Download Estudio de antimicrobianos: Técnica del tablero

Sensibilidad
antimicrobiana.
Combinación de
antimicrobianos.
Técnica del tablero
Área Microbiología
Lic. Andrea Arismendi
 Permite evaluar combinaciones de agentes antimicrobianos frente a un determinado
microorganismo
 Los tubos o pocillos que se utilizan forman un tablero (como el de ajedrez) con las
múltiples diluciones seriadas de los antimicrobianos
 Se usan placas de multipocillos
 Se utiliza cepas de microorganismos cuyos CIM para ambos antimicrobianos sean
conocidos (calculados con anterioridad).
Antimicrobiano A
 En el eje de las X se coloca
concentraciones crecientes del
antimicrobiano A, desde menor a
mayor concentración. Las
columnas poseen las mismas
concentraciones.
 En el eje de las Y se colocan las
concentraciones del
antimicrobiano B. Las filas
poseen las mismas
concentraciones
 La primera casilla corresponde al
0 de CIM. Quedan considerada
todas las posibles combinaciones
de diluciones.
Antimicrobiano B
1
A
B
C
D
E
F
G
H
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
Preparación del inóculo
 Calcular el volumen de suspensión para adicionar a 25 ml de agua y
tener una concentración final del microorganismo de 3x105 a 5x105
UFC/ml en cada well.
 Aislado de un cultivo puro, la suspensión se ajusta a escala McFarland
0,5 de turbidez ( = 1,5x108 UFC/ml).
 Se hace dilución 1:31 para alcanzar una concentración 4x106 a 5x106
UFC/ml → 1,5x108 / 31 = 4x106 UFC/ml.
C1.V1=C2.V2 → 1,5x108 UFC/ml.V1 = 5x106 UFC/ml.25 ml
V1= 0,8 ml
Como cada well posee 100 µl de caldo + ATB, al agregar 100 µl de la
suspensión se diluye al doble, por ende se tiene en cada well una
concentración de 4x104 a 5x104 UFC o 4x105 a 5x105 UFC/ml (se
diluye a la mitad)
Cálculos
 Para ver los efectos de los antimicrobianos juntos hay que calcular la
Concentración Inhibitoria Fraccionaria (FIC)
 FIC del agente A = CIM del agente A en combinación
CIM del agente A solo
 FIC del agente B = CIM del agente B en combinación
CIM del agente B solo
 ƩFIC = FIC de A + FIC de B
Interpretación de la sumatoria
Los efectos de la actividad combinada pueden ser:
 Indiferencia: la actividad de los antimicrobianos no difieren de los
efectos solos. 0,5 < X ≤ 4
 Sinergismo: La actividad de los dos antimicrobianos es mayor que
la actividades separados de los mismos. X ≤ 0,5
 Antagonismo: La actividad de los antimicrobianos es menor. X > 4
 Sinergismo parcial: se define cuando ƩFIC = 0,5 < X < 1. Su
designación es controversial.
Indiferente
Amicacina (µG/ml)
Azlocilina (µG/ml)
• FIC Az = 128/128 =1
• FIC Am= 1/32 = 0,03125
• ƩFIC = 1,03
• Indiferencia: 0,5 < X ≤ 4
• Sinergismo: X ≤ 0,5
• Antagonismo: X > 4
• Sinergismo parcial: 0,5 < X < 1
Sinergismo
Amicacina (µG/ml)
Azlocilina (µG/ml)
• FIC Az = 32/128 = 0,25
• FIC Am= 4/32 = 0,125
• ƩFIC = 0,375
• Indiferencia: 0,5 < X ≤ 4
• Sinergismo: X ≤ 0,5
• Antagonismo: X > 4
• Sinergismo parcial: 0,5 < X < 1
Pseudosinergismo
Amicacina (µG/ml)
Azlocilina (µG/ml)
• FIC Az = 2/128 = 0,016
• FIC Am= 16/32 = 0,5
• ƩFIC = 0,516
• Indiferencia: 0,5 < X ≤ 4
• Sinergismo: X ≤ 0,5
• Antagonismo: X > 4
• Sinergismo parcial: 0,5<X<1
Antagonismo
Amicacina (µG/ml)
Azlocilina (µG/ml)
• FIC Az = 512/128 = 4
• FIC Am= 1/32 = 0,031
• ƩFIC = 4,031
• Indiferencia: 0,5 < X ≤ 4
• Sinergismo: X ≤ 0,5
• Antagonismo: X > 4
• Sinergismo parcial: 0,5<X<1