Download Stanbio LDH Liqui-UV

Document related concepts

Lactato deshidrogenasa wikipedia, lookup

Ácido láctico wikipedia, lookup

Ensayo enzimático wikipedia, lookup

Transcript
Stanbio LDH Liqui-UV
Mujeres
103 - 227 U/L 310 K (37°C)
Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios rangos
normales.
La elevación de la deshidrogenasa láctica (LDH) en el suero, ocurre
desde infarto al miocardio, enfermedades del hígado, anemia
perniciosa y megaloblástica, embolia pulmonar, enfermedades
malignas y distrofia muscular1. El análisis combinado de
deshidrogenasa láctica y creatina kinasa, particularmente las
isoenzimas de cada una, confirma el diagnóstico definitivo del infarto
agudo al miocardio2.
4
Reactivos
Buffer de LDH (Reactivo 1)
Lactato L-litio...............…..............
2 Metil-2-Amino-1-Propanol pH 8.8
+
80 - 285 U/L 310 K (37°C)
3
340 nm
Cinética
Creciente
310 K (37ºC)
1:20
60 segundos
60 segundos
0.450 A
0.120 ∆A/min
3376
80 U/L
285 U/L
800 U/L
1 cm
9.0 + 1.0
< 0.450
Los parámetros arriba mencionados deberán considerarse al momento de
programar los analizadores para la determinación de la LDH. Consulte su
manual del Instrumento para las instrucciones de programación.
Comparación: Un grupo de 70 muestras dentro de un rango de actividad
de LDH de 64 - 504 U/L fue analizado por el método de LDH descrito, y
también por el de un reactivo comercial
similar disponible. La
comparación de resultados tiene un coeficiente de correlación de 0.999 y
con una ecuación de regresión de y= 1.108x + 1.582 (la comparación de
estudios se llevó a cabo de acuerdo a la guía tentativa NCCLS EP9-T)
Linearidad: El reactivo es lineal hasta 800 U/L. Las muestras que excedan
este valor deberán diluirse con un volumen igual de solución salina, repetir
el ensayo y multiplicar el resultado por el factor de dilución 2.
Referencias
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
nd
Katchmar JF, Moss DW. In Fundamentals of Clinical Chemistry, y 2
ed., NW Tietz, Editor. WB Saunders, Philadelphia, 1976, p.652.
Roe CR et al. J Lab Clin Med 80:557,1972.
Bulh SN, Jackson K Y. Clin Chem 24:828, 1978.
Wacker WEC st al. New Engl J Med 255:449, 1956.
Young DS. et al. Clin. Chem. 21:323D, 195 (Special Issue).
nd
Henry RJ et al. Clinical Chemistry; Principles de Techniques, 2 ed.,
Haper & Row, Hagerstown MD pp 819-831, 1974.
Stanbio laboratory, Inc. Data
Procedimiento manual
100 mmol/L
600 mmol/L
Enzima de LDH (Reactivo 2)
NAD
Normal:
Hombres
Características :
Longitud de onda.......................................
Tipo de reacción .......................................
Dirección de la reacción ...........................
Temperatura de reacción .........................
Relación de la muestra / reactivo .............
Tiempo de equilibrio .................................
Tiempo de lectura .....................................
Absorbancia límite del blanco ...................
Cambio de Absorbancia Alta/min. ............
Factor........................................................
Valor normal bajo......................................
Valor normal alto.......................................
Lineridad....................................................
Paso de la Luz de la celda .......................
pH……………………………………………
Absorbancia inicial ………………………..
Resumen y principio
3
6
mmol/L
1.
Por cada muestra coloque 1.0 mL del reactivo de trabajo dentro de
una celda de 1 cm de paso luz, e incube a 310 K (37°C)
aproximadamente por 3 minutos.
2.
Adicione 0.050 mL (50 µL) de la muestra a su respectivo tubo,
mezcle bien e incube por un minuto a 310 K (37°C).
3.
Ajustar a 0 con agua destilada el espectrofotómetro a 340 nm
4.
Anote el incremento en la absorbancia a intervalos de 60 seg.
(∆A/min). Durante 3 minutos. La relación de cambio deberá ser
constante.
Precauciones del reactivo: Para uso de diagnóstico In-vitro
No se pipetee con la boca
Preparación del reactivo: El Buffer y los reactivos enzimáticos
líquidos esta listos para su uso. Prepare el reactivo de trabajo en un
proporción de 5 partes de Buffer (R1) y 1 parte de enzima (R2), ( por
ejemplo 25 mL de Buffer y 5 mL de enzima).
Estabilidad y Almacenamiento del reactivo: Los reactivos son
estables hasta la fecha de caducidad marcada en la etiqueta si se
almacena de 275 a 281 K (2 a 8°C). Y protegidos de la luz. Los reactivos
deben verse claros y sin color. Descartar si se ve turbio ó si
contiene partículas. El reactivo de trabajo es estable por 2 meses a 275
a 281 K (2-8°C) o por 1 día a temperatura ambiente 288 - 298 K (15 25°C).
Materiales requeridos pero no incluidos
Espectrofotómetro capaz de realizar lecturas de absorbancia a 340 nm y
con 1 cm de paso luz.
Baño de temperatura constante a 310 K (37°C) ó portacubeta con
temperatura controlada.
Pipetas serológicas ó automáticas
Tubos de ensaye
Cronómetro
Recolección y Preparación de la Muestra
Suero claro no hemolizado es la muestra recomendada. El Plasma puede
ser usado si se recolecta con EDTA.
3376
Sustancias Interferentes: La heparina, los citratos y los oxalatos inhiben
el ensayo. Los sueros ictéricos y lipémicos requieren de un blanco de
5
suero. Young et. al ., han revisado los efectos de drogas y otras
condiciones sobre niveles de LDH.
Para la determinación cuantitativa de Deshidrogenasa
Láctica en suero y Plasma con EDTA.
Este método es el original de Buhl y Jackson modificado por Wacker ,
quienes optimizaron las condiciones de reacción.
La LDH específicamente cataliza la oxidación de lactato a piruvato con la
subsecuente reducción del NAD a NADH. La velocidad a la cual se forma la
NADH es proporcional a la actividad de la LDH. El método descrito
determina el aumento de absorbancia por minuto a 340 nm.
X
Valores normales
Parámetros de prueba

