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UNIVERSIDAD
DE GlJADALA.JARA
CENTRO UNIVERSITARIO EN CIENCIAS BIOLÓGICAS Y AGROPECUARIAS.
DIVISION DE CIENCIAS VETERINARIAS
•
DETERMINACIÓN
DEL GRADO
DE
CONTAMINACIÓN
CON
OCHRATOXINA
"A"
Y
CUANTIFICACIÓN E IDENTIFICACIÓN DE HONGOS EN ALIMENTO BALANCEADO PARA
POLLO DE lcNGOIWA l<'.N GRANJAS DE LA PERIFERIA DE GUADALAJARA.
TESIS PRI::SENTADA POR
MVZ. MARICELA MARTÍNEZ VIRGEN
PARA OBTENI::R EL GRADO DE
MAESTRO EN CIENCIAS EN NUTRICIÓN ANIMAL
Director:
Asesor:
M. en C. Margnrita I-Icrn<Índcz Gallardo
DMV. Agustin Ra1nírcz Alvarcz.
Las Agujas, Ncxtipac. Mpio. deZapopan. Jalisco.
Febrero de 1999.
-
-
lJNIVEllSJD1\D D_E (;lJ1\l)1\J__,1\J1ld{A
- _,_ ____ --
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CENTRO UNIVERSIT1\JUO DE CIENCIAS BIOLOUIC.'\S Y /\GROl'l'Cl!i\IU:\<-;
DIVISIÓN DE Cll'NCli\S Vl'Tl'IUNi'd'-11\.c;
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COOHIHNACIÓi'i llE INVESTlt;ACTÚN Y l'OS<;K\PO
HHU\L\: <'l!'-·í!!lg
H. 1 Oi\llSION PE l'OSGHAllO
IH\'lSION DE CIENCIAS V~;TEIUNARJAS
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l'H.fi:SENTE.!'M
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este concltTltJ 11os pern1iti1110:' envir n 11sledcs Ja VEH~SIÓN FINAL de Ja TESIS clcs:i11oll;1d:i
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DETEílV!INACION DEL GRJlOO DE CONT/lMINACION CON OCRATDXff!A "A" Y CUANTIFICACION DEHJNGJS EN
- ---------------
---·---- - ------·· ------------------------------------------------- -------------------·----- --
ALIMENTO BALJINCEADO PARA POLLO DE ENGJRDA EN ffit\NJAS DE LA PERIFERIE DE GJADALAJARA.
-------- .. ----------·-------------·------------------------ ---------···------·-·-
l os que sus•;ribcn la ptcsenlc avalnn esta versión ele la tesis, la cual füc revisada cr1 forma
'. olcgi:irh y reune lo> requisitos mctodologicos necesarios.
ATEN'l'AMENTE
"l'U:NSA YTRABA.JA"
Las Agnjas, Nextipac, Mpio. de Zapopan, Ja!., ______ de ________________ _
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1
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----~Oll--
M.C. ALBERTO CASILLAS BENITEZ
M.C. LOURDES ISAAC VIRGEN
M.C. PEDRO M. GARCIA LOPEZ.
M.C. ESTHER ALBAARAN RCCRIGJEZ
Las Agujas, Ne:<tipac. Mpio. de Zapopan. Jal.. C.P. t'l 10 /.P 39-82 Tcls. ( 1Jl-3) 68202/J 68211.lH Fax. ü8201'!.ll
C>.:-ntro rvtédico Col. Iud,!pcndcncia lqxlo. Postal 1~,i¡ I(_> (jq~\r_f~1Jajara, Ja!. 'J'cl. 617 5008 Fax. (117 5102
UNIVERSIDAD DE GUADALAJARA
CENTRO UNIVERSITARIO DE CIENCIAS BIOLOGICAS Y AGROPECUARIAS
DIVISIÓN DE CIENCIAS VETERINARIAS
COORDINACION DE POSGRADO
DR. MARCELINO VAZQUEZ GARCIA
COORDINADOR DE POSGRADO DEL CENTRO UNIVERSITARIO
DE CIENCIAS BIOLOGICAS Y AGROPECUARIAS
PRESENTE.
