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 ARTÍCULO ORIGINAL USO DE MODELOS ANIMALES EN EL ESTUDIO DE PLANTAS MEDICINALES CON PROPIEDADES ANSIOLÍTICAS Y ANTIDEPRESIVAS. (The use of animal models in the study of the anxiolytic and antidepressant properties of medicinal plants) Gabriela Díaz‐Véliz, MSc, MEd. y Sergio Mora, Q.F. Laboratorio de Farmacología del Comportamiento. Programa de Farmacología Molecular y Clínica, Instituto de Ciencias Biomédicas, Facultad de Medicina. Universidad de Chile. RESUMEN ‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐ La limitada eficacia de los fármacos actualmente en uso para tratar algunos trastornos de ansiedad y depresión ha despertado el interés en la búsqueda de nuevas herramientas terapéuticas en el campo de las plantas medicinales, usadas como tales en le medicina popular. En el presente trabajo se evaluaron las propiedades tipo ansiolítico y/o tipo antidepresivo de tres plantas autóctonas de Latinoamérica, recurriendo a la aplicación de modelos de ansiedad y depresión en ratas. La administración intraperitoneal de Annona muricata provocó efectos ansiolíticos y antidepresivos, Salvia elegans produjo efectos sedantes y antidepresivos, mientras que Acantolippia deserticola demostró propiedades ansiolíticas. Los resultados permiten validar el uso popular de las plantas estudiadas. Palabras Claves: ansiedad, depresión, plantas medicinales, modelos animales, laberinto en cruz elevado, natación forzada. Publicado por la Sociedad de Farmacología de Chile ‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐ INTRODUCTION La ansiedad y la depresión son consideradas estados emocionales normales que contribuyen a la adaptación y la supervivencia. Sin embargo, constituyen también los trastornos psiquiátricos más frecuentes en la población. Se estima que más del 20% de los adultos sufren de estos trastornos en algún periodo de sus vidas (Buller, B., 2001). La Organización Mundial de la Salud (WHO, 1999) ha predicho que, en el año 2020, la depresión se convertirá en la segunda causa de muerte prematura o incapacidad laboral. A mediados del siglo XX, gracias a numerosos descubrimientos científicos, fue posible disponer de fármacos de acción más selectiva sobre ansiedad y depresión patológicas, lo cual permitió mejorar significativamente la calidad de vida de los pacientes psiquiátricos. Sin embargo, después del gran entusiasmo original, la medicina basada en evidencia se ha enfrentado a muchas desilusiones. Aproximadamente dos tercios de los pacientes ansiosos o deprimidos responden a los tratamientos disponibles en la actualidad aunque la magnitud de la mejoría no siempre es satisfactoria. En los últimos 20 años no se han obtenido fármacos más eficaces que las benzodiacepinas o los antidepresivos inhibidores selectivos de la recaptación de serotonina. En el campo del tratamiento de la ansiedad, las benzodiacepinas, usadas como tratamiento de primera elección en estados de ansiedad aguda, fallan en estados de ansiedad crónica y han sido paulatinamente desplazadas por los antidepresivos que no solo son eficaces en el tratamiento de la depresión sino que también en el tratamiento a largo plazo de trastornos de ansiedad. ‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐‐ Correspondencia a: Gabriela Díaz‐Véliz, Laboratorio de Farmacología del Comportamiento. Programa de Farmacología Molecular y Clínica, Instituto de Ciencias Biomédicas, Facultad de Medicina. Universidad de Chile. Av. Salvador 486, teléfono 2741560, fax 2741628, email [email protected] Rev. Farmacol. Chile (2012) 5(1): 21 Debido a la limitada eficacia, acompañada de numerosas reacciones adversas, de los fármacos ansiolíticos y antidepresivos actualmente en uso, ha surgido la necesidad de desarrollar medicamentos más nuevos, más eficaces y mejor tolerados. Esto ha llevado a que, en los años recientes, se haya reactivado el interés en los productos herbarios como medicinas alternativas o complementarias en el tratamiento de trastornos psiquiátricos. Existe la sensación que algunas de las drogas naturales que fueron injusta e innecesariamente desechadas han vuelto lentamente (Babic, D., 2007). La medicina popular de muchas regiones del mundo ha recurrido desde siempre a las plantas medicinales para aliviar trastornos afectivos o emocionales. Además, la búsqueda y desarrollo de nuevas terapias de trastornos psiquiátricos basadas en plantas medicinales ha progresado significativamente en las últimas décadas (Zhang, Z.J., 2004). Esto se ha visto reflejado en el creciente número de productos herbáceos que han sido introducidos en la práctica psiquiátrica y hay un gran número de plantas medicinales cuyo potencial terapéutico ha sido demostrado en una variedad de modelos experimentales de psicopatologías (Zhang, Z.J., 2004). La utilización de los modelos animales ha servido no solo como método de tamizaje de plantas potencialmente eficaces y seguras, sino que también permite validar científicamente el uso en medicina popular de estos productos. 