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Soluciones automáticas para el
control microbiológico de
alimentos
XI WORKSHOP MRAMA
Barcelona – Noviembre 2012
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XI Workshop Métodos Rápidos y Automatización en Microbiología Alimentaria
Barcelona - Noviembre 2012
¿Quiénes somos?
Empresa de biotecnología que desarrolla, produce y
comercializa reactivos y equipos automáticos para el control
de la calidad microbiológica en productos de consumo.
SECTOR ALIMENTACIÓN
SECTOR FARMACÉUTICO
SECTOR COSMÉTICO
SANIDAD ANIMAL
bioMérieux + AES = completo rango de soluciones para todas
las etapas del proceso: desde la preparación de la muestra
hasta la obtención del resultado.
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Distribución mundial
• 150 PAISES
• 14 + 2 CENTROS I+D
• 18 + 1 CENTROS PRODUCCIÓN
3
• 39 FILIALES
• > 100 DISTRIBUIDORES
• > 6.000 EMPLEADOS
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Investigación y Desarrollo
Boxtel
(Netherlands)
Lyon: Marcy, Craponne, La Balme (France)
Saint Louis (USA)
Grenoble (France)
Shanghai (China)
Durham (USA)
Rio de Janeiro
(Brazil)
MÁS DE 900
EMPLEADOS
4
14 CENTROS I+D
Florence (Italy)
INVERTIMOS EL 13%
DE LAS VENTAS
> 400 FAMILIAS
DE PATENTES
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Barcelona - Noviembre 2012
Objetivos
• Nuestra misión: a través
del diagnóstico in vitro,
contribuimos a mejorar la Salud Pública en el mundo.
• Gama completa: soluciones en cada etapa del análisis desde preparación de muestra hasta genotipado
microbiano.
• Nuestra apuesta: FMLA (Full Microbiology Lab
Automatization) Ofrecer técnicas rápidas y sencillas
para la automatización integral del laboratorio.
• Prioridades: CALIDAD y SERVICIO.
• No sólo proveedores, también ASESORES.
• Formación al cliente: cursos generales y a medida.
• Congresos, simposios, jornadas técnicas.
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Soluciones
… diseñadas para dar respuesta a las necesidades del sector:
•
•
•
•
•
•
Rapidez en la obtención de resultados.
Fiabilidad: técnicas eficaces (sensibilidad / especificidad).
Automatización.
Sencillez: técnicas fáciles de usar.
Mínima manipulación.
Validaciones internacionales (AFNOR, AOAC, etc.):
métodos validados (ISO 16140) y estandarizados Técnicas mundialmente reconocidas.
• Trazabilidad.
• Calidad (Certificación ISO 9001, sistemas de gestión, ISO
11133, parte 1 y 2).
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Soluciones
• Preparación de la muestra: DILUIDORES / TRITURADORES
• Material de referencia para control microbiológico
cuantitativo de medios de cultivo y validaciones: BioBalls®.
• Sistema automático de control de temperaturas y otros
parámetros: LabGUARD®.
• Gama completa de medios listos al empleo (ISO 11133)
en placa, frasco y tubo para aislamiento, detección y/o
recuento de patógenos alimentarios, IC y Legionella.
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Soluciones
• Medios preparados cromogénicos:
ChromID
Salmonella
Detección
Salmonella
ChromID Coli
Detección y
recuento
Campylobacter
ALOA®
ChromID
Lmono
ESIA®
Detección
Cronobacter
8
Recuento E. coli
ASAP®
IBISA®
Detección y
recuento L.
monocytogenes
REBECCA®
ChromID
Sakazakii
CASA®
CampyFood
Agar
Detección E.
coli O157H7
ChromID
O157H7
Detección Vibrio
ChromID
Vibrio
Recuento
B. cereus
BACARA®
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Soluciones
• Detección automática de patógenos: VIDAS®.