Por éste conducto se hace constar que la pasante C. MARICELA MARTINEZ VIRGEN
ha cumplido con los requisitos académicos establecidos por el dictamen del POSGRADO EN
NUTRICIÓN ANIMAL para presentar su tesis, la cual se titula:
"DETERMINACION DEL GRADO DE CONTAMINACIÓN CON
OCHRATOXINA "A" Y CUANTIFICACION E IDENTIFICACION DE
HONGOS EN ALIMENTO BALANCEADO PARA POLLO DE ENGORDA
EN GRANJAS DE GUADALAJARA"
Por lo tanto se le solicita sean expedidos los oficios conespondientes para que el Exámen de
Tesis se realice el día 04 de Febrero de 1999 a las 12:00 horas en la Sala de Eventos Académicos de
la División de Ciencias Veterinarias, contando con para ello con el siguiente jurado:
PRESlDENTE:
SECRETARIO
VOCAL:
VOCAL:
VOCAL:
Dra. IRMA ELIZONDO ESPINOZA
Dr. AGUSTJN RAMJREZ AL V AREZ
M. en C. Ma. De LOURDES ISAAC VIRGEN
M. en C. DELIA GUILLERMINA GONZALEZ AGUILAR
M. en C. ALBERTO CASILLAS BENITEZ
Sin otro particular y agradeciendo de antemano su valioso apoyo, me despido no sin
antes enviarle un cordial saludo.
c .. c.p. El Director de la Div. de Cs. Vet. MVZ Fabian Uviña Luna.
c.c.p. El Secretario de la Div. de Cs. Vet. MVZ Francisco J. Lagos Navarrete.
c.c.p. Archivo de la Coordinación de Posgrado de la Div. de Cs. Vet.
AGRADECIMIENTOS
CUCBA
··_A P.R.
m.
lj
Á nila .
.Á m i cÍireclor lj aJe601· cÍe Íe6i6.
BIBLIOTECA CENTRAL
CONTENIDO
Página
RES U M EN---------------------------------------------------------------------------------- X
1NT Ro D u e e 1ó N-------------------------------------------------------------------------
PLA NTEAM 1ENTO DEL PROBLEMA--------------------------------------------- 5
JU STI F 1CAC1 Ó N-------------------------------------------------------------------------- 6
H 1PÓT ES 1S--------------------------------------------------------------------------------- 8
O B.I ET 1VOS-------------------------------------------------------------------------------- 9
MATERIAL ES Y MÉTODOS---------------------------------------------------------- 1O
RES U LTA DOS----------------------------------------------------------------------------- 23
se us 1ó N---------------------------------------------------------------------------------
D1
29
CON C L U S 1O N ES------------------------------------------------------------------------- 33
B IB L 1OG RA F 1¡\--------------------------------------------------------------------------- 34
CUCBA
X
RESUMEN
Bii::,1; )]'ECA CENTRAL
La contaminación por hongos es muy común en México las ochratoxin as son metabolitos ele
los hongos como A5pergil/11s ochraceus y Pe11ici/i11111 viridica/11111 que pueden estar presentes en
diversos productos agrícolas, así como en los tejidos de los animales consumidores ele
productos co ntaminad os, representando un problema de salud.
El presente estudio se realizo para determ inar los agentes causales de dicha co ntaminación,
realizar investigación que proporcione información de la región a las organizaciones de
prod uctores de aves.
Para la realización de este trabajo, se tomaro n 90 muestras al azar de alimento para pollo de
engorda de di ferentes granj as de pollo de engorda, en la peri feria de la ciudad ele Guadalajara
Jal.
Con el fi n de determinar el grado de contaminación con ochratoxina " A" así como la
cuantificación e identificación de hongos en el al im ento balanceado, se util izo la técni ca de
vaciado en placa y cromatografía de capa fina .
Dentro de los resultados se observó el grado de humedad variada del 8 al 13 .4%, del 100% de
la muestras se obtuvo recuentos de unidades formadoras de co loni as ; altos 3.3%, moderados
4 1. 1%, y bajos 55.6%. Se identifi caron los géneros A.\pergillus .\fJfJ 13.95%, Pe11ici/lium spp
8.99%, Fusarium spp 10.89%, ¡.,¡;icoccum .\fJfJ 5.43%, Viridicat111n .\fJfJ 5.67%, Absid ia spp
8.05%, Diplodia ·\PP 5.43%, Rhizo¿ms .\fJfJ 5.67%, Phoma spp 6. 14%, Alternaría .\fJfJ 8.05%,
1\1/ucor .\fJP 8.98%, 'frichoderma .\fJP 6. 14%, Cladospori11m spp 5. 91 %, y Paeci/omvces spp
.7 1%.
Lo s resultados ele prevalencia y grado de contaminación de hongos encontrados, en las
muestras fueron co n ochratoxina "A" en un 17% se concluye que el alimento se encontró
contaminado por hongos así como con ochratoxina "A" .
Es importante realizar mas investigación para determinar la prevalencia y efecto de estos
contaminantes y sus efectos de salud animal especialmente en salud publica.
CUCBA
INTRODUCCION
BIBLIOTECA CENTRAL
El hombre ut iliza co mo principal co mponente de su alimentación a los
granos, y sus derivados, En los países en vías de desarro llo aprox imadamente un 85% de la
alimentación del hombre depende de los productos agrícolas y en pa íses clesarroll aclos el 40%.