1.3 Acantholippia desertícola (Verbenaceae), “rica‐rica”, es un arbusto menor muy aromático que crece abundantemente en el norte de Chile (2800‐4000 msm). En los pueblos altiplánicos (San Pedro de Atacama, Toconao, Socaire) se utilizan sus ramas y hojas para tratar dolores estomacales, problemas renales y trastornos circulatorios (MHT). Diversas especies del genero Acantholippia han sido usados en medicina popular por sus efectos analgésicos, antiinflamatorios y afrodisiacos (Gómez, R., 1991). Estudios preliminares sugieren propiedades ansiolíticas del infuso de A. desertícola y de sus aceites esenciales (Leoncini., R., 2006). En nuestro laboratorio de Farmacología del Comportamiento, hemos estado interesados en verificar las potenciales propiedades ansiolíticas y/o antidepresivas de plantas medicinales autóctonas de Latinoamérica, recurriendo a la aplicación de modelos animales previamente validados en la literatura científica. En el presente estudio se muestran los resultados obtenidos con tres extractos hidroalcohólicos de plantas de diferente procedencia geográfica: Annona muricata (Costa Rica), Salvia elegans (México) y Acantholippia desertícola (Chile). 2. Animales: En los experimentos conductuales se utilizaron ratas Sprague Dawley machos (200‐250 g de peso) procedentes del Bioterio del Programa de Fisiopatología, ICBM, Facultad de Medicina, Universidad de Chile. Estos animales fueron mantenidos en grupos de 6 por caja con libre acceso a comida y agua, temperatura de 22 + 1 C y ciclo luz/oscuridad de 12/12 horas. El protocolo experimental fue aprobado por el Comité de Bioética en Investigación Animal de la Facultad de Medicina, Universidad de Chile. 3. Tratamiento: Los extractos liofilizados de A. muricata, S. elegans y A. desertícola fueron disueltos en agua bidestilada y administrados a las ratas por vía intraperitoneal (ip) en dosis de 12,5, 25 y 50 mg/kg. Diazepam, 1 mg/kg ip, fue usado como ansiolítico de referencia (control positivo), mientras que fluoxetina, 10 mg/kg ip, e imipramina, 12,5 mg/kg ip, fueron utilizados como antidepresivos de referencia. Se administró agua bidestilada (1 ml/kg) como control negativo. MATERIALES Y MÉTODOS 1. Plantas empleadas: 1.1. Annona muricata (Annonaceae), “guanabana” o “graviola”, es un árbol de hoja perenne endémico del Caribe, México, Centro y Sudamérica, estrechamente relacionado con la chirimoya. En los últimos años, el extracto de guanábana ha sido ampliamente aclamado como posible agente anticancerígeno (Monografía Graviola). Recientes estudios apoyan los efectos antitumorogénicos y antimetastásicos de esta planta (Torres, M.P., 2012; George, V.C., 2012). Los frutos y las hojas de Annona muricata son usados en medicina tradicional por sus propiedades tranquilizantes y sedantes. Además, se ha sugerido que el fruto de esta planta posee efectos antidepresivos posiblemente inducidos por alcaloides isoquinolínicos agonistas de receptores 5HT1A (Hasrat, J.A., 1997). 1.2 Salvia elegans (Lamiaceae), “mirto”, “perritos rojos”, “limoncillo” o “flor del cerro”, es un arbusto perenne nativo de México ampliamente usado en medicina tradicional. Sus partes aéreas se emplean para aliviar trastornos del sistema nervioso central y se le denomina como “tónico del sistema nervioso para liberar estrés y tensión” (Aguilar, A., 1994). 4. Ensayos conductuales 4.1 Monitoreo de la actividad motora espontánea. El registro de la actividad motora espontánea es fundamental para tener una primera aproximación de los eventuales efectos conductuales de una droga desconocida. Esto Rev. Farmacol. Chile (2012) 5(1): 22 permite evaluar la respuesta del animal al ser expuesto a un ambiente desconocido donde, según el tratamiento o estado basal, puede desarrollar hipo o hipermotilidad. Treinta minutos después de la inyección ip, cada rata fue colocada en una caja de acrílico transparente (30 cm x 30 cm x 30 cm), al interior de una cámara aislada de sonido. La caja se colocó sobre una plataforma de actividad (Lafayette Instruments Co., USA) conectada a un amplificador y un contador electromecánico que registraba la motilidad total del animal. El periodo de observación total fue de 30 min, durante el cual se anotó la conducta cada 5 min para tener un registro de la evolución de la actividad motora a través del tiempo. Los resultados se expresan como numero de cuentas durante los 30 min de observación. 