de las ballenas misticete, forman laminas de barbas que actuan como coladores para extraer el krill. Aunque a menudo se les denomine “huesos de ballena”, no contienen estructura osea. Es una serie de laminas queratinizadas que sobresalen del tegumento. La epidermis forma un capa cornificada sobre la superficie de las proyecciones. Escamas: presentan muchas funciones. Tanto las escamas epidermicas y dermicas son duras, por lo que previenen el daño mecánico y las abraciones de su superficie, protegiendo así el tejido más suave. La densidad de las escamas también las hace una barrera contra la invasion de patógenos, y retardan la perdida de agua del cuerpo. En tiburones y otros peces oseos, las escamas rompen la turbulencia del agua para incrementar la eficiencia del nado. Algunos reptiles regulan la cantidad de calor que absorben del medio. Las escamas epidermicas son el mayor componente de la piel de los reptiles. También están presentes en aves sobre sus patas, y en algunos mamiferos, como el castor, cubriendo la cola. Armaduras dérmicas: los huesos dermicos forman la armadura de ostracodermo y placodermo en los peces. Son un producto de la dermis y se encuentran asociados a una gran viaredad de estructuras.En los peces óseos, el hueso dérmico soporta las escamas, pero tiende a perderse en los tetrapodos. Está ausente en la piel de las aves y la mayoría de los mamiferos. Algunas excepciones son el mamifero fósil Glyptodon y la piel del armadillo. La concha de las tortugas es una estructura compuesta. La mitad dorsal de ella es el caparazón, formado por huesos dérmicos fusionados con costillas expandidas y vértebras. La parte ventral consituye el plastrón, formado por huesos dermicos fusionados a lo largo del vientre. Tanto el caparazón como el plastrón están recubiertos por placas queratinizadas de la epidermis. Moco: esta sustancia provee muchas funciones a la piel. En los vertebrados acuáticos inhibe la entrada de patógenos e incluso puede tener acción antibacterial. En anfibios terrestres, el moco mantiene el tegumento húmedo y permite llevar a cabo el intercambio de gases (respiracion cutánea). Las serpientes marinas pueden depender de la respiracion cutanea hasta un 30% de su toma de oxigeno. El moco también está inplicado en la locomocion acuática. Como capa superficial, suaviza las irregularidades y arrugas externas características de la epidermis, para reducir el rozamiento al que un vertebrado es sometido al nadar en el agua, relativmente viscosa. Color: el color de la piel resulta de las complejasinteracciones entre propiedades fisicas, químicas y estructurales del tegumento. Los cambios en el suministro de sangre pueden enrojecer la piel, como en el turbor o sonrojamiento. Como la luz es reflejada por materiales con diferentes índices de refracción, e interferencia entre diferentes longitudes de onda de la luz produce colores iridescentes. En muchas aves estos colores resultan de la interferencia de la luz reflejada en las pequeñas barbas y barbulas de las plumas. Muchos de los pigmentos que producen colores por esta variedad de fenomenos físicos, son sintetizados en cromatóforos especializados. Figura 8.8 Derivados de la piel OBJETIVOS Que el estudiante al finalizar la práctica sea capaz de: Identificar los diferentes epitelios, su estructura y su ubicación en diferentes órganos de vertebrados. Describir la función específica del tejido epitelial según su estructura y su ubicación Identificar los componentes del tegumento y las especializaciones dérmicas MATERIALES Microscopio Corte transversal de intestino delgado Corte de tráquea de gallina Corte de estomago Corte transversal de ovario de cerda Corte de piel de mamífero Corte de vejiga urinaria Cortes de diente de mamífero Cortes de uña de mamífero Laminas fijas de pelo Diferentes estructuras de especialización de tegumento (uñas, dientes, ornamentas, plumas, patas de aves, caparazón de tortuga) PROCEDIMIENTO a) Estudio Macroscópico del tegumento Tome las diferentes muestras y esqueletos de vertebrados e identifique y describa las diferentes especializaciones de tegumento y derivados de la piel que observara (uñas, dientes, ornamentes, caparazones, plumas) b) Estudio histológico Observe en el microscopio lo siguiente: En el corte transversal de intestino delgado y de tráquea de gallina identifique y esquematice el tejido epitelial pseudoestratificado ciliado. En el corte de estomago localice y esquematice el epitelio cilíndrico (columna) simple. En el corte transversal de ovario de cerda identifique y esquematice el tejido epitelial cúbico. En corte de piel de mamífero esquematice el tejido escamoso estratificado. En el corte de vejiga urinaria localice y esquematice el tejido epitelial de transición Observe en las láminas fijas, que se le entregarán lo siguiente: Piel: o Dermis: Tejido conectivo y glándulas. o Epidermis: Estrato germinativo Estrato espinoso Estrato granuloso Estrato corneo (con queratina). Pelo: o Dermis o Papila pilosa o Tallo y cuerpo del pelo Uñas: o o o Matriz ungueal Placa ungueal Lúnula o o Eponiquio Hiponiquio Dientes: o dental o dental o del esmalte o desarrollado o Lamina o Amelobl astos Yema o o Órgano Dentina Odonto blastos o Diente dental o Esmalte Papila Desarrol lo del diente permanente CUESTIONARIO 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Haga el esquema de un corte de piel, uña, diente y pelo. ¿Cuál es la diferencia entre una uña, una garra y una pezuña? ¿Qué diferencias existen entre dientes de un herbívoro, un carnívoro y un omnívoro? Realice una lista de estructuras de origen ectodérmico presentes en vertebrados y sus funciones (sea breve) ¿Cuál es la diferencia entre cuernos y astas? Indique la diferencia entre una estructura cornificada y una queratinizada Investigue: ¿qué es una formula dental? (sea breve) Investigue la composición química de las capas de los diente Práctica No.9 Sistema Digestivo, Respiratorio y Urogenital (Derivado endodérmico y mesodérmico) INTRODUCCIÓN Sistema digestivo El sistema digestivo en adulto se compone del tubo digestivo y de las glándulas digestivas accesorias. El tubo digestivo es un conducto tubular que se extiende desde la boca hasta la abertura cloacal. El tubo digestivo se compone de la cavidad bucal, la faringe y el conducto