Se considera que la dieta del homb re, a nivel mundial, esta constituida en un 70% por
productos vegetales, princi palm ente granos, y en un 30% de productos ele origen anim al. Los
al i mcntos de origen pecuario so n producidos en gran parte con granos y concentrados
proteicos que provienen del proceso de ext racción de aceites el e a soya, giraso l, ajonjo lí,
carta mo y algodón. Los granos en fo rm a directa o indirecta , co nstituyen la fuent e principal de
energía en la alimentación del ho1nbre y de los animales ( 17,29,38).
Las materi as primas para la alim entación an imal so n po rtadores naturales de
bacterias, levaduras y hongos. Después de los esfuerzos rea li zados para superar estos
problemas, se deteri ora su calidad nutricional y sanitari a por la acción de fac tores fí sicos y
bióti cos, que son favo recidos por la carencia de infraestructura adecuada para el
almacenami ento y co nservación ( 12,24,29,36).
Las perdid as cualitativas y cuantitativas que sufren los granos, sem illas, frutas y
verduras por insectos, roedores, pájaros y hongos incide n en los al macenes. En el caso de los
2
insectos y hongos, el principal factor que favorece su desarrollo es la humedad y la
temperatura ( 1 1,3 1).
Sin e111bargo, en algunas zonas agrícolas los granos se cosechan con alto
contenido de humedad, sufriendo un rápido deterioro. Por otra paite, el grano seco almacenado
en lugares húmedos igualmente favorece la proliferación de hongos de almacén Es aquí donde
se encuentran los nutrimentos para cubrir las necesidades de los hongos y acelerar su
crecimiento y multiplicación (11,30)
Además durante la cosecha, y el manejo, hasta su destino final los granos
están expuestos a sufrir daños fisicos que generan fuertes perdidas. El grano quebrado
favorece la actividad de los hongos quienes constituyen una de las causas de perdida de
viabilidad y volumen de la calidad nutritiva y sanitaria de los granos que se consumen (10,36).
En los granos cereales y frutas se encuentran variedad de géneros y especies
de hongos toxigenicos, responsables importantes del deterioro de estos que pueden producir
una o más micotoxinas (4,26,43).
La contaminación por hongos en graneros y silos se lleva a cabo
principalmente por los géneros Aspergil/11s y algunos l'e11icilli11111, es ahí donde encuentran las
condiciones favorables para su desarrollo y donde sus esporas permanecen viables de ciclo a
ciclo. Las características principales de estos hongos es su habilidad de crecer y producir
1
sustancias tóxicas bajo condiciones de humedad relativa de 75 al 85%, temperatura ele 12 a
37ºC, oxígeno, clioxiclo ele carbono y tiempo por 3 a 5 días (l,3,24,32)
A estas sustancias tóxicas se le conoce con el nombre ele micotoxinas que
son un grupo muy variado de sustancias químicas-tóxicas elaboradas por hongos toxigénicos,
Los cuales al crecer en alimentos que contienen substratos específicos para su crecimiento ele
ellos y además las condiciones ele humedad, temperatura del ambiente favorable (44,47)
Una vez producidas las
micotoxinas son compuestos
muy estables,
terrnoresistentes, que provocan cambios patológicos en seres humanos y animales. Uno de
estos compuestos tóxicos es la ochratoxina , comúnmente producido por especies de hongos
del genero, l'e11icij/111J.1. viridicu/11111 y A.IJ1C!JJ;if/11s ocmcrns, hongos ampliamente distribuidos
en la naturaleza. La cantidad de ochratoxina producida por el de hongo dependerá de los
factores;
actividad del agua, temperatura, tipo de substrato, presencia de microflora
competitiva, cepa del hongo e integridad de la semilla (3,7, 18,28).
Se han identificado cuatro tipos de ochratoxinas, A, B, C y D, ele estas cuatro
la ochratoxina "A", es la más frecuente en la naturaleza y tres veces más tóxica que las
aflatoxinas, por tal motivo se considera importante como contaminante de las materias primas
y alimento terminal para pollo de engorda (4, 13,21,42).
20
6
La ochratoxina "A" (C H 18 C l N0 )es un compuesto cristalino, incoloro, con
un peso molecular aproximadamente 404, su punto de fusión cristalizado en benceno es de 94-
96º C, cuando se cri stali za co n x i leno es ele l 69ºC , presenta una flu orescenci a azu l verd oso
con luz ultravi oleta en placas de cromatografía ele capa fin a de gel ele síli ce , Guancl o es
expuesta a gases de amoniaco, la fluorescencia cambia azu l i ntenso. Su RF 0.7 en tolueno
+
acetato ele eti lo 90% +ácido fó rmi co (6: 3: 1) tiene una ab so rción ele luz ultrav ioleta máxi ma
2 15 y 334 nm (8 ,42,45).
CUCBA
OCl-I RATOXINA " A".