4.2 Modelo Animal de Ansiedad: El laberinto en cruz elevado. Este ensayo ha sido ampliamente validado para medir ansiedad en roedores (Pellow S., 1985; Lister, R.G., 1987). Se basa en la aversión que sienten estos animales por los espacios abiertos y en altura. Se utiliza un aparato en forma de cruz, formado por dos brazos abiertos (50 cm x 10 cm), dos brazos cerrados (50 cm x 10 cm x 40 cm) y una plataforma central (10 cm x 10 cm), dispuesto de tal manera que los brazos del mismo tipo se oponen entre si. El laberinto, construido en acrílico negro, está situado a una altura de 70 cm desde el piso. Una hora después de la inyección ip, cada animal fue colocado en el centro del laberinto, enfrentado a uno de los brazos cerrados. Durante 5 minutos se registra en número de entradas a los brazos abiertos y cerrados del laberinto y el tiempo de permanencia en cada uno de estos brazos (Pellow, S., 1986). La entrada a cada brazo se define como el momento en que el animal coloca las cuatro patas en el brazo respectivo. Los resultados se expresan como porcentaje de entradas a los brazos abiertos y porcentaje de tiempo de permanencia en estos brazos. El aumento de la exploración y la mayor permanencia en los brazos abiertos se consideran como reflejo de una actividad farmacológica tipo ansiolítica. 4.3 Modelo Animal de Depresión: La Natación Forzada. Este es, probablemente, el modelo farmacológico más utilizado para evaluar actividad antidepresiva (Cryan, J.F., 2002). Se basa en el principio de la desesperanza aprendida, que establece que todo organismo que es sometido a un evento estresante que no puede controlar y del cual no puede escapar desarrolla, inicialmente, ansiedad y posteriormente, si el evento se mantiene en el tiempo, depresión. Cuando los roedores son colocados en un cilindro con agua, al cabo de cierto tiempo desarrollan inmovilidad la cual reflejaría la cesación de la conducta orientada al escape. El método fue originalmente desarrollado por Porsolt (1977) y modificado por Lucky (1997). El aparato consiste en un cilindro de acrílico transparente (50 cm de alto x 20 cm de diámetro) que se completa hasta los 30 cm de altura con agua a temperatura ambiente (25 C). Habitualmente el ensayo se realiza en dos días; durante el primero, se realiza el entrenamiento o aprendizaje, en el que cada animal es colocado durante 15 minutos en el cilindro, 24 horas antes del ensayo de natación. La droga a ensayar se administra en tres ocasiones: inmediatamente después del periodo de entrenamiento de 15 minutos, 6 y 0,5 horas antes del ensayo de natación. Este último tiene una duración de 5 minutos, tiempo en el cual un observador entrenado mide la duración en segundos de la conducta de escalamiento, definida como el movimiento hacia delante de las patas anteriores sobre las paredes de la cámara, la conducta de natación, definida como el movimiento de desplazamiento en la cámara de natación, incluyendo el cruce de un cuadrante a otro y la inmovilidad, considerada cuando el animal no hace mayores intentos por escapar, excepto los movimientos necesarios para mantener el hocico fuera del agua. Los resultados se expresan en términos de porcentajes de tiempo gastados en escalamiento, natación e inmovilidad. Los aumentos en la duración de las conductas activas, escalamiento y natación, y la consiguiente disminución del tiempo de inmovilidad son considerados como perfiles consistentes con un efecto tipo antidepresivo (Cryan, J.F., 2002). 