• Recuento automático de indicadores de
calidad: TEMPO®.
• Extracción automática de ácidos nucleicos:
miniMAG® / easyMAG®.
• Detección de patógenos alimentarios
mediante PCR Real Time: ADIAFOOD®.
Gene UP®.
Próximamente
• Diagnóstico veterinario mediante
PCR Real Time: ADIAVET®.
• Identificación bioquímica de
microorganismos y antibiograma:
API®, VITEK® 2 Compact.
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Soluciones
• Citometría de barrido: ChemScanRDI®.
• Citometría de flujo: D-Count, BactiFLOW®.
• Preparadores de medios: APS One®, Masterclave®,
XY 500.
• Contadores de placas: Easy Count 2®, Protocol 3®,
WASP.
• Control ambiental: Sampl’air®, gama
Count-TactTM y Count-SlideTM
• Genotipado microbiano automatizado
mediante rep-PCR: DiversiLab®.
• Otros: estufas, autoclaves, filtración, etc.
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Control microbiológico en el
sector alimentario
Sector alimentario
ALIMENTO
SEGURO
ALIMENTO DE
CALIDAD
Seguridad alimentaria
Calidad alimentaria
Flora patógena
Indicadores de Calidad en alimentos o procesos
Detección - Presencia/ausencia
Riesgo para la salud del consumidor
Recuento
Calidad higiénica
Toma de
muestra
11
Calidad comercial
Trazabilidad de la calidad
Flora deteriorante
Impacto en la calidad del producto
Impacto en la rentabilidad
Riesgo financiero
Dilución
1/10
Homogeneización
Detección patógenos
Recuento IC
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PREPARACIÓN DE LA
MUESTRA
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Preparación de la dilución
madre
DILUMAT S® - DILUMAT 4®
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Preparación manual vs. …
Preparación del medio
1. Pesada
2. Mezcla medio 3. Autoclavado
+ agua a 100°C
de frascos
Preparación de la dilución madre
4. Preparación del
lugar de trabajo
5. Ajuste del peso
de la muestra
6. Adición del
diluyente
- Poca precisión.
- Ebullición a 100ºC.
- Manipulación de frascos: ~4 min / frasco
- Tiempo consumido para ajustar la pesada:
~3min / muestra.
- Apertura de un frasco por muestra.
- No trazabilidad.
- Control de calidad del diluyente.
- Lavado y eliminación de frascos.
- Manipulación tediosa: muchos frascos, etc, …
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… preparación con Diluidor
Un trozo de muestra
Un click
Informe: trazabilidad
Descrito en norma ISO 7218:
“Gravimetric diluters are electronic instruments based on a balance and a programmable
liquid dispenser”
Basado en un factor de dilución:
Cualquiera que sea el peso de la muestra dispensación
automática del volumen adecuado de diluyente para alcanzar el
correcto factor de dilución.
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Ventajas
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AHORRO DE TIEMPO
Rapidez / automatización.
PRODUCTIVIDAD
No necesario preparar medio.
SEGURIDAD Y PRECISIÓN
Menor manipulación no
contaminación cruzada.
Factor de dilución eliminación de
errores.
ESTANDARIZACIÓN
No necesario ajustar pesada a 10 / 25 g.
COMODIDAD
Automatización / eliminación errores
manuales.
TRAZABILIDAD
Eliminación riesgo de transcripción
manual errónea.
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DILUMAT S
• Multi-tarea.
• Posibilidad de segunda bomba.
• TRAZABILIDAD.
• Impresora.
• Teclado.
• Aplicaciones específicas.
• Polvo.
• Listo al empleo.
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DILUMAT 4
• Rapidez Opción turbo.
• Multi-tarea Opción 4 x 4.
• Grandes volúmenes Opción para muestras
de 4kg (375 g).
• Trazabilidad
Posibilidad de conexión a LIMS.
• Aplicaciones específicas.
• Polvo.
• Cosmética.