OH
CHz - CH - N H - CO
1
COOH
BIDLIOTECA CENTRAL
o
o
CUCBA
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
BIBLIOTECA CENTRAL
La avicultura
in tensiva requiere de
alimentos
balanceados, en
la
alimentación se proporcionan los nutrimentos indispensables para el desarrollo pero, al mismo
tiempo se pueden incluir co mpu estos tóx icos de mi croorganismos no deseab les para la salud y
producción.
Sin embargo el poco control (de humedad y temperatura ) que se tiene en
los al macenes de materia s primas y alimentos balanceados, permite que los hongos proliferen
y qu e produzcan las substancias tóxicas y así estas so n introdu cidas a los animales.
Entre los mi croo rganismos que se pueden encontrar en el ali mento
balanceado para
pollo de engord a se pueden locali za r los hongos productores de la
ochratoxina " A", siendo esta una tox ina de suma importancia por los efecto s que producen en
los po llos y a la vez po r la acumulaci ón en los tejidos y huevo, fo rmando con esto un serio
prob lema ele Salud Pub lica.
El determin ar el grado de contaminació n con ochratoxi na " A" perm ite
buscar alternati vas ele manejo y almacenami ento libre de sustancias tóxicas.
CUCBA
6
.JUSTIFI CACIÓN
BIBLIOTECA CENTRAL
Las micotox inas son sustancias tóxicas producidas en el met abolismo de los
hongos que aparecen como co ntamin antes natural es en los alimentos cuando las cond icio nes
clim atológicas so n propicias, teniend o en cuenta la presencia ele la ochratoxi na " A" , corno
contaminante, en el alimento para pollo el e engord a es conocid o que esta es uno ele los
pri ncipal es problemas que causan perdid as económi cas donde la avicultura se desarroll a. Estas
perdidas so n debidas a disminució n en los rendimi entos producti vos, electos negativos sobre
el sistema inmunológico del animal y un incremento en la morbil idad y mortali dad de las
parvadas. La co ntamin ación de granos y aliment o es virtua lmente inev it ab le, pero puede ser
cont rolad a.
La ochratox ina " A" produce retraso del creci miento en aves jóvenes, au nque
la ingesti ón ele ni veles altos es capaz de producir la muerte en 24 horas la única manera de
evitar la ochrat ox icosis es imp idi endo la ingestión de niveles tóxicos.
Es responsabilidad de las industrias avíco las el incrementar y mejorar las
técnicas ele manejo para reducir el crecimiento ele hongos y la subsecuente formació n de
ochratox ina " A". La ingesti ón de esta micotoxina causa variada sintomatología en animales,
principalmente es nefrotoxica. Los efectos ele esta en humanos están determinados, por el
consumo de alimento con esta toxina.
7
Por esta razón se hace necesa ri o ll evar a cabo investigaciones con el propósito
de conocer la calidad de alimentos que son proporcionados a las aves y poder co ntrolar la
contaminación.
La micotoxicosis es uno ele los padecimientos que esta causando más estragos
en la industria agropecuaria. especia lmente en aves y cerdos. tanto a nivel nacional como
mundial, aumentando el costo ele producción .En países con escasa tecnología, la contaminación
de alimentos durante el almacenaje, es mas frecuente ll egando a ser hasta del 30%.
CUCBA
BIBLIOTECA CENTlUL
HIPÓTESIS
Si se prese ntan las condici ones climatológicas de humedad y temperatura
adecuadas
aunadas a un manejo in adecuad o del alimento balanceado, exclusivas para la
proliferación de la fl ora mi cológica, los alimentos podrán presentar altos porcentajes ele
co ntamin ación fungi ca y por mi cotox inas, en el consigui ente un elemento de riesgo para su
consumo.
CUCBA
BIBLIOTECACENTRAL
•)
OBJETI VO S
Determin ar el grad o de co ntaminación co n ochratoxin a " A", así co mo la
id entifi cació n y cuantifi cación de hongos en el alimento balanceado para po llo de engord a.
PA RTICUIA RES:
1. Determinar la correlación entre presencia de hongos y hum edad del ali mento para pollo de
engo rda.
2. Determinar la carga Cúngica del ali mento med iante recuento de unid ades fo rmadoras de
coloni as (U. F.C./g).
3 . . Identifi ca r las espec ies fú ngicas más frecuentes en aliment o balanceado, mediante la
técnica ele vaciado en placa.
4. Cuantificación ele ochratoxina " A" en alimento balanceado para pollo de engord a.
CUCBA
1BJRLIOTECA CEN1R \L
111
MATERIALES Y MÉTODOS
El presente trabajo se llevo a cabo en el área de micotoxicologia del
Departamento de Salud Publica de la División de Ciencias Veterinarias del Centro
Universitario de Ciencias Biológicas y Agropecuarias.
