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Generalidades en Biología Molecular En Cáncer UNIVERSIDAD MAIMÓNIDES Especialista en Anatomía Patológica Patología Molecular – Genética Forense Directora Médica Lab Oncogen Ejemplo de translocación BCR BCR ABL Dominio Tirosina Quinasa TK ABL Cromosoma de philadelphia Ph’ t(9;22)(q34;q11). PRIMER TAAGCCTAAAT BCR PCR INTRON AGGCATGACTTC cDNA ATTCGGATTTAGCTGCTACATTGACGGATTCCGTACTGAAG cDNA DNA PRIMER RNA BCR ABL ABL RETROTRANSCRIPCION RNA cDNA RNA PRIMER TAAGCCTAAAT RNAs 1) EXTRACCION TODOS - RNA 3) AMPLIFICACION ESPECIFICA POR PCR PCR BCR 2) RETROTRANSCRIPCION DE TODOS RNAs a cDNA COMPLETO PRIMER cDNA BCR ABL INTRON AGGCATGACTTC cDNA ATTCGGATTTAGCTGCTACATTGACGGATTCCGTACTGAAG cDNA DNA ABL RNA RNA TAAGCCTAAAT Exón 9 Exón 9 Fusión X2/X9 c DNA Exón 3 Exón 2 Exón 3 Exón 3 Exón 7 Exón 10 Exón 10 Exón 8 GATAAGGCTCAGG PRIMER B AGGCATGACTTC PRIMER A ATTCGGATTTAGCTGCTACATTGACGGATTCCGTACTGAAG TAAGCCTAAAT Fusión X2/X7 ATTCGGATTTAGCTGCTACATTTAAGCCGCTATTCCGAGTCCTA PRIMER E PRIMER E PCR Y ALTERACIONES CROMOSOMICAS TRANSLOCACIONES - INVERSIONES CROMOSOMA 15 GEN PML CROMOSOMA 17 GEN RAR RAR PML CROMOSOMA 15 CITOGENETICO LMA LPA PML RAR TRANSLOCACION PML-RAR LEUCEMIA PROMIELOCITICA PML RAR ATTGCGTACCGGACGTTACGG Ejemplo de translocación RAR Exón 3 RAR PML Exón 3 Exón 6 c 1684 bcr 1 c 1739 bcr2 bcr3 PML TRANSLOCACION PML/RAR t(15;17) M 4 FW DIRECTO GCGAGCTGCT GGAGGCTGTG GGCTGGGCCG CCTGGATGCT GGATGAAGTG CTACGCCTCG CGCTCTGCCG CCTGCGCCAG Fw bcr3 nested GCTTCGACGA GTTCAAGGTG ATGCAGCTGT ATCCAAGAAA ACGTTGACCT GCCCGAGGAG GACGCGCGGT GTGCTGCAGC GACCAGGAGG GAGGAGCCCC CTACGAGGAG ATGGCCAGTC GGGCAGCGCG CTGGTGCAGA GCACGGTTTC CTGCGCCAGG AGCTGCCGTG CGCACCGATG PROBE bcr3 CECCTGCAGG ACCTCAGCTC TTGCATCACC CAGGGGAAAG GCCAGCCCAG AGGCTGCCAG CACTCCCAGG GACCCTATTG GCAGAGAGAG TGAAGGCCCA GGTTCAGGCC CTGGGGCTGG CTGAAGCCCA GCCTATGGCT GTGGTACAGT M 2 FW DIRECTO ACGCCTTCTC CATCAAAGGC CCTTCCTATG PROBE bcr1 AGAAGAGGAA GTGCAGCCAG ACCCAGTGCC AGGGGAAGGA GGCAAGGTTG GCTCGGAGCT AGGCAGTCTC ACCACCCCAC CTGGATGGAC PROBE bcr2 GTGAGGTCTT CCTGCCCAAC AGCAACCACG Rv bcr 1-2-3 nested AGACCCAGAG CAGCAGTTCT GAAGAGATAG ACCAGCGCGA GCATCCGCAC TGCTGGACAT AGAGCCTGCA CAGTGCCCGG GGCACACCCC GTGCCAGTGT Fw bcr1-2 nested GAGAGGATGT CTCCAATACA ACGACAGCCC PML CCAGGAAGGT CATCAAGATG GAGTCTGAGG CCCCGGAGCA GCCCAGGCCC AGCACCTCCA CGCCTAGCCC CAGGAGCCCC GTCATAGGAA TGGCCAGTGG CGCCGGGGAG GCAGCCATTG TGCCCAGCCC TCCCTCGCCA CCCCCTCTAC R5 RV DIRECTO