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MOHOS EN ALIMENTOS: alteraciones y micotoxinas Prof. Teresa Mª López Díaz, Dpto. de Higiene y Tecnología de los Alimentos, Universidad de León. ALTERACIONES DE LOS ALIMENTOS POR MOHOS 1 Gran capacidad degradativa PROTEOLISIS LIPOLISIS MOHOS EN ALIMENTOS Cacahuetes y otras oleaginosas (girasol, soja, aceitunas, etc.). Se encuentran invadidos frecuentemente por hongos, sobre todo por Aspergillus, Penicillium y Fusarium. Los cacahuetes son alimentos donde la contaminación por A. flavus, el máximo productor de aflatoxinas, es frecuente, sobre todo en países de clima cálido y húmedo. Cereales (arroz, trigo, maíz, cebada, centeno, avena, etc) y alimentos derivados. Son quizás los alimentos más frecuentemente implicados en micotoxicosis y en ellos podemos encontrar prácticamente cualquier micotoxina. Las condiciones húmedas y calurosas de los países africanos, sudasiáticos y sudamericanos favorecen el crecimiento fúngico y la producción de micotoxinas en estos productos. Frutas y verduras. Pueden sufrir podredumbres debidas al desarrollo de ciertas especies de mohos, sobre todo Penicillium. Estas especies no suelen ser importantes productoras de micotoxinas, salvo P. expansum, frecuente en manzanas y productor de la patulina que puede aparecer posteriormente en zumo y otros productos derivados. Otros alimentos de origen vegetal. El cacao, el café, los frutos secos, las pasas, pueden ser atacados por mohos; también productos como pan de molde, galletas, tostadas pueden aparecer contaminados. 2 Alteraciones de frutas FRUTA Cítricos Manzanas y peras Frutas con hueso Uvas TIPO DE ALTERACIÓN • podredumbre azul por P. italicum • podredumbre verde por P. digitatum. • podredumbre por P. expansum en manzanas y peras; también por P. solitum. • podredumbre azul en ciruelas y cerezas por P. expansum. • podredumbre por Penicillium expansumy otras especies. 3 Alteraciones de frutas Podredumbre verde: P. digitatum Podredumbre azul: P. italicum Alteraciones de frutas FRUTA Cítricos Manzanas y peras Frutas con hueso Uvas TIPO DE ALTERACIÓN • podredumbre azul por P. italicum • podredumbre verde por P. digitatum. • podredumbre por P. expansum en manzanas y peras; también por P. solitum. • podredumbre azul en ciruelas y cerezas por P. expansum. • podredumbre por Penicillium expansumy otras especies. 4 Alteraciones de vegetales y derivados Mohos en uvas Aspergillus Foco de Aspergillus sp. en un racimo debido a una mala aireación y deficiente penetración de los fitosanitarios como consecuencia de la presencia de hojas. Guía básica de buenas prácticas vitícolas para minimizar la presencia de ocratoxina A en los productos vitivinícolas Documento adaptado por INCAVI, con la colaboración del Servei Sanitat Vegetal del DARP C. Domingo,1 Ll. Giralt,1 O. Catalina,1 G. Barrios2 y J. Reyes. Revista de Enología (ACE, 2007) 5 A. flavus en cacahuetes Moho en granos de café café A. clavatus en grano de cereal A. flavus en maí maíz Alteraciones de quesos PRINCIPALES ALTERACIONES DE LOS QUESOS POR PENICILLIUMSPP. TIPO DE QUESO PENICILLIUM Quesos madurados Tipo Limburger Penicillium spp. Penicillium spp. TIPODE ALTERACIÓN Crecimiento en grietas Crecimiento superficial Crecimiento superficial Tipo Camembert P. expansum, P. roqueforti y P. bruneo-violaceum Crecimiento del Tipo Camembert P. roqueforti P. viridicatum moho, manchas de P. bruneo-violaceumdistinta coloración Quesos de pasta P. brevicompactum Manchas limitadas e la superficie blanda Queso procesadoPenicillium spp. Manchas. 