Se recolectaron 90 muestras de alimento balanceado en granjas para pollo de
engorda, en la periferia ele la ciudad de Guadalajara. Estas se obtuvieron de comederos,
almacenamiento y tolvas de las etapas ele iniciación, desarrollo y finalización.
Se utilizó un muestreador de grano para recolectar el alimento y depositarlo
en mantas para su homogenización, obteniendo muestras compuestas de aproximadamente 2
kg se depositaron en bolsas de papel previamente identificadas y se transportaron al área de
1nicotoxicología para la siguientes deternlinaciones;
1. Determinación de humedad. (Diagrama 1)
2. Cuantificación e identificación de hongos por la técnica de vaciado en placa.(Diagrama 2).
3. Determinación cualitativa y cuantitativa de Ochratoxina "A"
cromatografia de capa fina.(Diagrama 3).
por la técnica de
11
Los criterios que se uti lizaro n para la identifi cación de hongos productores
de rni cotoxinas se basaron en la observación y co mparación ele los cultivos mi croscó pi cos y
macroscópicos.
CUCBA
BIBLIOTECA CENTRAL
12
DIAGRAMA No. 1
DETERMINACIÓN DE HUMEDAD
l s minutos 1
2.5 g. de muestra
molida
1_ iil:ilii
1S A R T O R 1U •
rnn º'..
- - - Moisture Oetem1ination
OFICIJ ON
DIAGRAMA No. 2
CUANTIFICACIÓN E IDENTIFICACIÓN DE HONGOS POR LA TÉCNICA
DE VACIADO EN PLACA.
PREPARACIÓN DEL MEDIO DE CULTIVO
39 g. de Agar
Papa Dextrosa
1,000 mi. de
Agua destilada
CUCBA
pH 7 ± 0.2
'
8
BIBLIOTECA CENTR,\L
Esterilizar a 121 ºC
durante 15 minutos
1 Conservar a 45°C 1
PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓ N DE ROSA DE BENGALA
100 mi. de agua
destilada estéril
0.6 g. de Rosa de
Bengala
A cada 100 mi. de medio
de cultivo adicionar
1 mi. de esta solución
---•-
Conservar en refrigeración
PREPARAC IÓN DE LA SOLUCIÓN DE AMPI CILINA
10 mi. de agua
destilada estéril
200 mg. de
ampici lina
A cada 100 mi. de medio
de cultivo adicionar 0.5 mi
de la solución de ampicilina
CUCBA
PREPARAC IÓN DEL DILUYENTE DE PEPTONA
1 g. de peptona
decase in a ~
/
1,000 mi. de agua
destil ada
BIBLIOTECA CENTk,,L
Esterilizar a 121 °
durante 15 minutos
pH 7 .:!:
90 mi.
0.2
!
Enfriar a temp eratura
ambiente
14
RECUENTO DE HONGOS POR LA TÉCNICA DE VACIADO EN PLACA
1 ni.l.
1 ml.
1 0 g . DE
1 ml.
MUESTR..Z'i.
AGUA
PECTONADA
~
90 ml.
~
cl .
t
~
~~
,
lill. .
+
+
1 rcl .
1 !."1.l .
l ~ ~l .
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1 ml .
1 ml.
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~
de mod io dQ
cul -ei v e ;i d.icl.on ;i.do
d e Ros ~ d e SQngala
y ¡...,'U.pioiliana.
10 · •
10 _,
Incub.:. r e<: 3 a 5 ct:..as .a 20
se
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>
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~
~
~
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t:""'
~
e!
~
Cd
>
10 •
10 '
·~-:
15
INTERPRETACIÓN DE RECUENTOS DE UNIDADES
FORMADORAS DE COLONIAS
10 2
-
10 3
10 4
-
10
10 6
-
10 7
RECUENTOS BAJOS
5
RECUENTOS MODERADOS
RECUENTOS ALTOS
AISLAMIENTO
IDENTIFICAR LAS CEPAS
POR SUS CARACTERÍSTICAS
MACROSCÓPICAS
CUCBA
AISLAR LA CEPA EN AGAR
PAPA DEXTROSA
INCUBAR DE 3 A 5 DÍAS
A 20 ºC
16
M ICROCUL TIVO
Caja de petri de 100 x 20 mm
Gas a dob le
Varilla de vidrio en "V"
Portaobjeto desengrasado
Cubreobjeto
Esterili zar a 121 ºC
durante 15 minutos
-
Cuadro de agar papa dextrosa
CUCBA
Inocular con la cepa aislada
los cuatro extremos libres
del cuadro de agar
1
1O mi. de agua destilada estéril
BIBLIOTECA. CENJ'HAL
Incubar de 3 a 5 días a 20 ºC
17
TINCIÓN
l Desechar el agar
/
1.- Retirar el cubreobjeto
2.- Retirar el portaobjeto
/
Colocar una gota de
azul de lactofenol
Colocar una gota de
azul de lactofenol
\
/
Sobreponerle un
portaobjeto limpio
Sobreponerle un
cubreobjeto limpio
OBSERVAR AL MICRO SCO PIO!