CCCGCATCTA CAAGCCTTGC TTTGTCTGTC AGGACAAGTC CTCAGGCTAC CACTATGGGG TCAGCGCCTG TGAGGGCTGC AAGGGCTTCT RAR PML/RARα NO DETECTABLE CONTROL GENÓMICO PACIENTE PML/RARα DETECTABLE CONTROL GENÓMICO PACIENTE PCR Y ALTERACIONES CROMOSOMICAS TRANSLOCACIONES - INVERSIONES CROMOSOMA 22 GEN BCR CROMOSOMA 9 GEN ABL ABL TRANSCRIPTO p 210 BCR CROMOSOMA 22 CITOGENETICO CROMOSOMA PHILADELFIA BCR ABL TRANSLOCACION BCR – ABL LEUCEMIA MIELOIDE CRONICA BCR ABL Ph LMC P 210 ATTGCGTACCGGACGTTACGG BCR-ABL LEUCEMIA MIELOIDE CRONICA Ejemplo de translocación BCR BCR BCR M244V ABL TK ABL T315I H396R Dominio Tirosina Quinasa TK ABL Cromosoma de philadelphia Ph’ t(9;22)(q34;q11). SENSIBILIDAD DE LAS MUTACIONES DEL DOMINIO TK - ABL IMATINIB NILOTINIB DASATINIB A LOS INHIBIDORES TK EN LMC - BCR/ABL M244V G250E RESISTENCIA Q252H Y253F Y253H SENSIBILIDAD INTERMEDIA Q252H Q252H E255K E255V V299L F311L SENSIBILIDAD Q252H F311L F311L F311L T315A T315I F317L F317V T315I T315I T315I M315T M315T M315T M315T E355G F359V V379I L387M L387M H396P H396P H396R L387M H396P L387M H396P JAK - 2 V617F JAK2 Cytogenetic Location: 9p24 Molecular Location on chromosome 9: V617F JAK2 ATTCGCCATAAGCTGTCAAGCCCATGGCCGTAAGCTGACT ATTCGCCATA GTAAGCTGACT 300 pb TAAGCTGTTA 200 pb V617F JAK2 CONTROL GENOMICO PACIENTE SIN MUT PACIENTE CON MUT CONTROL NO MUT CONTROL MUT METILACION MGMT QUIMIOTERAPICOS ALQUILANTES ALQUILANTES EXOGENOS GRUPO ALQUILO G AGT O6 -ALQUIL GUANINA TRANSFERASA C MUTACION AGT G A T AGT GRUPO ALQUILO RUPTURA TRANSVERSION GEN MGMT REPARADO AGT MECANISMO DE ACETILACION - DEACETILACION ESTRUCTURA DE LA CROMATINA CORE NUCLEAR TELOMERO FIBRA CROMATICA SOLENOIDE NUCLEOSOMA CENTROMERO DNA HELIX CROMATINA BRAZO HISTONAS EXPRESION GENICA CROMOSOMA CONDENSADO EPIGENETICA MECANISMOS SILENCIADORES Comprende: METILACION DE DNA MODIFICACION DE HISTONAS: ACETILACION METILACION RNA DE INTERFERENCIA (RNAi) MECANISMOS SILENCIADORES Comprende: METILACION DE DNA MODIFICACION DE HISTONAS: ACETILACION METILACION FOSFORILACION UBIQUITILACION SUMOILACION RIBOSILACION ISOMERIZACION RNA DE INTERFERENCIA (RNAi) EPIGENETICA MECANISMOS EPIGENETICOS EUCROMATINA CROMATINA ABIERTA ADN DEMETILACION HISTONA ACETILACION H3K4 METILACION REMODELACION CROMATINA HETEROCROMATINA CROMATINA CERRADA ADN METILACION HISTONA DEACETILACION H3K9 METILACION REMODELACION CROMATINA MECANISMOS EPIGENETICOS DNA : METILACION HISTONAS : MODIFICACIONES POST – TRADUCCIONAL RNAi : SILENCIAMIENTO DE