alimentario, que se divide en esófago, estómago, intestinos y cloaca. En el embrión, el sistema digestivo es un tubo simple de endodermo que conserva, mediante el pedúnculo vitelino, una conexión anatómica con el saco vitelino; no obstante el vitelo no entra directamente en el sistema digestivo a través de dicho pedúnculo, sino que se absorbe y es transportado por los vasos vitelinos que se desarrollan como parte de las membranas extraembrionarias del saco vitelino. A partir de este sistema digestivo sencillo se desarrollan la faringe y el conducto alimentario con las glándulas digestivas anexas. Durante el desarrollo embrionario unas invaginaciones del ectodermo entran en contacto con el tubo digestivo endodérmico en los dos extremos del cuerpo. La invaginación anterior, o estomodeo, contacta con la pared anterior del tubo digestivo, entre los que, temporalmente, se forma una membrana bucofaríngea que luego se rompe para unir la luz de ambas regiones: el estomodeo da lugar a la cavidad bucal, la invaginación ectodérmica posterior, el proctodeo, contacta con la parte posterior del tubo digestivo, formando entre ambos la membrana cloacal, que después se rompe para dar lugar al conducto de salida de la parte posterior del tubo digestivo. El proctodeo se convierte en la cloaca del adulto. Figura 9.1 Formación embrionaria del sistema digestivo de los vertebrados Organización general del tubo digestivo En algunos vertebrados, la digestión comienza en la cavidad bucal, pero realmente el procesado del alimento se produce en el tubo digestivo, que conlleva la disgregación del bolo, la absorción de sus constituyentes y la eliminación de los restos indigeribles. El diseño del tubo puede variar según la dieta del animal. La mayor parte tiene un tubo dividido en esófago, estómago, intestinos y cloaca: por muy diferentes que parezcan, todos comparten un diseño similar subyacente. Figura 9.2 Sistema digestivo de los vertebrados Cada región está constituida sobre un plan común de organización, que consiste en un tubo hueco con paredes formadas por cuatro capas. La capa más interna es la mucosa, que incluye al epitelio que recubre la luz, las delgadas fibras de músculo liso de la musculareis mucosae y la región de tejido conjuntivo laxo, la lámina propia entre el recubrimiento epitelial y la muscularis mucosae. La submucosa, formada por tejido conectivo laxo y plexos nerviosos del sistema nervioso autónomo, constituye la segunda capa del tubo digestivo. Por fuera de esta capa se sitúa la muscular externa, compuesta por capas longitudinales y circulares de músculo liso. La capa superficial es la adventicia, que está formada por tejido conjuntivo fibroso. Si un mesenterio rodea al tubo digestivo, esta capa externa de tejido conjuntivo más el mesenterio se denomina seroso. Durante el desarrollo embrionario, el endodermo da lugar al recubrimiento del tubo digestivo y el mesodermo que lo rodea forma los músculos lisos, el tejido conjuntivo y los vasos sanguíneos. Figura 9.3 Organización general del tubo digestivo Figura 9.4 Histología comparada de las mucosas a lo largo del tubo digestivo de un mamífero. Nótese que el intestino grueso, como el delgado contiene glándulas intestinales pero no tienen vellosidades Sistema respiratorio El pulmón de los vertebrados tiene su origen embriológico en un repliegue del esófago. Por lo cual está formado del endodermo, doblado secundariamente por el mesodermo para la vascularización. Todos los cordados poseen en algún momento de su ciclo vital la "faringe perforada" (faringotremia o hendiduras branquiales) que surgió en los procordados como un mecanismo de alimentación por filtración. El sistema funciona al introducir agua con partículas alimenticias, las cuales quedan adheridas a la pared de la faringe por secreciones mucosas, mientras que el agua vuelve a salir por las hendiduras faríngeas. Al pasar los protovertebrados de un sistema de vida filtrador a otro depredador, la faringe se modificó como un aparato de alimentación muscular, a través del cual se podía bombear agua expandiendo y contrayendo la cavidad. En los peces se ha heredado esta faringe perforada pero ya no se utiliza para alimentarse y los tabiques faríngeos se sitúan en las branquias. Figura 9.5 Evolución de los pulmones y las vejigas natatorias Existen diversos órganos respiratorios: bronquios, pulmones, vejigas gaseosas, órganos respiratorios cutáneos y órganos accesorios. Independientemente de cuáles sean los órganos de intercambio – pulmones, branquias, piel u órganos accesorios-, el agua o el aire deben moverse activamente a través de las superficies respiratorias para aumentar la tasa de difusión. Unos pocos mecanismos de ventilación se basan en la acción de los cilios, pero la mayoría están relacionados con acciones musculares. Figura 9.6 Histología de la tráquea Figura 9.7 Corte transversal de pulmón Figura 9.8 Histología del bronquio Sistema urogenital Anatómicamente, el sistema urinario está formado por los riñones y los conductos a través de los cuales se elimina su producto, la orina. El aparato reproductor está constituido por las gónadas y los conductos por los que salen sus productos, espermatozoides y óvulos. Embriológicamente, los órganos urinarios y los reproductores derivan de los mismos tejidos, o de tejidos muy próximos, y conservan una relación estrecha durante toda la vida del individuo. La cresta renal es la región nefrogénica, de manera que constituye la zona del embrión a partir de la cual se forman los riñones y sus conductos. Las zonas, anterior, media y posterior de la cresta renal pueden contribuir a la formación de los riñones y los conductos asociados. Generalmente, se llega a la formación de las estructuras urinarias finales a través de una serie de estados transitorios: pronefros, mesonefros y metanefros. a b c d Figura 9.9 Histología del aparato urogenital., a. riñón; b. corteza renal; c. uréter y d. vejiga OBJETIVOS Que el estudiante al finalizar la práctica sea capaz de: Identificar y reconocer algunos derivados endodérmicos y mesodérmicos Conocer e identificar los tejidos que componen los sistemas respiratorio, digestivo y urogenital MATERIALES Bandejas de aluminio Guantes de látex Pinzas microscopios Preparaciones fijas de aparto respiratorio Preparaciones