6 Alteraciones de quesos Alteraciones de quesos Aspergillus Mucorales 7 Alteraciones de productos cárnicos Penicillium spp. Cladosporium spp. Alteraciones de productos cárnicos Crecimiento superficial excesivo de Aspergillus y Penicillium 8 Alteraciones de huevos Alteraciones por mohos: ¾ Mancha puntiforme, por Cladosporium, rosáceas por Sporotrichum. ¾ Enmohecimiento superficial, por Penicillium, Cladosporium, Sporotrichum, Mucor, Thamnidium, Botrytis y Alternaria. ¾ Putrefacciones, roja por Sporotrichum, negra por Cladosporium. PRODUCCIÓN DE MICOTOXINAS Micotoxinas: metabolitos secundarios de los hongos que son tóxicos para el hombre y/o los animales. Son sustancias de bajo Pm y estructura química muy diversa. 9 MICOTOXINAS PRODUCIDAS POR MOHOS Especie de moho Mohos y micotoxinas de importancia mundial (FAO) Alimentos Micotoxinas producidas Aspergillus parasiticus Aflatoxinas B1, B2, G1 y G2 Aspergillus flavus Aflatoxinas B1 y B2 Fusarium sporotrichioides Toxina TT-2 Fusarium graminearum Desoxinivalenol (o nivalenol) nivalenol) Zearalenona Fusarium moniliforme (F. verticillioides) verticillioides) Fumonisina B1 Penicillium verrucosum Ocratoxina A Aspergillus ochraceus Ocratoxina A Géneros toxigénicos/especies Micotoxinas potenciales Harina de trigo y maíz, pan, palomitas de maíz Aspergillus fIavus Ochraceus, versicolor Cladosporium Fusarium Penicillium citrinum, citreo-viride, Cyclopium, martensi Patulum, puberulum Afiatoxinas Ocratoxinas Esterigmatocistina Patulina Acido Penicilico Cacahuetes y Pacanas Aspergillus flavus Parasitisus, ochraceus Versicolor, Fusarium Rhizopus Chaetomium Penicillium, cyclopium Expansum, citrinum Aflatoxinas, Ocratoxinas Patulina Esterigmatocistina Penicillium expansum Patulina Aspergillus fIavus Cladosporium Penicillium viridicatum Roquetorti, patulum Commune, Aflatoxinas Ocratoxina Patulina, Acido Penicílico Salami Jamón Carnes maduradas Aspergillus fIavus Ochraceus, versicolor Penicillium viridicatum, cyciopium Pimienta roja y negra Aspergillus flavus ochraceus Penicillium especies Aflatoxinas, Ocratoxina Acido Penicilico Esterigmatocistina Aflatoxinas Ocratoxina Alubias Soja Aspergillus fIavus ochraceus, versicolor Alternaria Cladosporium Fusarium Penicillium cyclopium Viridicatum, citrinum Expansum, islandicum Urticae, crustosum Aflatoxinas Esterigmatocistina Ocratoxina, Citrinina Patulina, Acido Penicilico Acido Tenuazónico Tricotecenos Aspergillus flavus A. versicolor Penicillium cyclopium Citrinum, martensi olivino-viride, palitans Puberulum, roqueforti Urticae, viridicatum Aflatoxinas Esterigmatocistina Ocratoxina, Citrinina Patulina, Acido Penicílico Aspergilius spp Fusarium oxysporum, solani Aspergillus spp Penicilium cyclopium Acido Penicilico T-2, Otras toxinas de Fusarium-Penicilium Manzanas y derivados Pastel de carne, carne cocinada Coco, Quesos Lupulo Pasteleria almacenada en frío Alimentos enmohecidos tomados en supermercados Alimentos almacenados en casa bajo condiciones de refrigeración o no Penicillium spp Aflatoxinas Acido Kojico Ocratoxina A Patulina Acido Penicílico 10 MICOTOXINAS PRODUCIDAS POR PENICILLIUM SPP. PENICILLIUM MICOTOXINAS P. aurantiogriseum ácido penicílico, xantomegnin, viomellein, viridicatin, penitrem A. ácido micofenólico, brevianamidas. ácido ciclopiazónico. ácido ciclopiazónico, roquefortina C, PR-toxina citreoviridina citrinina ácido ciclopiazónico patulina, citrinina y roquefortina C. luteoskirina rubratoxinas patulina, PR-toxina, ácido micofenólico, roquefortinas, isofumigaclavinas ocratoxina A y citrinina. ocratoxina A, xantomegnin, viomellein, ácido penicílico, brevianamidas P. brevicompactum P. camemberti P. chrysogenum P. citreoviride P. citrinum P. commune P. expansum P. islandicum P. purpurogenum P. roqueforti P. verrucosum P. viridicatum Notificaciones relativas a detección de micotoxinas en España (año 2006, SCIRI, AESAN). Producto Micotoxina Café instantáneo Ocratoxina A Pimentón dulce Aflatoxinas Harina