EXPRESION GENICA EPIGENETICA Y CANCER MARCADOR PRONOSTICO HIPERMETILACION p16 CARCINOMA COLON MARCADOR PREDICTIVO HIPERMETILACION PROMOTOR MGMT RESPUESTA ALQUILANTES DIANA TERAPEUTICA INHIBIDOR DE LA DEACETILACION (HDAC) METILACION METILACION METILACION METILACION DE PROMOTORES 5 METIL CITOSINA TRANSFERASA FACTORES DE TRANSCRIPCION M C GEN EXPRESADO M G C C MGMT PROMOTOR G C PROMOTOR MGMT GEN SILENCIADO EXPRESION GENICA M M CITOSINAS METILADAS M PROMOTOR MGMT HIPERMETILADO SENSIBILIDAD ALQUILANTES PREDICTOR AGT AGT TUMORES CEREBRALES OLIGODENDROGLIOMAS ASTROCITOMAS METILACION DE PROMOTORES 5 METIL CITOSINA TRANSFERASA AGT FACTORES DE TRANSCRIPCION M C C AGT M M G AGT G C GEN MGMT G PROMOTOR GEN SILENCIADO M CITOSINAS METILADAS M C C 5 METIL CITOSINA TRANSFERASA ENZIMA TRANSFIERE GRUPOS METILOS EN ISLAS CpG MECANISMO EPIGENETICO DE METILACION DE PROMOTORES AGT NO EXPRESION GENICA AGT ENZIMA SECUESTRA GRUPOS METILOS DEL O6-G DNA - REPARADORA MECANISMO REPARADOR A LA ALQUILACION MECANISMOS EPIGENETICOS MODIFICACIONES HISTONAS CIERRO LIGERAMENTE LA EXPRESION GENICA MAS DINAMICO METILACION DEL DNA CIERRO FIRMEMENTE LA EXPRESION GENICA MAS PROTECTOR DEACETILACION HDAC AC AC AC ACETILACION HDAC AC AC AC HDAC AC AC FACTORES TRANSCRIPCION GENES SILENCIADOS CROMATINA CONDENSADA NO EXPRESION GENICA CROMATINA LAXA EXPRESION GENICA DEACETILACION AC INHIBIDORES HDAC AC AC AC ACETILACION HDAC HDAC AC AC AC HDAC AC AC CROMATINA CONDENSADA APOPTOSIS ARRESTO CICLO CELULAR SUPRESION TUMORAL CROMATINA LAXA EXPRESION GENICA INHIBIDORES HDAC METILACION DE PROMOTORES MECANISMO EPIGENETICO M M C C C FACTORES DE TRANSCRIPCION CITOSINAS NO METILADAS EXPRESION GENICA C PROMOTOR M C METILOS C PROMOTOR GEN SILENCIADO TRANSCRIPCION GENES SUPRESORES ISLAS CpG CITOSINAS NO METILADAS M CITOSINAS METILADAS PROLIFERACION CELULAR C GENES RASSF1A MGMT CASP8 OTROS TUMORES CEREBRALES COMO PUEDO VER ESTO????? METILACION ESPECIFICA PCR MSP SECUENCIA METILADA CH3 SECUENCIA NO METILADA CH3 GGAGCGGAGTCTTCGA GGAGCGGAGTCTTCGA C C BISULFITO BISULFITO NO CONVERSION SI CONVERSION T C GGAGCGGAGTCTTCGA PRIMER MET (M) COMPLEMENTARIO GGAGTGGAGTCTTTGA G PRIMER NO MET (U) COMPLEMENTARIO CCTC G CCTCAGAA G CT CCTC A CCTCAGAA A CT GGAG C GGAGTCTT C GA GGAG T GGAGTCTT T GA Primer se pega Primer se pega A S S T1 T1 T2 T2 T3 T3 2 3 1 4 5 6 7 8 200pb U M U M 9 10 11 12 U M U M S S S S U M U M MUCHAS GRACIAS Dra ILLESCaS EDITH LABORATORIO ONCOGEN [email protected]