fijas de aparato urogenital Preparaciones fijas de aparato digestivo PROCEDIMIENTO Laminas fijas de tráquea Laminas fijas de estomago, intestino Laminas fijas pulmón Laminas fijas de riñón Laminas fijas de vejiga Laminas fijas embriones a) Estudio macroscópico Observe las siguientes estructuras, esquematice, señale y describa Estómago e intestinos de diferentes especies Pulmones (de serpiente, ave, mamífero) y branquias (de peces) Riñones Aparato urogenital de ave, mamífero, reptil b) Estudio histológico Al microscopio observe los siguientes cortes Corte transversal de tráquea Corte transversal de estomago Corte transversal de intestino delgado e intestino grueso o Luz o Submucosa y glándulas e la o Vellosidades intestinales submucosa o Glándulas mucosas o Músculo externo o Mucosa (epitelio, lámina o Mesenterio propia, muscularis mucosae) o Capa serosa Corte de pulmón Corte de branquias Corte de riñón o Nefrona o Región medular y cortical Corte de vejiga Corte de embrión para observar diferentes estructuras del sistema digestivo, respiratorio y urogenital o Somitas o Músculo del aparato o Riñón primitivo y metanefros digestivo o Corazón o Gónadas. o Hígado CUESTIONARIO Describa el proceso de transformación del tubo digestivo en los vertebrados (desde una posición recta hasta un conducto enrollado dentro de la cavidad corporal). Ilustre la anatomía interna e histología general del estómago, del intestino delgado y del intestino grueso. ¿Qué parte del aparato digestivo es de origen mesodérmico? Describa los mecanismos de: respiración, respiración cutánea y respiración embrionaria (aves, reptiles y mamíferos). Práctica No.10 Sistema Esquelético y Tejido conectivo (Derivado mesodérmico) INTRODUCCIÓN Sistema esquelético El esqueleto proporciona a los vertebrados la forma del cuerpo, soporta su peso, ofrece un sistema de palancas que, junto con los músculos, produce movimientos, y protege las partes blandes tales como nervios, vasos sanguíneos y otras vísceras. Los componentes del sistema esquelético funcionan juntos como una unidad pero, por conveniencia, se pueden dividir en distintas partes para realizar un análisis más ajustado. El esqueleto se pude dividir, como un sistema de protección y soporte, en estructuras del exterior del cuerpo (exoesqueleto) y del interior (endoesqueleto). Según su posición, se pueden tratar el esqueleto como dos componentes separados, el esqueleto craneal (cráneo) y el esqueleto postcranelal, que incluye los esqueletos axial y apendicular. Figura 10.1 Organización de los tejidos esqueléticos en los vertebrados. El exoesqueleto se forma en el tegumento: la dermis da lugar al hueso, y la epidermis a la queratina. El endoesqueleto se forma a partir del mesodermo o de otras fuentes, y no directamente del tegumento. Los tejidos, que contribuyen a la formación del endoesqueleto, incluyen al tejido conjuntivo fibroso, el cartílago y al hueso. Durante la evolución de los vertebrados, la mayoría de los huesos del exoesqueleto se encontraban en el tegumento y protegían las estructuras superficiales. Otros huesos se hundieron y fusionaron con huesos profundos y elementos cartilaginosos del endoesqueleto para formar estructuras compuestas. El cráneo El cráneo de los vertebrados es una estructura formada por tres partes distintas, aunque fusionadas formando una unidad armoniosa. La más antigua constituye el esplacnocráneo (cráneo visceral; aparece por primera vez en los protocordados para sostener las hendiduras faríngeas. La segunda es el condrocráneo, que rodea y da soporte al cerebro; está formado por cartílago o hueso endocondral. La tercera parte es el dermatocráneo, una contribución posterior de la envuelta externa del cráneo en la mayoría de las formas de vertebrados. De forma general, las estructuras cefálicas craneales se originan a partir del mesénquima proveniente de las células de la cresta neural y el mesodermo paraxial. Los huesos que forman el cráneo no tienen un mismo origen. Del mesoblástico (esclerotomos y dermotomos) se forman el occipital, esfenoides, parietal; del ectoblástico, el hueso nasal, yugal, cuadrado-yugal, escamosos, palatino, pterigoideo, vómer, premaxila, maxilar, cuadrado, huesos de la mandíbula; y de un origen mixto, se forman las travéculas, cápsula ótica y huesos perióticos, parte del parasfenoides y el frontal. Esqueleto axial Los vertebrados presentan dos componentes estructurales que se combinan para definir el eje longitudinal del organismo, ofrecer un lugar para la fijación de la musculatura, impedir el acortamiento del cuerpo y soportar gran parte del peso. Uno de estos ejes es la notocorda, y el otro, la columna vertebral. La notocorda es una larga varilla continua formada por tejido conjuntivo fibroso, que envuelve a un núcleo de células llenas de líquido, que se desarrolla a partir del mesodermo y que queda dorsal con respecto al celoma . La columna vertebral consiste en una serie repetida de elementos óseos o cartilaginosos separadas, se originan del mesénquima. En el desarrollo embrionario temprano, el mesodermo paraxial se vuelve segmentario y se distribuye en somitos. Según se diferencian, los somitos forman las vértebras (y las costillas), músculo esquelético y la dermis del tegumento dorsal. Inmediatamente después de la formación de los somitos, las células laterales más cercanas al ectodermo se diferencian en dermatomo (miotomo) músculos esqueléticos). Las células medianas se desprenden y migran alrededor de la notocorda, formando flujos de células mesenquimáticas que, a lo largo de la notocorda, se colocan segmentariamente en grupos denominados esclerotomos. A su vez, los esclerotomos contribuyen a las vertebras y las costillas. Figura 10.1 Desarrollo embrionario de la vértebra Esqueleto apendicular Comprende las aletas pares o extremidades y las cinturas, que las unen al cuerpo que las soporta. La cintura anterior es la cintura pectoral u hombros, formada por elementos esqueléticos dérmicos y endocondrales; sostiene la aleta pectoral o extremidad anterior. La cintura posterior, cintura pélvica o caderas, está formada por elementos endocondrales que sostienen la aleta pelviana o la extremidad posterior. Tal diseño doble sugiere un doble origen evolutivo, los elementos endocondrales que surgen de los soportes