de maíz ecológica Aflatoxinas Harina de maíz ecológica Fumonisinas Pimentón dulce en polvo Aflatoxinas Trigo duro Ocratoxina A Almendras crudas picadas sin cáscara Aflatoxinas Almendras picadas y tostadas Aflatoxinas Arroz roto Aflatoxinas Café instantáneo Ocratoxina A Harina de centeno integral Ocratoxina A Pan crujiente Fumonisinas Pasta sin gluten Fumonisinas Pasta sin gluten Fumonisinas Mezcla de cereales Fumonisinas Pimentón picante Ocratoxina A Pistachos salados Aflatoxinas 11 ECOTOXINOGÉNESIS Temperatura: Temperatura: • óptimo: 2020-25º 25ºC. Actividad de agua: agua: • máximo: 30º 30ºC. • óptimo: 0,930,93-0,98. • mínimo: 0º 0ºC. Gases: pH: •óptimo: 3,43,4-5,5. • Los mohos requieren oxí oxígeno para la producció producción de micotoxinas. micotoxinas. Muchas micotoxinas requieren condiciones de producció producción má más restrictivas que las que permiten el crecimiento del hongo Influencia de la temperatura y la actividad de agua en el crecimiento y producción de micotoxinas. 12 ECOTOXINOGÉNESIS EFECTO DEL pH SOBRE EL CRECIMIENTO DE Penicillium expansum EN ZUMO DE MANZANA Y LA PRODUCCIÓN DE PATULINA pH Biomasa (g/l) Patulina (mg/l) 2,8 3,0 3,2 3,4 3,6 3,8 4,0 6,8 8,0 7,0 10,8 9,6 8,4 12,4 0,2 0,16 0,25 79,4 28,2 49,0 0,89 ECOTOXINOGÉNESIS TASA MEDIA DE PRODUCCIÓN DE ÁCIDO CICLOPIAZÓNICO POR Penicillium commune DESPUÉS DE 14 DÍAS DE DESARROLLO SOBRE MAÍZ Actividad de agua 0,90 0,98 0,95 0,90 0,98 Temperatura (ºC) 20 20 25 30 30 Ácido ciclopiazónico (ng/g) 4435 ± 782 7678 ± 722 4054 ± 905 2264 ± 517 4761 ± 857 13 Esquema gráfico de los factores implicados en la presencia de OTA en vino Factores determinantes de ocratoxina A en vino Blesa, J., Soriano, J.M., Moltó, J.C. y Mañes, J. Departamento de Medicina Preventiva y Salud Pública, Ciencias de la Alimentación, Toxicología y Medicina Legal. Facultad de Farmacia. Universidad de Valencia. Revista de Enología (ACE, 2007) AFLATOXINAS • Se conocen hasta 18 distintas. • Principales: B1, B2, M1, G1 y G2. • Producidas por A. flavus y A. parasiticus. parasiticus. • Alimentos: cacahuetes y otros frutos secos, cereales, otros alimentos. • Muy tó tóxicas y altamente cancerí cancerígenas (DL50 hombre: 99-0,5 mg/kg mg/kg pc; pc; cá cáncer de hí hígado). • No se considera pertinente fijar una IDA debido a su elevada toxicidad. • Aw: Aw: má máx. producció producción a 0,99 (mí (mín. 0,82). • Tª: 15pt. 2020-30º 30ºC). 15-37º 37ºC (ópt. 14 Incidencia de aflatoxinas en alimentos (Soriano, 2007). OCRATOXINAS • • • • • Ocratoxina A y otras. Penicillium verrucosum y Aspergillus spp. spp. Tóxicos para patos, ratas, pollitos, truchas. Desconocido en hombre. No carcinogé carcinogénica. Distintos productos agrí agrícolas: cereales, semillas, cacahuetes, productos cí cítricos y tabaco; vino, café café y cacao; especias; vísceras. Efectos: vacuolizació vacuolización grasa en hígado; gado; necrosis de túbulos renales. • Ingesta diaria má máxima tolerable (FAO/OMS): 14 ng/ ng/kg pc. pc. 15 PATULINA • • • • • • • Producida por gran nú número de mohos, fundamentalmente Aspergillus, Aspergillus, Penicillium y Byssochlamys. Byssochlamys. Asociada a la podredumbre de ciertas frutas (P. (P. expansum). expansum). – La presencia de la toxina só sólo se ha hallado en zumo de manzana y en la sidra (en algunos paí países, como Españ España, en niveles superiores a lo señ señalado en la legislació legislación; 50 ppb). ppb). Es bastante termorresistente. termorresistente. Carcinogé Carcinogénica. Hombre: gastritis y nauseas. Edema pulmonar y cerebral; efectos teratogé teratogénicos. nicos. Condiciones óptimas de producció producción: pH, 6; 1717-25º 25ºC (se inhibe con 3% CO2-2% O2 a 25º 25ºC). Ingesta diaria má máxima tolerable (FAO/OMS): 400 ng/ ng/kg pc. pc. RIESGO (Recomendaciones