(5,8, 11 )
.
CUCBA
BIBLIOTECA CENTRAL
18
DIAGRAMA No. 3
DETERMINACIÓN CUALITATIVA Y CUANTITATIVA DE OCHRATOXINA "A"
MUESTRA MOLIDA
TAMIZAR EN MALLA No. 20
25 g DE LA MUESTRA
50 mi. de una
mezcla de
metanol+agua
- (1: 1)
CUCBA
1 AGITAR DURANTE 1 HORA
1
10 mi. de
Hexano
FILTRAR AL VAC IO
j
1
8lí;!.!OTECA CENTRAL
.....~....---11 AG ITAR 1 MINUTO !
Se recoge
19
METANOL/AGUA
CLOROFORMO
Se recoge
1
1
FILTRAR POR SULFATO DE SO DIO ANHIDRO
1
EVAPORAR A SEQUEDAD
REDISOLVER EN 2 mi. DE CH-Cl 3
CUCBA
CO NSERVAR A-20 ºC
HASTA SU ANÁLISIS
nmuorECA CENl'J<..\L
20
DETERMINACIÓN
PREPARA CIÓN DE CROMATOPLACAS
30 g. de Sílica ge l
66 mi . de Agua Desti lada
agitar
apli cación en pl acas de cristal 20 x 20 x 0.3
111111 .
dejar a temperatura ambiente durante 30 minutos
activar en horno a 1 1O ºC durante 60 minutos
CUCBA
BIBLlOTECA CENTlU.L
21
APLICACION DEL EXTRACTO Y
ESTANDAR A LA CROMATOPLACA
000000000
T." l • A•l,H
:.
•' :
')
"; !.
'1
CUCDA
BIBLIOTECA CENTRAL
22
DESARROLLO DE LA CROMATOPLACA
BENCENO
AC . ACETICO
(66:33 v/v)
Se llar con grasa
sili cona
papel filtro 20 x 20
000000000
Dejar el tiempo necesario
para que los so lventes alcancen
una altura de 16 cm . a partir del
punto de aplicación
Retirar la cromatoplaca y dejar
secar a te mperura ambiente
Observar a la lu z ultravioleta
para comprobar flu oresce ncia de
la muestra contra el estánda r
CUCBA
Determinar Rf de la muestra contra
el Rf del estándar
mediante la fórmula
Frente del soluto
R f = ---------------------------------------- (7, 9, 30 y 31)
Frente del estánda r
BIBLIOTECA CENTRAL
RESULTADOS
El porcentaje de hum edad en el ali mento balanceado para pol lo ele engorda mostró un
rango de 8 al 13.4% y se observo que la humedad en la cual se presentaron mayor número ele
géneros de hongos fue el de 13.4% (cuadro 1).
En el 100% de las mu estras procesadas se obtuvieron recuentos ele unidades formadoras
de coloni as ele la siguiente manera; Altos ( 1o<'- 107 Uf'C/g) 3.3%, Moderados ( 10'1- I 05 UFC/g)
1
4 1. 1%, y Bajos( 102 - 10 UFC/g)55.Mlo(G rál'ica 1).
Se aislaron 423 cepas correspondi endo a las siguientes géneros: tb¿Jen:il/11s .\fJfJ 13.95%,
/>e11icilli11111 .\]JfJ 8. 99%, F11sari11111 ·'PP 10.89%, lLJico<:c11111 ·'PP 5.43%. Virticilli11m .\]JfJ 5.67%,
Absidia .\]JfJ 8.05%, Oiplodia .\]JfJ 5.43%, Rhi:.ov11s .\]Jp 5.67%, fJfJ011w .\fJfJ 6. 14%, A/femaría ·'PP
8.05%, M11cor spp 8.98%, fric/1odermo .\JJfJ 6. 14%, Clclllos¡Jori11111 spp 5.91%, y /1aeci/0111vces
·'PP .7 1% (Gráfica 2 ).
De las 90 muestras del alimento balanceado para poll o de engorda el 17% presentaron
ochratoxina " A" ( Gráfica 3). La concentración de ochratoxina "A" que se presentaron ele esta
micotoxi na fue de 16 ppb a 125 ppb (Gráfica 4).