basales de las aletas y los elementos dérmicos que proceden de huesos encerrados en el tegumento. Figura 10.2 izquierda: propuestas de segmentación de cráneo de los vertebrados; derecha: Esqueleto axial (amarillo) y apendicular (blanco) Tejido conectivo Es la matriz celular en la que se encuentran embebidos otros tejidos que en conjunto forman órganos y sistemas. Se divide en Tejido conectivo general y especial (ver figura 6.2). Su origen es principalmente del mesodermo, pero en algunas excepciones, como en el caso del tejido conectivo en los músculos de la mandíbula y algunos huesos craneales se originan de la cresta neural. Con excepción del tejido adiposo, que no presenta matriz, en general en el tejido conectivo se distingue un tipo celular en especial, aislado de otros tipos celulares y atrapados por una matriz extracelular muy abundante. La consistencia de esta sustancia determina en gran medida las propiedades físicas del tejido conectivo y a su vez la función que desempeña. Como en el caso del hueso la matriz está endurecida, en el tejido conectivo laxo, es parecida a la gelatina y en la sangre es un fluido. Esta matriz está constituida por proteínas fibrosas y rodeadas por la sustancia fundamental. Tejido Conectivo General Estos tejidos están dispersos en todo el cuerpo, siendo el más común el tejido conectivo fibroso que forma tendones y ligamentos así como mucha de la dermis de la piel y la capa externa de los órganos. Presentan una célula distintiva o fibroblasto y la matriz extracelular secretada por ellos mismos, que es una red de fibras proteicas en una sustancia fundamental de gel de polisacáridos. El mesenquima presenta células que no están polarizadas; sus uniones no son tan fuertes. Poseen un espacio intercelular entre estas células, el cual persiste como una fuente de células en formación que se diferencian y reponen las células dañadas en el adulto. Tejido adiposo Es un tipo de tejido conectivo laxo compuesto por células que se caracterizan por presentar grandes vacuolas de almacén de grasa y fibras reticulares, estos son los adipocitos (células adiposas o células grasas). Estas tienen receptores para la hormona del crecimiento, insulina, glucocorticoides, hormonas tiroideas y la no adrenalina, sustancias que regulan la captación y liberación de las grasas. Figura 10.3 Tipos de tejido adiposo: unilocular o grasa blanca (izquierda) y multilocular o grasa parda (derecha) Pueden presentarse dos tipos de tejido adiposo grasa blanca y parda: El primero es el principal reservorio de energía, deriva del mesodermo embrionario, funciona como aislante térmico para animales que viven en regiones frías, recubriendo órganos vitales y el tejido subcutáneo. La grasa parda es un tejido que se encuentra principalmente en los neonatos, su función es la de metabolizar la grasa para producir calor, debido a que los recién nacidos no pueden regular su temperatura. Su característica principal es que posee gran cantidad de mitocondrias para transformar la grasa en calor, como en el caso de los organismos invernantes, acumulan esta grasa en grandes cantidades y van consumiéndola lentamente a lo largo de su letargo. Se le puede encontrar en cuello, hombros, espalda, en la región peri-renal y la región para-aortica. Tejido Conectivo Especial Ejemplos de este tejido son el hueso, cartílago, sangre y tejidos hematopoyéticos. Estos últimos tejidos se dividen en: tejido meliode que se localiza adentro de las cavidades de los huesos, y tejido linfoide ocurre en el bazo, nódulos linfáticos y en todas partes. Se sabe que ambos tejidos son capaces de producir ambos tipos celulares (mielocitos y linfocitos). Algunos tejidos conectivos especializados pueden sufrir mineralización, un proceso general donde varios iones inorgánicos (hierro, magnesio, calcio) se depositan en la matriz orgánica de los tejidos para endurecerlos. Un ejemplo claro es la calcificación en la que el carbonato de calcio (en los invertebrados) o el fosfato de calcio (en vertebrados) se deposita en la matriz orgánica. La osificación que es un tipo de calcificación que lleva a la formación de hueso Descripción del tejido cartilaginoso: es un tipo de tejido conectivo bastante común en los vertebrados, que consiste en células de sostén especializadas (condrocitos, condroblastos) embebidos en una matriz amorfa compuesta por proteínas y glucosaminoglicanos. Los condroblastos son responsables de generar nuevo cartílago y se mantienen activos durante un tiempo de vida limitado, se dividen por mitosis, su núcleo se reduce y se convierten en condrocitos. Figura 10.4 Condroblastos y Condrocitos Existen tres tipos de cartílago: Cartílago hialino Es el más común y abundante, se puede encontrar en las placas o discos epifisiarios de crecimiento de los huesos en animales jóvenes siendo el responsable del crecimiento en longitud de los huesos. Conforma el esqueleto provisional de los vertebrados en la etapa embrionaria y fetal, es rico en colágeno. Se encuentra en las fosas nasales, la tráquea, los bronquios, en la extremidad ventral de las costillas y en las superficies articulares de los huesos largos. En este tejido los condrocitos se disponen en la periferia del cartílago, presentan forma elíptica y provienen de la mitosis de algunos condroblastos. También contiene una membrana de crecimiento denominada pericondrio (excepto cuando es articular), en donde se ubican fibroblastos fusiformes que secretan colágeno y tejido conectivo denso, estos dan origen a los condroblastos. Figura 10.5 Cartílago Hialino Cartílago Elástico Presenta pericondrio por lo que puede presentar crecimiento, contiene colágeno tipo II y fibras elásticas dispuestas en haces lineales, lo que da cierta flexibilidad y resistencia. Está presente en las orejas de mamíferos, en el canal auditivo externo y en las trompas de Eustaquio (oído medio), también presente en algunos cartílagos de la laringe Figura 10.6 Fibras elásticas en la matriz (izquierda), Fibras elásticas teñidas de rojo (derecha) Fibrocartílago Es distinto a los dos primeros, tiene características intermedias entre el tejido conectivo denso y el cartílago hialino, contiene gran cantidad de fibras de colágeno de los tipos I y II, que lo hace resistente a la deformación, no presenta pericondrio pero si