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Stanbio LDH Liqui-UV Mujeres 103 - 227 U/L 310 K (37°C) Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios rangos normales. La elevación de la deshidrogenasa láctica (LDH) en el suero, ocurre desde infarto al miocardio, enfermedades del hígado, anemia perniciosa y megaloblástica, embolia pulmonar, enfermedades malignas y distrofia muscular1. El análisis combinado de deshidrogenasa láctica y creatina kinasa, particularmente las isoenzimas de cada una, confirma el diagnóstico definitivo del infarto agudo al miocardio2. 4 Reactivos Buffer de LDH (Reactivo 1) Lactato L-litio...............….............. 2 Metil-2-Amino-1-Propanol pH 8.8 + 80 - 285 U/L 310 K (37°C) 3 340 nm Cinética Creciente 310 K (37ºC) 1:20 60 segundos 60 segundos 0.450 A 0.120 ∆A/min 3376 80 U/L 285 U/L 800 U/L 1 cm 9.0 + 1.0 < 0.450 Los parámetros arriba mencionados deberán considerarse al momento de programar los analizadores para la determinación de la LDH. Consulte su manual del Instrumento para las instrucciones de programación. Comparación: Un grupo de 70 muestras dentro de un rango de actividad de LDH de 64 - 504 U/L fue analizado por el método de LDH descrito, y también por el de un reactivo comercial similar disponible. La comparación de resultados tiene un coeficiente de correlación de 0.999 y con una ecuación de regresión de y= 1.108x + 1.582 (la comparación de estudios se llevó a cabo de acuerdo a la guía tentativa NCCLS EP9-T) Linearidad: El reactivo es lineal hasta 800 U/L. Las muestras que excedan este valor deberán diluirse con un volumen igual de solución salina, repetir el ensayo y multiplicar el resultado por el factor de dilución 2. Referencias 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. nd Katchmar JF, Moss DW. In Fundamentals of Clinical Chemistry, y 2 ed., NW Tietz, Editor. WB Saunders, Philadelphia, 1976, p.652. Roe CR et al. J Lab Clin Med 80:557,1972. Bulh SN, Jackson K Y. Clin Chem 24:828, 1978. Wacker WEC st al. New Engl J Med 255:449, 1956. Young DS. et al. Clin. Chem. 21:323D, 195 (Special Issue). nd Henry RJ et al. Clinical Chemistry; Principles de Techniques, 2 ed., Haper & Row, Hagerstown MD pp 819-831, 1974. Stanbio laboratory, Inc. Data Procedimiento manual 100 mmol/L 600 mmol/L Enzima de LDH (Reactivo 2) NAD Normal: Hombres Características : Longitud de onda....................................... Tipo de reacción ....................................... Dirección de la reacción ........................... Temperatura de reacción ......................... Relación de la muestra / reactivo ............. Tiempo de equilibrio ................................. Tiempo de lectura ..................................... Absorbancia límite del blanco ................... Cambio de Absorbancia Alta/min. ............ Factor........................................................ Valor normal bajo...................................... Valor normal alto....................................... Lineridad.................................................... Paso de la Luz de la celda ....................... pH…………………………………………… Absorbancia inicial ……………………….. Resumen y principio 3 6 mmol/L 1. Por cada muestra coloque 1.0 mL del reactivo de trabajo dentro de una celda de 1 cm de paso luz, e incube a 310 K (37°C) aproximadamente por 3 minutos. 2. Adicione 0.050 mL (50 µL) de la muestra a su respectivo tubo, mezcle bien e incube por un minuto a 310 K (37°C). 3. Ajustar a 0 con agua destilada el espectrofotómetro a 340 nm 4. Anote el incremento en la absorbancia a intervalos de 60 seg. (∆A/min). Durante 3 minutos. La relación de cambio deberá ser constante. Precauciones del reactivo: Para uso de diagnóstico In-vitro No se pipetee con la boca Preparación del reactivo: El Buffer y los reactivos enzimáticos líquidos esta listos para su uso. Prepare el reactivo de trabajo en un proporción de 5 partes de Buffer (R1) y 1 parte de enzima (R2), ( por ejemplo 25 mL de Buffer y 5 mL de enzima). Estabilidad y Almacenamiento del reactivo: Los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad marcada en la etiqueta si se almacena de 275 a 281 K (2 a 8°C). Y protegidos de la luz. Los reactivos deben verse claros y sin color. Descartar si se ve turbio ó si contiene partículas. El reactivo de trabajo es estable por 2 meses a 275 a 281 K (2-8°C) o por 1 día a temperatura ambiente 288 - 298 K (15 25°C). Materiales requeridos pero no incluidos Espectrofotómetro capaz de realizar lecturas de absorbancia a 340 nm y con 1 cm de paso luz. Baño de temperatura constante a 310 K (37°C) ó portacubeta con temperatura controlada. Pipetas serológicas ó automáticas Tubos de ensaye Cronómetro Recolección y Preparación de la Muestra Suero claro no hemolizado es la muestra recomendada. El Plasma puede ser usado si se recolecta con EDTA. 3376 Sustancias Interferentes: La heparina, los citratos y los oxalatos inhiben el ensayo. Los sueros ictéricos y lipémicos requieren de un blanco de 5 suero. Young et. al ., han revisado los efectos de drogas y otras condiciones sobre niveles de LDH. Para la determinación cuantitativa de Deshidrogenasa Láctica en suero y Plasma con EDTA. Este método es el original de Buhl y Jackson modificado por Wacker , quienes optimizaron las condiciones de reacción. La LDH específicamente cataliza la oxidación de lactato a piruvato con la subsecuente reducción del NAD a NADH. La velocidad a la cual se forma la NADH es proporcional a la actividad de la LDH. El método descrito determina el aumento de absorbancia por minuto a 340 nm. X Valores normales Parámetros de prueba ∆A/min U/L= Estabilidad de la muestra: La actividad de la LDH sérica es estable por 3 días a 275 a 281 K (2 a 8°C). Las muestras congeladas muestran una disminución en las isoenzimas LDH-4 y LDH-5, dando por lo tanto valores bajos de LDH. Nota: Si la celda no esta a temperatura controlada, incube las muestras 310 K (37°C) entre la lectura y lectura. Los volúmenes se pueden incrementar al doble, si el instrumento requiere un volumen mayor a 1 mL. Control de Calidad: • Sueros normales y anormales con niveles de LDH determinados por este método deben ser incluidos en cada serie de pruebas. Resultados Los valores se obtienen en base al “coeficiente de extinción de absortividad micromolar “ de NADH a 340 nm (0.00622). Una unidad por litro (U/L) de actividad de LDH es la cantidad de enzima que produce un µmol/L de NADH por minuto. U/L= U/L= ∆A/min. Absortividad ∆A/min. 0.00622 X Volumen Total Volumen de la Muestra X 1.050 0.050 Fabricado en EUA por: Stanbio Laboratory 1261 North Main Street Boerne TX, 78006 Distribuido en México por: Laboratorios Licon, S.A. Viveros del Rocío No. 33 Col. Viveros de la Loma C.P. 54080 Tel.: 5-362-02-99 Fax: 5-362-17-92 Rev. 13/06/00 IN-362