Comisión UE, 2003): “De la evaluación realizada puede deducirse que la exposición media parece situarse muy por debajo de la ingesta diaria tolerable máxima provisional (IDTMP), fijada en 0,4 μg/kg de peso corporal. No obstante, si se tienen en cuenta grupos específicos de consumidores, especialmente los niños de corta edad, y se consideran los casos más desfavorables, la exposición a la patulina es más significativa, aunque siga situada por debajo de la IDTMP”. ÁCIDO PENICÍLICO • Producida por un nú número importante de hongos, sobre todo Penicillium (P. aurantiogriseum, aurantiogriseum, P. polonicum, polonicum, P. viridicatum) viridicatum) y Aspergillus. Aspergillus. • Se ha hallado en trigo, judí judías, tabaco, cereales. • Efectos: necrosis del hí í gado, riñó n y tiroides; h riñón potencialmente carcinó ó g é nico. . carcin nico 16 CITRININA • Producida por P. citrinum, citrinum, P. verrucosum (con frecuencia en combinació combinación con la ocratoxina A), P. expansum, expansum, Monascus. Monascus. • Responsable de la enfermedad del arroz amarillo. • Presente en arroz y otros cereales, frutas, quesos, carne, embutidos, etc. • Lesiones en tubo digestivo, hí n hígado y riñó riñón (nefrosis). CITREOVIRIDINA • Producida por P. citreoviride. citreoviride. • Responsable de la enfermedad del arroz amarillo. • Pará Parálisis, vó vómitos y convulsiones; má más tarde desó desórdenes respiratorios, problemas vasculares, pará parálisis, coma y fallo respiratorio. TOXINAS DE FUSARIUM • Presentes en cereales y derivados. TRICOTECENOS: • Deoxinivalenol (DON) o vomitoxina. vomitoxina. • Producido por Fusarium graminearum, graminearum, F. culmorum (producen el tizó tizón o fusariosis de la espiga). --- Produce problemas gastrointestinales. Falta de crecimiento en niñ niños. • Posible carcinó carcinógeno para el hombre. • Toxina TT-2. • Producido por diversas Fusarium spp. spp. --- Producen la leucopenia tó tóxica alimentaria (ATA). ZEARALENONA: • Afecta al aparato reproductor. En la mujer está está relacionado con carcinomas. FUMONISINAS (B1, B2, etc.): • • Producida por F. moniliforme. moniliforme. Afectan a cerebro, pulmó n y corazó pulmón, hí hígado, riñó riñón corazón. Asociadas al cáncer de esó esófago en Sudá Sudáfrica, China, etc. 17 MICOTOXINAS: TOXICIDAD Fuente: FAO/OMS (www.consumaseguridad.com MICOTOXINAS: toxicidad MICOTOXINA DL 50 (mg/kg pc) Aflatoxinas Citrinina Ácido ciclopiazónico Ocratoxina A Patulina Ácido penicílico PR toxina Rubratoxina 9-0,5 mg/kg pc (estimado 35 (ratón, ip)/110 (ratón, o 2,3 (ratas, ip)/36-63 (ratas 22, ratas jóvenes, o. 5 (ratones, ip)/35 (ratones 250 (ratones, iv)/600 (rato 6 (ratones, ip)/115 (ratas, 6,6 (ratones, ip) Evaluación de la toxicidad (ug o ng de micotoxina/kg pc/día): - TDI = dosis diaria admisible. - NOAEL = dosis en la que no se observan efectos adversos. - TD50 = dosis en la que un 50% de los individuos pueden desarrollar tumores malignos. - DL50 (mg/kg pc) = dosis en la que se produce la muerte de un 50% de individuos. 18 MICOTOXINAS: efectos tóxicos • A nivel molecular: – Inhibición de actividades metabólicas (síntesis de proteínas, ácido nucleicos, etc.). – Daños en la membrana celular. – Unión a proteínas y ácidos nucleicos produciendo alteraciones en la transcripción y traducción. – Etc. Efectos mutágenos, teratogénicos y cancerígenos de las micotoxinas por vía oral (Derache, Ph. y Derache, R. 1990). Hongos Micotoxinas Mutagenicidad Teratogenicidad Cancerogenicidad A. flavus A. parasiticus P. urticae P. rubrum Aflatoxinas + + + Patulina Rubratoxina Ac. penicilíco Ac. micofenólico Esterigmatocistina Tricotecenos Ocratoxina A + + + + + ? + ? P. divers A.versicolor F. poae P. viridicatum A. ochraceus P. islandicum MICOTOXINAS: efectos tó