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Homogeneización de la
dilución madre
EasyMIX® - SMASHER®
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Homogeneización de la
dilución madre
Necesaria para:
•
•
•
•
Homogeneizar / triturar.
Extracción de microorganismos.
Mantener la parte interna aséptica.
Estandarizar las condiciones del análisis.
LÍMITES:
•
•
•
•
•
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Dependiente de la matriz.
Fase ruidosa.
No segura.
Manipulación.
Diseño
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SMASHER
ALTA EFICIENCIA:
Efecto SMASH (patentado)
Fuerza máxima inicial instantánea.
No necesario precortar la muestra.
Eficiancia en el mezclado
Paso 1: aplastado de las muestras
Paso 2: efecto peristáltico
Evaluación AFSSA (Agencia Francesa Seguridad Alimentaria)
Homogeneización en 15-30 segundos vs. 1-2 minutos con los
trituradores convencionales.
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SMASHER
FACILIDAD DE LIMPIEZA:
Posición de 45ºC.
Palas removibles fácilmente extraibles.
Cámara con ABS inyectado: resistente a desinfectantes.
Cajón para los desechos integrado.
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SMASHER
MUY SILENCIOSO:
Insonorizado.
Mediciones acústicas.
El nivel de ruido se multiplica por dos cada 3dBA
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DETECCIÓN DE PATÓGENOS
miniVIDAS® - VIDAS®
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VIDAS es una plataforma que evoluciona
para dar soluciones a las necesidades
del laboratorio de microbiología de
alimentos
(PLATAFORMA PARA LA INNOVACIÓN)
•
•
•
•
25
Métodos rápidos.
Métodos fáciles de usar.
Mínima manipulación.
Métodos fiables y precisos
(alta sensibilidad y especificidad).
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Plataforma evolutiva
Inmuno
Concentración
ELFA
1992
1993
Listeria
26
ECO
1996
ICS
+
SLM
Fragmento Fab
2002
LMO2
Tecnología Proteína
Recombinante de Fagos
2003
2004
2006
SET2
LSX
Next
Day
LDUO
2008
ECPT
2009
SLMX
LMX
2011
SPT
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Plataforma evolutiva
ELFA / Inmuno-detección
1992 1993
Listeria ECO
27
1996
ICS
+
SLM
2002
LMO2
2003
2004
2006
SET2
LSX
Next
Day
LDUO
2008
ECPT
2009
SLMX
LMX
2011
SPT
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Plataforma evolutiva
Inmuno-concentración
1992
1993
Listeria
28
1996
ECO
ICS
+ SLM
2002
LMO2
2003
2004
2006
SET2
LSX
Next
Day
LDUO
2008
ECPT
2009
SLMX
LMX
2011
SPT
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Plataforma evolutiva
Fragmento Fab
1992
1993
Listeria
29
ECO
1996
ICS
+
SLM
2002
2003
2004
2006
LMO2
SET2
LSX
Next
Day
LDUO
2008
ECPT
2009
SLMX
LMX
2011
SPT
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Plataforma evolutiva
Fragmentos: Fab’
Anticuerpo completo
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Plataforma evolutiva
1992
1993
Listeria
31
ECO
1996
ICS
+
SLM
2002
LMO2
2003
2004
2006
2008
SET2
LSX
Next
Day
LDUO
ECPT
2009
SLMX
LMX
2011
SPT
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Plataforma evolutiva
LDUO
1992
1993
Listeria
32
ECO
1996
ICS
+
SLM
2002
LMO2
2003
2004
2006
SET2
LSX
Next
Day
LDUO
2008
ECPT
2009
SLMX
LMX
2011
SPT
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Plataforma evolutiva
FAGOS
1992
1993
Listeria
33
ECO
1996
ICS
+
SLM
2002
LMO2
2003
2004
2006
SET2
LSX
Next
Day
LDUO
2008 2009 2011
ECPT
SLMX
LMX
SPT
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Equipo empleado para la detección
(ausencia/presencia) de patógenos
bacterianos de forma automática.