CUCBA
24
CUADRO l. Humedad Relacionada con Géneros de Hongos Encontrados en el Alimento para Pollo de Engorda
Humedad(%)
GENEROS
Pe11ici/!11m sov
Fusarium svv
I 8 I 8.9 I 9
3
5
3
1
1
2
1
2 ¡- 3 1 1 i
--12rz
2
1
Dip/odia spp
12
Rhi::ovus sov
11
P homa spp
1
Altemariasvn
1
Mucor sm1
1
Trichoderma snv
C!adiosporum s1111 1
Paeci/om¡:ces smJ
Asperzi/lus S/J/J
2
TOTAL
1
15
1
1
¡ ··
3
11
1
I 9.3 I 9.6 I 9.8 1 10
2
1
1
2
1
2 1
1 1
2
2
1
1
1
1
2
1
1
2
2
1
1
1
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1 2
1
1
1
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2
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36
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¡
1
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25
GRAFICA 1
Recuento de Unidades Formadoras de Colonias por G ramo en Alimento Balanceado
para Pollo d e Engorda
w
...,
<x:
:z
1-
w
()
a:
o
n.
RECUENTOS BAJOS
RECUENTOS MODERADOS
RECUENTOS ALTOS
CUCBA
BIBLIOTECA CENT:{'..L
26
GRAFICA 2
!ncia
Porcentaje de Géneros de Géneros de Hongos Identificados en Alimento para Pollo d e
Engorda
14
O Aspergillus spp
12
mPenic11/ium spp
O Fusarium spp
O Epicoccum spp
11 Viridicatum spp
~
'¡;j'
8
O Absidia spp
e
lil Oiplodia spp
QI
u
o
o.
O Rhizopus spp
• Phoma spp
~ A/ternaria
spp
O Mucorspp
lil Trichoderma spp
2
fi Cladosporium spp
11 Paecilomyces spp
Géneros
CUCBA
BlBUOTECA CENTRAL
27
GRAFICA 3
Presencia de Ochratoxina " A" en Alimento para Pollo de Engorda
Ochratoxina
17°/o
•con
Dsin
83°/o
CUCBA
BIBLIOTECA CKNTRAL
GRAFlCA 4
Concentración de Ochratoxina "A" en Alimento para Pollo de Engorda
35
31 %
25
..,e(
1-
20
16%
z
w
u
IX
IX
o
Q.
15
10
16 ppb
75 ppb
80 ppb
90 ppb
90 ppb
ppb= partes por billon
CUCBA
IVBLIOTECA CENTRAL
C"'1·uCBA.
29
DISCUSIÓN
BIBLIOTECA CENTRAL
El presente trabajo enfocó su atención a la ochratoxina "A" por ser co nsiderada como la
micotoxina ele mayor impo11ancia en la producción avíco la. Con este enfoq ue intereso
prioritariamente determinar la frecu encia co n qu e los alimentos para aves se encuentran
contaminados con hongos ele los géneros productores ele ochratoxina "A"-
Los hongos ele almacén so n principalmente especies del género Aspergil/11s y algunos ele
Penicilli11m. Las características ele estos hongos es su habilid ad para crecer bajo condiciones de
poca humedad, ya que son capaces ele desarrollarse en granos y semillas que tienen bajos
conten idos de humedad en equilibrio co n la humedad relativa. Esto explica los resultados
obtenidos, al encontrar crecimientos de Aspergil/11s y Fe11icilli11m en hum edades de 8, a 10% que
se consideran bajas (5, 10,25).
Debido a su habil idad para crecer en humedad es relati vas ele 70-90%, de su capacidad de
crecer prácticamente en cualqui er sustrato y del número de esporas que obti enen en su
reproducción asexual, estos hongos tienen una amplia distribución aérea, afectando en diversas
formas al hombre, entre ellas deteriorando a los alimentos ( 1, 10, 12,23 ,26,39,43).
Los grupos de especies de Aspergi/111s que son más comunes en granos y semi llas
almacenadas son: A. reslrict11s, A.
gla11c11.s~
A. ca11did11s. A. versicolor, A. ochraceus y A. f lavus.
_\{)
Todos estos grupos están formados por especies que guardan entre si, una relación en cuanto a su
n1orfología y ecología.
El grupo que con más frecuencia se encuentran relacionados con el deterioro ele granos y
semillas al igual que el alimento balanceado es el ;b¡;e1gj//11s ¡;lu11c11s, debido a que las especies
que lo forman pueden iniciar su crecimiento a contenidos de humedad, frecuentemente
encontrados en los granos almacenados, de 6 a 14%. El género l'e11ici/li11111, se ha registrado más
ele 60 especies aisladas en granos y sus derivados. Este género presenta grandes dificultades para
·•
su determinación, por lo que generalmente se registra como l'e11icilli11111 spp. Esto concuerda con
los resultados obtenidos al encontrar con mayor porcentaje a los géneros de 11.\¡;en;i//11s y
l'e11icilli11111 (14, 35).