5. Estadística: Los datos se expresan como el promedio ± error estándar (ES) de 8 a 11 ratas por cada dosis inyectada. Las comparaciones estadísticas entre grupos se hicieron aplicando un ensayo de ANOVA seguido del ensayo a posteriori de Newman‐Keuls. Las diferencias fueron consideradas significativas cuando p fue igual o menor de 0,05. Tabla 1. Actividad motora espontánea Los datos corresponden al promedio ± ES de 8‐11 ratas en cada dosis inyectada. * p<0,001 comparado con los controles inyectados con agua (ANOVA seguido de Newman‐Keuls para comparaciones múltiples). RESULTADOS Actividad motora espontánea: En la Tabla 1 se muestran los efectos de la administración de los extractos de A. desertícola, A. muricata y S. elegans, sobre la actividad motora espontánea de la rata, comparada con el solvente (agua bidestilada). Todas las dosis de S. elegans produjeron una significativa disminución de la actividad motora sin que se estableciera una relación dosis efecto. Por su parte, Rev. Farmacol. Chile (2012) 5(1): 23 los extractos de A. desertícola y A. muricata solo produjeron una disminución significativa de la motilidad con la administración de la dosis más alta (50 mg/kg). Exploración del laberinto en cruz elevado: En la figura 1 se presentan los efectos de A. Muricata y A desertícola en el ensayo del laberinto en cruz elevado (LCE). Ambos extractos aumentaron la exploración y la permanencia en los brazos abiertos del LCE. Todas las dosis administradas produjeron efectos significativos sobre estos parámetros conductuales y no se apreciaron diferencias significativas con respecto a los efectos inducidos por diazepam 1 mg/kg. Respecto al extracto de S. elegans, éste no indujo efectos significativos sobre la exploración del LCE. Figura 1. de 8‐11 ratas en cada dosis inyectada. * p<0,05 comparado con los controles inyectados con agua (ANOVA seguido de Newman‐Keuls para comparaciones múltiples). Ensayo de natación forzada: En Tabla 2 se pueden apreciar los efectos de los extractos de las plantas estudiadas, fluoxetina e imipramina sobre la duración de las conductas activas, escalamiento y natación, y sobre el tiempo de inmovilidad en el ensayo de natación forzada. Los extractos de A. muricata y S. elegans produjeron una disminución significativa del tiempo de inmovilidad, de manera similar a fluoxetina e imipramina, acompañada de un aumento significativo de la conducta de natación, semejante al inducido por fluoxetina. La conducta de escalamiento, que aumentó con imipramina, no fue modificada significativamente por ninguno de los extractos. Además, se observa que el extracto de A. desertícola no produjo efectos significativos sobre ninguna de las conductas relacionadas con el ensayo de natación forzada. Tabla 2. Ensayo de nado forzado para evaluar efecto antidepresivo. Los datos corresponden al promedio ± ES de 8‐11 ratas en cada dosis inyectada. * p<0,05 comparado con los controles inyectados con agua (ANOVA seguido de Newman‐Keuls para comparaciones múltiples). Ensayo de Laberinto en Cruz Elevado para evaluar efecto ansiolítico. Efecto de los extractos de plantas y diazepam sobre el porcentaje de entradas a los brazos abiertos del laberinto y sobre el porcentaje de tiempo de permanencia en ellos. Los datos corresponden al promedio ± ES Rev. Farmacol. Chile (2012) 5(1): 24 DISCUSION En el presente estudio se investigaron los efectos de tres extractos de hojas provenientes de plantas autóctonas de Latinoamérica utilizadas en medicina popular por sus propiedades tranquilizantes y antidepresivas, Annona muricata, Acantholippia desertícola y Salvia elegans. Los resultados del monitoreo de la actividad motora espontánea mostraron marcados efectos depresores en ratas, después de la administración aguda de dosis únicas de 12,5, 25 y 50 mg/kg del extracto de S. elegans, demostrando el notable efecto sedante de esta planta. En cambio, los extractos de A. desertícola y A. muricata disminuyeron significativamente la motilidad solo con la dosis más alta utilizada, es decir 50 mg/kg. A pesar de sus significativos efectos sedantes, el extracto de S. elegans no demostró efectos tipo ansiolítico en el modelo del laberinto en cruz elevado, mientras que los extractos de A. muricata y A. desertícola aumentaron significativamente tanto las entradas como la permanencia en los brazos abiertos del laberinto aun luego de dosis que carecían de efecto depresor sobre la actividad motora. Estos datos sugieren que el modelo animal de ansiedad utilizado en este estudio, el laberinto en cruz elevado, es capaz de discriminar entre efectos sedantes y ansiolíticos. Desconocemos el mecanismo por el cual se producen los efectos ansiolíticos de estas plantas; sin embargo, considerando que el laberinto en cruz ha demostrado ser un buen modelo para evaluar ansiolíticos benzodiacepínicos, como diazepam, podríamos sugerir la mediación del aminoácido GABA en dichos efectos. El modelo de depresión utilizado en este trabajo, la natación forzada, permitió identificar efectos tipo antidepresivo