Es un ROBOT
Reactivos: CARTUCHOS Y CONOS
- Cartuchos con pocillos conteniendo reactivos RTU.
- Cono: pipeta + soporte (fase sólida)
Si Ac específicos recubriendo la
pared del cono
Inmunodetección automática mediante un
ELISA SANDWICH ligado a fluorescencia.
Si Proteína FAGOS recubriendo
la pared del cono
Detección automática mediante tecnología
de CAPTURA ESPECÍFICA CON FAGOS
ligada a fluorescencia.
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PRINCIPIO
Técnica ELFA (Enzyme Linked Fluorescent Assay),
unida a técnicas de inmuno-detección, inmunoconcentración y a captura específica mediante fagos
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Inmuno-detección
CONO (SPR = Solid Phase Receptable)
CARTUCHO
Buffer de lavado
Muestra
Sampl
Diluyente
e
(Prelavado)
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Conjugado
Sustrato
Photo
diode
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Inmuno-detección
sustrato
sandwich
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conjugado
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Inmuno-detección
Ciclo in and out
Reacción inmunológica
Reacción enzimática
Vídeo VIDAS Strip 3D
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Inmuno-concentración
Captura
Las bacterias diana
de la muestra son
capturadas por los
Ac que tapizan la
pared del cono.
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Lavado
Las fases de lavado
arrastran las bacterias
no deseadas, mientras
los antígenos
buscandos siguen
unidos al Ac del cono
Liberación
Una enzima específica
rompe la unión
del Ag-Ac y deposita
las bacterias vivas
en un pocillo
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Inmuno-concentración
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Captura específica
mediante fagos
Un bacteriófago o fago es un virus que solo infecta bacterias.
Muy común: la forma de vida más abundante sobre la Tierra.
Optimizado por la naturaleza:
- Necesita un hospedador específico para su reproducción.
- Extremadamente estable: se ha desarrollado en condiciones
difíciles de pH y temperatura.
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Captura específica
mediante fagos
Anticuerpos vs. fagos:
Los anticuerpos son proteínas específicas de la respuesta inmune
humoral y representan uno de los muchos mecanismos involucrados
en dicha respuesta inmune. Si este mecanismo falla, el organismo
puede emplear otros mecanismos de protección.
Los elementos de reconocimiento que emplean los fagos para
identificar su hospedador representan su única posibilidad de
propagarse. El funcionamiento correcto de estas proteínas lleva
consigo una elevada presión selectiva, pues son indispensables para la
supervivencia de los fagos.
Los elementos de reconocimiento de los fagos pueden
considerarse como una herramienta con propiedades
únicas para ser empleada en ensayos de detección
bacteriana en relación a especificidad y sensibilidad.
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Captura específica
mediante fagos
Vídeo Phage
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Captura específica
mediante fagos
Se emplea solo la proteína recombinante de la
fibra de la cola del fago y no el fago completo.
es la parte más específica del fago.
se elimina el riesgo de mutación:
se elimina riesgo de destrucción de
resto de flora.
garantiza la especificidad del test.
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Captura específica
mediante fagos
Resultado FAGOS + VIDAS:
+
Aumento de sensibilidad:
- Fagos son 100 veces más sensibles que los anticuerpos.
- Fagos concentran la bacteria diana desde el medio
enriquecimiento.
de
Aumento de especificidad:
- Fagos son específicos de determinadas especies / cepas bacterianas.
- Fagos seleccionan la bacteria diana entre toda la flora competitiva.
Acortamiento en el tiempo de obtención de resultados.
Disminución de la manipulación.
Automatización de una herramienta sin precedentes para la detección
rápida de patógenos bacterianos.
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Parámetros / Protocolos
PARÁMETRO
Solución 48 horas
Solución Next Day
VIDAS SLM Doble Vía
Salmonella spp.