algunos condrocitos inactivos y dispersos. Une los huesos de la pelvis, también esta en los discos intervertebrales (figura izquierda), en los puntos de unión entre tendones y huesos. Figura 10.7 Fibrocartílago Descripción del tejido óseo Hueso: El hueso es un tejido que provee de soporte mecánico a la anatomía corporal de los vertebrados, permitiendo su locomoción y proporcionando protección a órganos internos, se constituye principalmente de células especializadas (osteoblastos, osteocitos) y una matriz extracelular principalmente de calcio. Osteoblastos y osteocitos: son las células de sostén que secretan la matriz extracelular u osteoide, el cual es el almacén específico de las sales minerales. Su actividad metabólica responde a factores hormonales, nutricionales y físicos, también depende de la actividad del individuo. Osteoblastos: provienen de las células osteoprogenitoras, presentan forma cubica o poligonal cuando son activos metabólicamente. Son los responsables principales de la síntesis y secreción de osteoide, se encuentran a nivel de los conductos de Havers y Volkman. Osteocitos: cuando los osteoblastos han terminado su periodo de actividad adquieren una forma aplanada y fusiforme y reciben el nombre de osteocitos. Los osteocitos se encuentran en espacios específicos conocidos como lagunas, las cuales se ubican entre las láminas de huesos de los sistemas Harvesianos. Osteoclastos: son células grandes multinucleadas con abundante citoplasma, se originan de los monocitos de la sangre. Se encuentran adheridos a la superficie del hueso o en lugares donde se ha producido la erosión del hueso (bahías de resorción o lagunas de Howship). Su función especifica es la de erosionar o eliminar hueso cuando es necesario. Osteoide: está formado por colágeno tipo I, se encuentra inmerso en un gel de glucosaminoglicanos con glicoproteínas específicas como la osteocalcina, que es responsable de la fijación de calcio en el hueso. El osteoide sin mineralizar tiene consistencia elástica y gelatinosa, mientras que calcificado presenta dureza y rigidez. Mineralización del osteoide: se debe a la deposición de sales minerales en forma de un complejo cristalino conocido como hidroxipatita de calcio (Ca10(PO4)8(OH)2). Los factores que influyen en la mineralización son: niveles elevados de calcio y fosfato, la presencia de osteocalcina y niveles elevados de fosfatasa alcalina y pirofosfatasa. Figura 10.8 Regiones de un hueso largo Figura 10.9 Histologia del tejido óseo Hueso esponjoso y compacto El hueso esponjoso se caracteriza por presentar una organización aleatoria de fibras de colágeno (en el interior del hueso) y es mecánicamente débil. Aparece en los procesos de reparación después de una fractura, luego es sustituido por el hueso compacto. El hueso compacto por el contrario presenta una disposición paralela regular de las fibras de colágeno, que forman laminas mecánicamente muy resistente, se presenta en casi todo el sistema esquelético de los vertebrados OBJETIVOS Que el estudiante al finalizar la práctica sea capaz de: Identificar al microscopio el tejido conectivo y tejido óseo Identificar al microscopio los diferentes tipos de cartílago y tejido adiposo Describir las funciones del cartílago en los vertebrados Describir las funciones del tejido conectivo MATERIALES Microscopios corte de parpado de humano corte sagital de embrión y feto de cobayo o conejo corte de tráquea de gallina corte de oreja de rata corte de hueso de humano corte longitudinal de fémur de rata cráneos de vertebrados esqueletos de vertebrados PROCEDIMIENTO a) Tejido conectivo Observe a microscopio lo siguiente En el corte de parpado de humano localice el tejido adiposo unilocular esquematice y describa En un corte sagital de embrión ya sea de cobayo o de conejo, localice el tejido adiposo multilocular (grasa parda), en la región peri-renal, identifique y esquematice los adipocitos En el corte de tráquea de gallina identifique y esquematice el cartílago hialino En cada uno de los cortes anteriores identificar y señalar el tejido conectivo (indicar si es mesenquima, fibroblastos) En cortes sagitales de fetos de cobayo localice un hueso largo, y esquematice el proceso de osificación endocondrial y la placa epifisaria de crecimiento del hueso. Además localice las vertebras y los discos intervertebrales, en un esquema aparte, Identifique el cartílago que las constituye. En corte de oreja de rata localice, identifique y esquematice el cartílago elástico b) Sistema esquelético y tejido óseo Observe, esquematice y describa lo siguiente: Observe los cráneos de distintos vertebrados y compare entre ellos Observe los esqueletos de vertebrados y discuta sobre la estructura del esqueleto axial y el esqueleto apendicular de cada uno de ellos En un corte transversal de hueso de humano identifique: o Conductos de Havers o Osteocitos o Periostio o Osteoblastos En un corte longitudinal de hueso de humano identifique o Conductos de Volkman CUESTIONARIO 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. ¿Qué diferencias estructurales existen entre el cartílago hialino y el elástico? ¿En qué consiste el proceso de osificación endocondrial? ¿En que consiste el crecimiento aposicional del cartílago? ¿Presenta el cartílago de alguna manera irrigación sanguínea? razone su respuesta ¿Qué es el colágeno? Y ¿Qué tipos hay? Indique las similitudes y diferencias entre cartílago y hueso Defina los términos osificación y calcificación Explique de forma breve el proceso de reparación de los huesos 9. ¿A qué se debe la presencia de células osteoprogenitoras en el periostio? 10. ¿Cuál es la función especifica de los conductos de Havers y los de Volkman? 