tóxicos a nivel orgá orgánico + ? + + Luteoskirina + Efectos de las micotoxinas sobre los órganos (Derache, Ph. y Derache, R. 1990). Micotoxinas Aflatoxina Rubratoxinas Esporidesmina Ocratoxina A P.R. toxina Citrinina Tremógenos Verruculatoxinas A.ciclopiazónico Citreoviridina Roquefortinas Psoralenas Zearalenona Penitrem A T-2 Hepato toxicidad Nefro toxicidad Neuro toxicidad Efecto endocrino + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + Efecto irritante sobre la piel + + 19 Principales efectos fisiopatológicos producidos por las micotoxinas según la IARC (Soriano, 2007) Disminución de linfocitos, supresión de anticuerpos, retraso en actividad de macrófagos y neutrófilos, etc. Clasificación de las micotoxinas en grupos (en relación a su toxicidad crónica) según la IARC (Soriano, 2007) Grupo 1: carcinógeno para el hombre. Grupo 2B: posiblemente carcinógeno; la evidencia en humanos es limitada y tampoco hay suficiente evidencia con animales de experimentación. Grupo 3: el agente no es clasificable como carcinógeno para humanos y no puede incluirse en otro grupo. IARC, International Agency for Research on Cancer. MICOTOXINAS: toxicidad-factores • • • • • • • • Biodisponibilidad de la toxina. Sinergismos. Cantidad ingerida. Continuidad de la ingestión. Estado fisiológico y sanitario. Estado de nutrición. Edad. Peso. 20 PRINCIPALES MICOTOXICOSIS • • • • • • Aflatoxicosis: Aflatoxicosis: aguda, subaguda y cró crónica (cá (cáncer de hí hígado). • En niñ niños, relació relación con ictericia neonatal, encefalopatí encefalopatía y degeneració degeneración grasa visceral y el kwashiorkor (malnutrició (malnutrición proteica). Ergotismo: Ergotismo: por metabolitos alcaloides producidos por Claviceps purpurea (”cornezuelo del centeno” centeno”). Plaga en Europa central en la Edad Media. Cáncer de esó esófago: fago: por tricotecenos producidos por Fusarium moniliforme (China y África del sur). Enfermedad del arroz amarillo: debida al consumo de arroz contaminado con distintas especies de Penicillium (P. citreoviride, citreoviride, P. islandicum, islandicum, P. citrinum), citrinum), Japó Japón. Nefropatí Nefropatía de los Balcanes: existe la posibilidad de que esta enfermedad se deba al consumo de alimentos con ocratoxinas. ocratoxinas. Leucopenia tó tóxica alimentaria (ATA): ATA): por cereales contaminados con tricotecenos. tricotecenos. Rusia, dé década de los 40, II Guerra Mundial. LÍMITES DE MICOTOXINAS SEGÚN LA LEGISLACIÓN EUROPEA • Reglamento 1881/2006, de 19 de Diciembre de 2006, de la Comisión, por el que se fija el contenido máximo de determinados contaminantes en los productos alimenticios (aplicable a partir del 1 de marzo de 2007): - Reglamento 1126/2007, que modifica el anterior en lo referente al deoxinivalenol, zearalenona y fumonisinas. – Aflatoxinas B1/B1+B2+G1+G2 en frutos secos, cereales y especias: 2-15 ppb. – Aflatoxina M1 en leche: 0,05 ppb. – OCA en cereales y derivados, uvas pasas, café, zumo de uva, vino: 2-10 ppb. – Patulina en zumos de frutas, algunas bebidas: 10-50 ppb. – Dexoxinivalenol en cereales, maíz y sus fracciones, pastas, pan: 2001750 ppb. – Zearalenona en cereales, maíz y sus fracciones, pan, aperitivos: 20-400 ppb. – Fumonisinas en maíz y sus fracciones, cereales: 200-4000 ppb. – Toxinas T-2 y HT-2 en cereales. • Reglamento 401/2006, de 23 de Febrero de 2006, de la Comisión por el que se establecen los métodos de muestreo y de análisis para el control oficial del contenido de micotoxinas en los productos alimenticios Legislación Europea Febrero 2008 21 ENLACES IMPORTANTES • Centraalbureau voor Schimmelcultures (Holanda) • European Mycotoxin Awareness Network • http://www.engormix.com • Manual Aplicación APPCC Control Micotoxinas • Legislación www.fao.org 22