VIDAS SPT
VIDAS Easy SLM
Listeria spp.
VIDAS LIS
VIDAS LPT*
Listeria monocytogenes
VIDAS LMO2
VIDAS LMX
Listeria spp .
& L. monocytogenes
VIDAS LDUO
-
VIDAS ECPT
E. coli O157 (incluyendo H7)
VIDAS ICE
Campylobacter
Enterotoxina Staph
VIDAS CAM
-
-
VIDAS SET2
* Lanzamiento noviembre 2012
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Detección Salmonella spp.:
VIDAS SPT
Método certificado AFNOR VALIDATION BIO-12/32-10/11
Todos los alimentos
Muestras ambientales
X g ó X ml de muestra
+ 9 X ml de APT
(Dilución 1/10)
+
Suplemento selectivo
18 - 24 h
41,5°C +/- 1°C
VIDAS SPT
Calentamiento
H&G 5 min
Vídeo Vidas SPT
47
48 min
Tecnología ELFA
empleando Proteina
Recombinante de
Fagos + Ac
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Detección Salmonella spp.:
VIDAS SPT
Método certificado AFNOR VALIDATION BIO-12/32-10/11
Heces animales
Muestras ambientales de
producción primaria
X g ó X ml de muestra
+ 9 X ml de APT
(Dilución 1/10)
+
Suplemento selectivo
18 - 24 h
41,5°C +/- 1°C
1 ml en caldo SX2
(precalentado)
6 - 24 h
41,5°C +/- 1°C
VIDAS SPT
Calentamiento
H&G 5 min
48 min
48
Tecnología ELFA
empleando Proteina
Recombinante de
Fagos + Ac
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Detección L. monocytogenes:
VIDAS LMX
Método certificado AFNOR VALIDATION BIO-12/27-02/10
Todos los alimentos
Muestras ambientales
X g ó X ml de muestra
+ 9 X ml de Caldo LMX
(Dilución 1/10)
+
Suplemento LMX
26 - 28 h
37°C +/- 1°C
VIDAS LMX
Calentamiento
H&G 5 min
80 min
49
Tecnología ELFA
empleando Ac
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Detección E.coli O157:
VIDAS ECPT
Método certificado AFNOR VALIDATION BIO-12/25-05/09
Carne cruda
25 g en 225 ml
de APT + vancomicina
7-24 h.
15-24 h.
41,5 +/- 1°C
VIDAS ECPT
45 min
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Alimentos (excepto
carne cruda) y
muestras ambientales
41,5 +/- 1°C
Calentamiento
Heat & Go
5 min
Tecnología ELFA
empleando Proteina
Recombinante de
Fagos
VIDAS ECPT
45 min
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Detección Listeria spp.:
VIDAS LPT
Método certificado AFNOR VALIDATION BIO-12/33-05/12
X g ó X ml de muestra
+ 9 X ml de caldo LPT
(Dilución 1/10)
26 - 30 h
30°C +/- 1°C
VIDAS LPT
Calentamiento
H&G 5 min
80 min
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Tecnología ELFA
empleando Proteina
Recombinante de
Fagos
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Resumen
características
• Multiparamétrico.
• Plataforma para la innovación.
• Sensibilidad y especificidad.
• Rapidez: protocolos “al día siguiente” y de 48 horas.
• Validaciones internacionales.
• Capacidad analítica de 1 a 30 muestras / varios parámetros simultáneamente:
mejora flujo de trabajo.
• Sencillez y mínima manipulación (un paso de pipeteo).
• No necesarias condiciones especiales en el laboratorio mínimo riesgo de
contaminación.
• Software sencillo y estandarizado.
• Automatización: elimina el error humano.