11. ¿Cuál es el origen de las aletas pares y de las extremidades de los tetrápodos? (Mencione que propone la teoría del arco branquial y del plieque aleta) Práctica No.11 Sistema Muscular y Tejido muscular (Derivado mesodérmico) INTRODUCCIÓN Sistema muscular Los músculos proporcionan la fuerza para el movimiento y, junto con el sistema esquelético, son los motores y palancas que hacen que un animal actúe (permiten al animal desplazarse, moverse, utilizar variadamente las extremidades). Los músculos también restringen el movimiento (cuando estamos de pie o sentados para evitar pérdida de equilibrio). También actúan sobre las vísceras, vasos sanguíneos, canales respiratorios, glándulas, órganos, afectando su actividad. Por ejemplo los músculos del tracto digestivo se contraen y producen ondas peristálticas que mezclan y mueven el alimento en su interior. También los músculos de los esfínteres, que controlan el paso de materiales a través de conductos tubulares. Los músculos laminares dentro de las paredes del tracto respiratorio afecta el flujo de aire hacia y desde los pulmones. Y los músculos que revisten las paredes de los vasos sanguíneos intervienen en la circulación. Además los músculos juegan un papel importante en la producción de calor. Durante la actividad física el calor es un producto de la acción muscular. Generalmente el cuerpo produce suficiente calor, pero si este núcleo de temperatura basal disminuye en tiempo frío, los grandes músculos del cuerpo se contraen fuertemente, produciendo temblor. Los músculos que hacen tiritar no realizan un trabajo extra sino que proporcionan un calor adicional, y la temperatura basal se hace normal. En algunas especies de peces la musculatura extrínseca de los ojos puede girar el globo ocular, generando una función adicional especializada en la producción de calor. Desde ellos, el calor se transporta directamente por los vasos sanguíneos al cerebro para calentarlo. Dos productos secundarios de la contracción muscular, son el ruido eléctrico y el voltaje de electricidad muy bajo. Sin embargo muchos tiburones y otros peces depredadores poseen órganos receptores que detectan tales sonidos y señales eléctricas dispersas. Pueden llegar a especializarse tan finamente que detectan la electricidad producida por los músculos de la respiración de sus presas. O lo contrario especializa un grupo de músculos para formar un órgano eléctrico que puede Figura 11.1 Musculatura craneal y del hombro en a. tiburón; b. salamandra; c. gato paralizar a sus presas. Pero en la mayoría de vertebrados, los músculos producen movimiento o controlan las acciones de los procesos corporales internos. Los músculos se originan de tres fuentes embrionarias. Una de ellas es el mesénquima, una agrupación de células que están dispersas por todo el cuerpo embrionario. Los músculos lisos de las paredes de los vasos sanguíneos y de algunas viseras provienen del mesénquima. La segunda fuente de músculos son los pares de hipómeros. Cuando se diferencia del resto del mesodermo del cuerpo, sus paredes medias (esplacnicas) rodean al digestivo y se diferencian en capas de músculo liso del tracto digestivo y de sus derivados. Las células del hipómero también forman el músculo cardiaco del corazón tubular. La tercera fuente es el mesodermo paraxial del que se forma la mayor parte de los músculos esqueléticos. Poco tiempo después de la neurulación el mesodermo paraxial, como su nombre lo sugiere, se forma en las proximidades del tubo neural a lo largo del eje del cuerpo del embrióon. El mesodermo paraxial se segmenta en el tronco, en somitas separadas. En la cabeza no se diferencia en somitas separados, si no que forma grupos o racimos de mesodermo llamados somitómeros, en serie con los somitos separados que le siguen detrás. Los somitos sel cuerpo se dividen en poblaciones de células que contribuen a la formación de la piel (dermatomo), columna vertebral (esclereotomo) y musculatura del cuepro (miotomo). Los somitómeros de la cabeza forman la cabeza y los músculos faringeos. Figura 11.2 Origen embrionario de los músculos poscranelaes de un tetrápodo generalizado Clasificación de los músculos Por su color: se clasifican en rojos y blancos. Este método ha sido ya poco usado debido que la distinción de color subestima por completo la complejidad de los músculos. Según su localización: estos pueden ser somáticos que mueven huesos o cartílago, y viscerales que controlan la actividad de órganos, vasos y conductos. Según la manera en que el sistema nervioso los controla: los músculos voluntarios están bajo el control consciente y voluntario mientras que los involuntarios no lo están Según su aspecto microscópico: este puede ser esquelético, liso y cardiaco (ver mas adelante) Tejido muscular El tejido muscular es el encargado de permitir los movimientos y las contracciones involuntarias como la reducción del diámetro de las viseras. Las células musculares que componen el músculo se denominan comúnmente “fibras”, ya que son alargadas y capaces de acortarse, éstas suelen asociarse en haces o fascículos que trabajan de manera cooperativa. Cada uno esta recubierto por una membrana conocida como epimisio. Las fibras están compuestas por: Sarcomero: unidad funcional del músculo Sarcolema: membrana plasmática Sarcoplasma: citoplasma (contiene las miofibrillas) Sarcosoma: mitocondria Retículo sarcoplasmico liso Músculo liso: o involuntario se dispone en membranas, redes o mallas que constituyen la capa muscular de las vísceras huecas, de los conductos de glándulas asociadas y la de los aparatos respiratorios, urinario y genital. También está presente en arterias y venas, conductos linfáticos, dermis y en el ojo (iris y cuerpo ciliar del ojo). a b Figura 11.3 Corte longitudinal músculo liso (a) y Corte transversal músculo liso (b) Músculo estriado: a veces llamado músculo esquelético, es importante ya que le da forma y soporte mecánico al cuerpo de los vertebrados, permite la locomoción y la adaptación a diferentes hábitats. Constituye una importante reserva de energía en forma de glucógeno. Es un tejido con muy buena irrigación, los vasos sanguíneos penetran en el músculo a través de los septos del tejido conectivo y forman una red de capilares paralela a las células musculares. Figura 11.4 Histologia del musculo esqueletico Las miofibrillas son estructuras cilíndricas con diámetro de entre 1 y 2 micras, se distribuyen de forma longitudinal dentro de la célula, en cada una pueden haber cientos de ellas, en el microscopio dan la impresión de ser estriaciones transversales (de ahí el nombre de m. estriado). Cada miofibrilla esta conformada por filamentos delgados de actina y filamentos gruesos de miosina las cuales interactúan químicamente durante la contracción muscular. Figura 11.5 Disposicion de los sarcomeros en fibras, hasta llegar a musculos Músculo cardiaco: se compone de células