Entre las cepas aisladas con potencial ele producción de micotoxinas se encontraron;
l'e11icil/11111 Clado.1pori11111, F110{1ri11111 y Altemaria, en frecuencias elevadas. La frecuencia del
género Aspen;il/11s, en que se encuentra en alimentos es considerable, en trabajos anteriores se ha
reportado que en granos almacenados se aislaron cepas füngicas correspondientes a; A.1¡;e1gil/11s,
l'e11icilli11111 y h1sari11111. (23,39).
Por razón de la distribución ubicuitaria de los hongos y esporas existe en cualquier
momento la posibilidad de una recontaminación de alimento balanceado para pollo ele
engorda ( 1,1 O).
11
Corno se menciono la ochratoxina es un metabolito producido por los hongos A.1pe1gij_/JL'
ochrace11s y l'e11icil/i11111 1•iridica/llf!! En México se carece de información ele los niveles ele
ochratoxina "A" en grano forrajero y productos ele origen animal, ele aquí el interés por realizar
este trabajo.
Existe un interés por conocer cada día más los efectos y métodos y ele control ele las
rnicotoxinas en el campo avícola. Por tal motivo se ha considerado importante presentar las
interacciones ele las rnicotoxinas que pueden encontrarse simultáneamente corno contaminantes
ele las materias primas y alimentos tenninaclos. ( 1, 13,31,39,40).
La aflatoxina y ochratoxina tienen en común el ser producidas por hongos toxigénicos del
género ;bf.;en;i//11.1· y l'e11icilli11111, ambas tienen efectos anticoagulantes sobre las aves, ambas
inhiben las síntesis de proteína al igual que disminuyen la resistencia a las enfermedades, cuando
los animales están expuestos a ellas. Sin embargo tienen estructuras químicas diferentes siendo
consideradas las atlatoxinas primordialmente hepatotoxicas y la ochratoxina "A" nefrotoxica . Las
aflatoxinas son difuranocumarina producidas principalmente por tres hongos toxigénicos ;
Aspen;il/11s f!av11s, Aspergil/11s parasilirns y /'e11icil/11111 p11heru/11111. La ochratoxinas son
derivados isocumaricas ligados a la fenilalanína producida por lo menos por siete especies de
Aspergillus y seis especies de Penicillium siendo los hongos toxigénicos más importantes
Aspergillus ochrace11s y el Pe11icilli11m viridica/11111. De las cuatro ochratoxinas la ochratoxina
"A" es considerada la más irnpo1tante por su toxicidad y frecuencia de presentación , en la
naturaleza. ( l 6, l 8, 19,20,22,34).
_)1
Casos naturales de ochratoxicosis "A" han sido descritos en pollos, pavos y porcinos. Esta
micotoxina se ha clasificado primordialmente como nefrotoxica en pollos de engorda y puede
causar lesiones a los riñones y al hígado, además de alterar la coagulación sanguínea, impedir la
fagocitosis de los heterófilos e inducir una severa leucocitopenia, y también aumentar la
fragilidad intestinal y aumentar el depósito de glucógeno hepático (5,20,27,33,34,37)
Se han encontrado repottes en Bulgaria, Finlandia, India, Inglaterra, Australia, Hungría,
Alemania
y
Canadá
de
cereales
contaminados
con
ochratoxina
"A
"
( 1I,12, I 3, 18, 19,22,24,26,36,38,39,42,43,44)
En México el INif' AP ( 1996) realizo un estudio para la determinación de ochratoxina "A"
en sorgo, avena y cebada provenientes de algunas regiones productoras del país (Tamaulipas,
Michoacán, Jalisco, Puebla y Tlaxcala). Se recolectaron 40 muestras , obteniendo resultados de
100 mg/kg de ochratoxina "A" en los granos forrajeros. Esto coincide con los resultados
obtenidos en el alimento para pollo de engorda. Es impo11ante señalar que aunque en México no
se ha informado de casos de nefropatias en pollo de engorda es necesario cuantificar el contenido
de ochratoxinas, tanto de producto agrícola como pecuarios, para un mejor control de calidad y
disminuir el riesgo potencial que implica el consumo de productos contaminados con estas
micotoxinas (28).
CONCLUSIONES
11¡¡¡ I.i 0TECA CENT.R.u,
1. La muestra que presento mayor número de géneros de hongos fue la que presento el 13.4% de
humedad.
2. El 100% de las muestras el e alirnento para pol lo de engorda prese ntaron recuentos de unidades
formadoras de coloni as.
3. L os géneros de hongos que se presentaron con mayor frecuencia fu eron ~ Asvergi/11/s S/JfJ
13.95%, />e11icilli11m spp 8.99%, y !·ilsari11m .\yJfJ 10.88%.
4. El ali rn ento balanceado ele po i lo de engorda se encontró contaminado con ochratoxina " A" en
concentraciones que varían de 16 a 125 µpb . Consider ándo lo co rno un ali mento no apto para
el consumo animal.
CUCB~~
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