luego de la administración de los extractos de A. muricata y S. elegans. Todas las dosis de ambos extractos disminuyeron el tiempo de inmovilidad y, simultáneamente, aumentaron la conducta de natación sin afectar la conducta de escalamiento. El perfil de los efectos conductuales de los extractos en el ensayo de natación forzada es compatible con el perfil del antidepresivo de referencia fluoxetina. En efecto, tal como había sido observado anteriormente (Page M.E. 1999), la disminución de la inmovilidad inducida por fluoxetina era acompañada por un aumento de la natación, mientras que la conducta de escalamiento no fue afectada por esta droga. Se ha demostrado que la natación en la rata es una conducta sensible a fármacos serotoninérgicos, tales como fluoxetina, inhibidor selectivo de la recaptación de serotonina. En cambio, la conducta de escalamiento es más sensible a fármacos con acción selectiva sobre la transmisión catecolaminérgica, tales como los antidepresivos tricíclicos del tipo imipramina (Detke, M.J., 1995; Cryan, J.F., 2000). En consecuencia, el modelo de natación forzada permite sugerir la participación de mecanismos serotoninérgicos en los efectos tipo antidepresivos de A. muricata y S. elegans, aunque, obviamente, se requieren otro tipo de estudios para confirmar este mecanismo de acción. En nuestro laboratorio hemos demostrado los posibles efectos antidepresivos de otras plantas aplicando el mismo ensayo de natación forzada. Por ejemplo Casimiroa edulis (Rutaceae) cuyo efecto anti‐inmovilidad va acompañado de aumento del escalamiento y no de la natación (Mora, S., 2005a) y Aloysia polystachya (Verbenaceae) que, junto con disminuir la inmovilidad, aumenta la duración de las dos conductas activas, escalamiento y natación (Mora, S., 2005b). En conclusión, la aplicación de modelos animales nos ha permitido identificar las propiedades psicotrópicas de tres plantas medicinales de uso muy frecuente en la población y, en consecuencia, validar en forma objetiva su uso en el tratamiento de trastornos emocionales como la ansiedad y la depresión. Salvia elegans parece poseer potentes efectos sedantes y antidepresivos, mientras que, Acantholippia desertícola demostró interesantes propiedades tipo ansiolítico en dosis que no provocan sedación y, finalmente, Annona muricata resultó activa como ansiolítico y como antidepresivo, incluso en dosis que no deprimen la actividad motora. Sin duda, se requieren mayores estudios preclínicos para confirmar o extender estos resultado y para evaluar el riesgo de potenciales reacciones adversas en humanos. En la literatura científica se han descrito numerosas plantas usadas en medicina popular como ansiolíticos o antidepresivos. Además, un porcentaje importante de la población recurre a estos productos para aliviar síntomas psiquiátricos con la creencia que por ser “naturales” son alternativas más seguras que los medicamentos psicotrópicos comúnmente usados. Sin embargo, las plantas pueden producir reacciones adversas potencialmente graves o interactuar con otros medicamentos. Probablemente, con la excepción del Hypericum perforatum (hierba de San Juan) para tratar la depresión, Ginkgo biloba, utilizado para deterioros orgánicos cerebrales y Piper methysticum (Kava‐kava), usado como ansiolítico, se considera que la actual evidencia científica es insuficiente para asegurar la eficacia y la seguridad en las demás especies informadas (Medina E,). En muchos casos se continúan realizando investigaciones farmacológicas y clínicas que deberían aumentar nuestro conocimiento en este ámbito y permitirán obtener nuevas herramientas terapéuticas que substituyan o complementen los fármacos actualmente en uso para tratar los trastornos psiquiátricos. Quizás, en un futuro no tan lejanos, el uso de plantas medicinales en Psiquiatría no será visto como algo excepcional. Rev. Farmacol. Chile (2012) 5(1): 25 BIBLIOGRAFÍA: Aguilar A., Camacho J.R., Chino S., Vasquez P., López P. (1994) HerbarioMedicinal del Instituto Mexicano del Seguro Social. Información Etnobotánica, Mexico. Babic, D. (2007) Herbal medicine in the treatment of mental disorders. Psychiat. Danub. 19, 241‐244. Buller, B., Legrand, V, (2001) Novel treatments for anxiety and depression: hurdles to bringing them to the market. DDT 6, 1220‐1230. Cryan, J.F., Lucky, I. (2000). Antidepressant‐like behavioral effects mediated by 5‐hydroxytriptamine2c receptors. J. Pharmacol. 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