alargadas (100 micras) y gruesas (entre 15 y 20 micras de diámetro), su núcleo se encuentra situado al centro de la célula. El tejido esta conformado por células ancladas a través de uniones desmosómicas y uniones de tipo adherente en las que la actina une sarcomeros adyacentes. Presentan una comunicación tipo gap que facilita la comunicación rápida y coordinada. Figura 11.6 Corte longitudinal músculo cardiaco OBJETIVOS Que el estudiante al final la práctica sea capaz de: Identificar los tipos musculares a nivel histológico Describir las funciones de los tipos de tejido muscular MATERIALES Microscopios Laminas de corte longitudinal de músculo esquelético Laminas de corte transversal de intestino delgado Laminas de corte de corazón de mamífero PROCEDIMIENTO Observe al microscopio cortes de cada tipo de músculo (liso, esquelético y cardiaco) y describa lo siguiente: Morfología celular de cada tipo de músculo Unión intercelular Disposición de las células Diferencias a nivel de núcleo CUESTIONARIO 1. Realice una revisión del proceso de contracción muscular 2. ¿Cual es la función de las células satélite? 3. ¿Como se logra la contracción ininterrumpida del músculo cardiaco desde la etapa fetal hasta la muerte? 4. ¿Qué factores están involucrados con la contracción del músculo liso, que se localiza a nivel de: intestino delgado, vasos y capilares sanguíneos? 5. ¿En qué tipo de órganos se encuentra el músculo liso? REFERENCIAS 1. Bacha, W., Bacha, L. 2000. Color Altas of Veterinary Histology. 2da Ed. Lippincott Williamas & Wilkins. USA. 2. Barnard, C. 2004. Animal Behaviour, Function and Evolution. Pearson Education Limited. England. 726 pp. 3. Carlson, B. 2000. Embriología Humana y Biología del Desarrollo. Edición en español, Editorial Harcourt. España. 496 pp. 4. Cormack, D. 1986. Fundamentos de Histología. Editorial Harla, México. 5. Craigmyle, M. 1975. Atlas a Color de Histología. Wolfe Medical Publication. Inglaterra 6. Dollander, A., Fenart, R. 1986. 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Manual de Practicas de Histología General. 3ra Ed. Escuela de Química Biológica, Departamentos de Citohistología. USAC. 2000. 18. Manual de Técnicas Histológicas. Laboratorio de Histopatología, Departamento de Patología, Escuela de Medicina Veterinaria, Facultad de Medicina veterinaria y Zootecnia, USAC. 19. Moore. 1998. 5ta ed. Embriología Básica. Mc Graw-Hill. México 20. Noden-Lahunta. 2001. Embriología de los animales domésticos. Mecanismos de desarrollo y malformaciones. Edit. ACRIBIA. España 21. Sadler, T.W. 2010. Embriología Médica de Langman. 11na. Ed. Edit. Interamericana, México. 22. Sorensen, A. 1982. Reproducción animal. Principios y prácticas. Mcgraw Hill, México. 539pp 23. Stamp Dawkins, M. 2007. Observing Animal Behaviour, Design and analysis of quantitative data. Oxford University Press, USA. 158 pp 24. Stevens, A. y Lowe, J. 1999. Histología Humana. 2da Ed. Harcourt Brace de España, S. A. España. 408 pp. 25. Swenson-Reece. 1999. Fisiología de los animales domésticos de Dukes. 2da. Ed UTEHA. México. ANEXO TÉCNICAS HISTOLÓGICAS INTRODUCCIÓN La técnica histológica comprende la preparación de los tejidos para su estudio al microscopio de luz, lo cual se logra sometiendo a la totalidad o una parte seleccionada del tejido a una serie de procesos: Fijación Deshidratación Aclaramiento Inclusión Cote Tinción Tomando en cuenta los diferentes método más usuales para la descalcificación de los tejidos. OBJETIVOS Que el estudiante sea capaz de: Comprender la importancia de la realización de los cortes histológicos coloreados y su estudio en el microscopio Conocer los diferentes pasos a realizar en la técnicas de inclusión en parafina MATERIALES Formol al 10% neutralizado Alcohol isopropílico Xilol Parafina Hematoxilina Eosina Permount o Merckoglass Gelatina Acido Fórmico Baño de María Mechero Horno Autotecnicón o Procesador de Tejidos Centro de Inclusión Espátulas Pinzas Laminas porta objetos Laminillas cubre objetos Micrótomo Batería de coloración EQUIPO DE LABORATORIO OBTENCION DE LAS MUESTRAS Y FIJACION La recolección de material puede hacerse de animales encontrados muertos (dependiendo del tiempo de su muerte) y de animales sacrificados en el laboratorio, ya sea por desarticulación cervical, sangría, narcotización o shock eléctrico. Es preferible que el examen necrópsico sea realizado inmediatamente después de la muerte. Si es inevitable el retraso el cadáver debe ser colocado en refrigerador a 4 grados celsius o sometido a embalsamiento por vía arterial. Para la recolección de material deben respetarse las siguientes normas: Seleccionar adecuadamente las muestras de modo que sea representativa (del padecimiento) Las muestras deben ser tomadas lo más rápidamente posible después que el animal a muerto. Toda muestra debe ser debidamente identificada. FIJACION En cuanto se extirpa un tejido del organismo animal, se le priva de su irrigación sanguínea, empieza a descomponerse o a cambiar su morfología siendo una causa la falta de oxigeno, la acumulación de bióxido de carbono y otros productos del metabolismo celular y de acción de diversas enzimas (autolisis). Este mismo proceso empieza en todos los tejidos en cuanto se produce la muerte. La rapidez de la descomposición parece ser proporcional a la actividad metabólica propia del tejido. Así pues, para preservar el estado natural de las células de los tejidos, es indispensable detener cuanto antes este proceso de descomposición. Para este propósito, debe colocarse el tejido en un volumen adecuado de una solución fijadora lo más pronto posible después de la obtención de la pieza del organismo animal. La fijación es el proceso mediante el cual los elementos constitutivos de las células, y por tanto , de los tejidos, son fijados en cuanto a su estado físico, y parcialmente también, en su estado químico, de manera que puedan resistir el tratamiento sucesivo con varios reactivos sin perdida, distorsión importante o descomposición, la mayoría de los agentes fijadores actúan desnaturalizando o precipitando las proteínas, que forman entonces una esponja o red que tiende a englobar los otros componentes de la célula En condiciones ideales, un fijador debe penetrar rápidamente al tejido, su acción debe ser inmediata y debe causar una