∆A/min
U/L=
Estabilidad de la muestra: La actividad de la LDH sérica es estable
por 3 días a 275 a 281 K (2 a 8°C). Las muestras congeladas muestran una
disminución en las isoenzimas LDH-4 y LDH-5, dando por lo tanto valores
bajos de LDH.
Nota: Si la celda no esta a temperatura controlada, incube las muestras
310 K (37°C) entre la lectura y lectura.
Los volúmenes se pueden incrementar al doble, si el instrumento requiere
un volumen mayor a 1 mL.
Control de Calidad:
•
Sueros normales y anormales con niveles de LDH determinados por
este método deben ser incluidos en cada serie de pruebas.
Resultados
Los valores se obtienen en base al “coeficiente de extinción de absortividad
micromolar “ de NADH a 340 nm (0.00622). Una unidad por litro (U/L) de
actividad de LDH es la cantidad de enzima que produce un µmol/L de
NADH por minuto.
U/L=
U/L=
∆A/min.
Absortividad
∆A/min.
0.00622
X
Volumen Total
Volumen de la Muestra
X
1.050
0.050
Fabricado en EUA por:
Stanbio Laboratory
1261 North Main Street
Boerne TX, 78006
Distribuido en México por:
Laboratorios Licon, S.A.
Viveros del Rocío No. 33
Col. Viveros de la Loma
C.P. 54080
Tel.: 5-362-02-99
Fax: 5-362-17-92
Rev. 13/06/00
IN-362