• Trazabilidad: posibilidad de conectar VIDAS a LIMS
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DETECCIÓN DE PATÓGENOS
PRÓXIMAMENTE
GENE UP®
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GENE UP
PRÓXIMAMENTE
•
•
•
•
•
•
•
•
PCR Real Time.
Formato de 96 pocillos
Sondas FRET.
Extracción: lisis mecánica.
Tiempo en termociclador: 1 hora.
1 a x parámetros cada ciclo.
Almacenamiento de reactivos a Tª ambiente.
Parámetros (lanzamiento): Salmonella, Listeria spp.,
E. coli O157:H7 & Listeria monocytogenes kits.
Resultados al día siguiente.
Validado para muestras de 375g para Salmonella & E.
coli O157:H7.
Resultados en el mismo día combinando con
EasyMAG.
Otros parámetros (posteriormente): STEC, …
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RECUENTO DE INDICADORES
DE CALIDAD
TEMPO®
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Equipo automático para el recuento de
indicadores de calidad basado en la técnica
del Número Más Probable (NMP)
Lectura: por fluorescencia
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Características
• Multiparamétrico: aerobios mesófilos (
), coliformes
totales (
), E. coli (
), enterobacterias (
), bacterias
ácido-lácticas (
), Staph (
) y mohos y levaduras ( ).
• Mismo protocolo para todos los parámetros y todos los
alimentos.
• Validaciones internacionales (acorde ISO 16140).
• Aumento de capacidad de trabajo: 1 analista = 500
determinaciones / día.
• Basada en microbiología
automatizado.
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tradicional:
método
NMP
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Principio de la técnica
16 tubos
miniaturizados
2,25 µl
22,5 µl
225 µl
Tarjeta de recuento patentada: PVC moldeado con
pocillos de distinto volumen: NMP de 16 x 3 tubos
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Fluorescencia
---++-----+-+---+++++++++++++++
NMP
++++++++++++++++
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Combinación NMP
---++-----+-+---++++++++++++++
++++++++++++++++
16 / 15 / 4
Tabla MPN +
Factor dilución
5.000 ufc/g
60
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Reactivos
Cajas de 48 test (2x24 tarjetas + 2x24 viales).
Reactivos identificados con código de barras
y de color.
Medio deshidratado estéril: selectivo (EC, TC,
EB, STA, LAB, YM) o general (TVC).
FRASCO DE
MEDIO DE
CULTIVO
TARJETA
61
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Protocolo de trabajo
1
2
Preparación de la
muestra madre:
Dilución 1/10
ESTACIÓN DE LECTURA
4
Lectura e
interpretación
automáticas en
Tempo Reader
62
WIFI
Llenado y sellado
en Tempo Filler
ESTACIÓN DE PREPARACIÓN
3
Incubación
en estufa
tradicional
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Computer
ESTACIÓN DE
PREPARACIÓN
Media shelf
Filler / Sealer
Barcode Reader
–
–
–
–
–
1 TEMPO Filler
1 PC con léctor de código de barras & mini teclado
4 gradillas de llenado
1 estantería para los medios
Dispensers
4 dispensadores + frascos (1litro)
Tray
63
63
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Diluciones
Rangos de recuento /
Sensibilidad
Dilución 1/40: 10 a 4,9 E4 ufc/g
Dilución 1/400: 100 a 4,9 E5 ufc/g
Dilución 1/4.000: 1.000 a 4,9 E6 ufc/g
Dilución 1/4,0 E4: 1,0 E4 a 4,9 E7 ufc/g
...
Dilución 1/4,0 E8: 1,0 E8 a 4,9 E11 ufc/g
Posibilidad de disminuir rango (asociación de tarjetas):
- 2 tarjetas: 5 a 6,2 E4 ufc/g
- 3 tarjetas: 4 a 6,9 E4 ufc/g
65
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Tempo Filler: llenado y
sellado de tarjetas
+
Medio de cultivo
rehidratado con agua
estéril
Muestra alimento homogeneizada
(dilución 1/10)
¡¡Único protocolo para
todos los alimentos y
todos los parámetros!!