pérdida y una alteración química y física mínima de las célula y de sus componentes; debe además, ser barato, estable y de fácil manejo. En principios generales de manejo y fijación de las muestras la cantidad de liquido fijador debe ser aproximadamente 10 a 20 veces el volumen de la muestra, excepto cuando se utiliza tetraoxido de osmio, que es caro. Se debe tener en cuenta que no hay ningún fijador ideal y la elección depende del tipo de células o del tejido que se desee estudiar, teniendo presente las posibles tinciones posteriores. Fijadores Formol al 10% neutralizado (ordinario): Ha sido neutralizado con fosfatos para alcanzar un pH de 6.8, tiene la ventaja de que es económico, fácil de preparar, relativamente estable y permite el empleo ulterior de numerosas funciones, penetra bien en los tejidos y no los hace duros ni quebradizos. El tiempo de fijación depende del tamaño de la pieza y oscila entre 12 – 24 horas. Formol 37-40%........................... 100ml. Agua……………………………………..…… 900ml. Fosfato de sodio monobásico……. 3.5 g. Fosfato de sodio dibásico……………6.5 g. Buoin (Acido pícrico) Llamado también picro-formalina y es considerado uno de los mejores fijadores del glucógeno, pero tiene el inconveniente de alterar los lípidos y disminuye la cantidad y hierro férrico demostrable, también produce lisis de los glóbulos rojos. La fijación oscila entre 1 a 12 horas. Solución saturada de acido pícrico al 1.2%..... 720 ml. Formol al 37-40%......................................... 250 ml. Acido acético glacial…………………………………….. 50 ml. Carnoy (en alcohol) Es un buen fijador para el glucógeno y sustancia de Nissl pero disuelve otros elementos citoplasmáticos. Tiene el inconveniente de producir hemolisis y lacado de glóbulos y disuelve los lípidos y la mielina. Alcohol etílico………………………….. 600 ml. Cloroformo……………………………… 300 ml. Acido acético glacial………………… 100 ml. Zenker (metalicos) Esta solución destruye muchos glóbulos rojos y elimina gran parte del hierro de hemosiderina. Es excelente para preservar los detalles cuando se requiere tomar fotografías. La fijación oscila de 6 a 15 horas. Cloruro de mercurio……………… 50 g. Bicromato de potasio……………. 25 g. Sulfato de sodio……………………. 10 g. Agua……………………………………… 1000 ml. Formol 37-40%....................... 50 ml. Helly (metálico): Es un buen fijador para medula ósea y bazo. Es excelente para tomar fotografías. La fijación oscila de 6 a 15 horas. DESHIDRATACION Y ACLARAMIENTO DEL TEJIDO Los tejidos contienen grandes cantidades de agua tanto intra como extracelular, que debe ser eliminada y reemplazada por parafina, a este proceso se le denomina deshidratación. Tanto la deshidratación como el aclaramiento, se realizan en el autotecnicon, utilizando diferentes soluciones o reactivo como formol neutralizado, alcohol isopropílico (se mezcla bien con el agua para eliminarla), xilol (soluble en alcohol y afinidad con la parafina) y parafina fundida. También sin ayuda del aparato pueden sumergirse en diferentes niveles de alcohol (desde agua hasta alcohol absoluto) y también se utiliza xileno (xilol). INCLUSION Este proceso comprende la impregnación de los tejidos con un medio que llene todas las cavidades naturales extra e intracelular y que proporcione la consistencia firme necesaria para hacer cortes bastante delgados sin provocar distorsión y sin alterar las relaciones espaciales del tejido y los elementos celulares. La inclusión la realizaremos en el aparato de inclusión, este se compone de un recipiente que contiene la parafina fundida a 60 grados celsius y una plancha fría. Después de haber concluido el proceso en el autotecnicón se incluyen pequeños trozos de tejido en parafina fundida formando pequeños bloques. Para realizar este proceso utilizamos moldes ya sea de plástico o papel parafinado (existen moldes hechos). Dentro del molde, antes de colocar parafina, se coloca la pieza tisular poniendo hacia abajo el lado perforado y se llena con parafina, luego el conjunto se enfría sobre la plancha. Cuando este conjunto se ha endurecido, es retirado de la plancha fría, se anota el numero y se desecha el molde y se procede a cortarlo en cubos o se elimina el exceso de parafina. Los soportes para bloques o tejidos son de madera, para fijarlo a este se calienta una espátula plana de hoja en la llama de un mechero Bunsen: se coloca el fondo del bloque de parafina sobre la espátula y en cuanto se derrita se desliza sobre la superficie cerrada del bloque de madera, teniendo cuidado de que los lados del bloque de parafina sean paralelos a los del bloque de madera, se presiona el bloque de cera firmemente hacia abajo y se deja endurecer. Figura anexo 1 Procedimiento de fijación, deshidratación, aclaramiento, e inclusión CORTE EN MICROTOMO Microtomo: Maquina construida para obtener laminas muy delgadas de tejidos. Existen varias clases de micrótomos, por ejemplo: De deslizamiento Rotario De balanceo De congelación Para cortes ultra delgados que se usan en microscopia electrónica Estas maquinas utilizan un juego de cuchillas, de las cuales, las más utilizadas en la actualidad son las de fijo de cuña. El cubo de parafina con su soporte de madera se coloca en el micrótomo y se procede a calcular el corte. El corte recomendado debe hacerse de 4 a 5 micras de grosor, luego, con una pinza se obtienen las piezas cortadas y se dejan flotar en el baño de maría, que debe estar a 60 grados celsius conteniendo agua y gelatina. Después se recogen con una porta objetos, ya adheridos a este, se llevan al horno que debe estar a 60 grados celsius y se dejan durante un mínimo de 30 minutos para el secado. TINCIÓN Para poder colorear los cortes con hematoxilina-eosina se procede de la siguiente manera: Desparafinación: esto consiste en que antes de colorear debe eliminarse la parafina con una sustancia que la disuelva y para esto el xilol es lo indicado. Desparafinar los cortes con 3 recipientes con xilol, 5 minutos en cada uno Pasarlos después en 3 recipientes con alcohol isopropílico, 5 minutos en cada uno Lavar con agua corriente para hidratación, 5 minutos Colorear con hematoxilina, 5 minutos Lavar rápidamente con agua corriente Sumergir los cortes una vez en alcohol (isopropílico al 80% con 1ml de acido clorhídrico por cada 100 ml de alcohol al 80%) para diferenciar.