Tempo Filler: llenado
tarjeta por aspiración
(vacío) y sellado
automático.
• Llenado de 6 tarjetas en 3 min (400
tarjetas en una jornada de 8 horas)
• Preparar 6 tarjetas = Llenar 6 tarjetas
66
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Incubación
Gradilla de llenado
Sellado
Vídeo Test_inoculationTEMPO
Incubación en estufa
convencional:
Temperatura según
parámetro.
67
Gradilla de
incubación/
lectura
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Incubación
Parámetro
68
Temperatura
incubación
Tiempo
incubación
30°C
40 – 48 h
35°C
22 – 27 h
30°C
24 – 27 h
37°C
24 – 27 h
37°C
24 – 27 h
30°C
40 – 48 h
25°C
72 – 76 h
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Incubación
TVC Express
• Mismo kit TEMPO TVC, pero se lee a 24+/-1h
• Válido para carne cruda:
– Ternera / vaca / cerdo / pollo / cordero / pavo / etc…
– Con o sin mezcla (con hierbas, etc.)
– Fresca o congelada
• Alto nivel de contaminación: > 1000 ufc/g
Las muestras pueden ser leídas a las 24h y a las 40h
24h ± 1h
Resultado Express
69
40h
48h
Resultado Final validado
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Incubación
fines de semana
MIÉRC.
JUEV.
VIER.
SÁB.
DOM.
nevera
incubación
incubación
lectura
lectura
nevera
lectura
nevera
incubación
incubación
LUNES
lectura
lectura
lectura
nevera
lectura
incubación
lectura
nevera
70
incubación
lectura
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ESTACIÓN DE
LECTURA
–
–
–
–
–
–
71
1 TEMPO Reader
1 PC
Lector código de barras
1 impresora & ratón
1 dispositivo WIFI
12 gradillas de incubación/lectura
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Tempo Reader
20 tarjetas / 2,5 min
Lectura por fluorescencia
Informe resultados:
NMP
UFC por g, ml, S, cm2
Vídeo Reading 3D_TEMPO
72
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Principios de
detección
CRECIMIENTO
Medio especialmente formulado (con o sin agentes
selectivos)
REACCIÓN FLUORESCENTE
– Coliformes, Enterobacterias y S. aureus:
– Indicador de pH fluorescente :
4-Metilumbeliferona (4MU)
– Aerobios y E. coli :
– Sustrato enzimático fluorescente
– Lactobacilos y Mohos y Levaduras:
– Oxidorreducción
73
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TC, EB y STA:
Acidificación
Acidificación del medio debido al
metabolismo de los
carbohidratos
4MU
fluorescente
a pH > 7
4MU
No fluorescente
a pH < 6
Pocillo positivo: no fluorescente
Pocillo negativo: fluorescente
74
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TVC y EC:
Actividad enzimática
fluorescente
no fluorescente
4MU-X
Actividad
bacteriana
enzimática
específica
X
4MU
Pocillo positivos: fluorescente
Pocillo negativo: no fluorescente
75
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E. coli
Sustrato enzimático específico para la
detección de E. coli:
4-metilumbeliferil- β -D-glucuronide (MUG)
+
MUG
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β glucuronidasa
(E. coli)
Glucuronato
4-methilumbeliferona
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YM y LAB:
Oxidorreducción
NO2
O
no fluorescente
O
COOH
oxidorreducción NH
2
O
nitro-reductasa
7-nitrocoumarin-3-carboxylic acid
fluorescente
O
COOH
7-aminocoumarin (7AMC)
Pocillo positivos: fluorescente
Pocillo negativo: no fluorescente
77
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Trazabilidad
Worklist
efgh
abcd
1234
1
OR
LIMS
3
2
WIFI
data
transfer
78
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MUCHAS GRACIAS POR
SU ATENCIÓN
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