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ESTADO LIBRE ASOCIADO DE PUERTO RICO Departamento de Educación Math and Science Partnership for the 21st Century Middle School Teacher MSP-21 http://bc.inter.edu/msp21 Proyecto sufragado con Fondos Federales del Departamento de Educación bajo el Programa Título II B – Mathematics and Science Partnership de la Ley de Educación Elemental y Secundaria de 1965, según enmendada por la Ley “No child left behind” LP-107-100. Este material se distribuye gratituamente. Su venta está estrictamente prohibida. Primera Edición, 2006 Derechos Proyecto MSP-21 Omar Hernández Rodríguez, MS, Ed D Director Ninguna parte de esta obra puede ser reproducida ni transmitida por ningún medio, electrónico, mecánico, fotocopiado, grabado u otro, excepto con el previo permiso escrito de MSP-21. Esta obra ha sido subvencionada por el proyecto MSP-21 mediante proyectos del Departamento de Educación de Puerto Rico. Contrato OAF081060070. Universidad Interamericana de Puerto Rico Recinto de Bayamón Carretera Dr. John Will Harris # 500 Bayamón, PR 00959 Tel (787) 279-1912 Fax (787) 279-7028 http://bc.inter.edu/msp21 Universidad Interamericana de Puerto Rico Recinto de Bayamón Math and Science Partnership for the 21st Century Middle School Teacher MSP 21 TALLER DE GENÉTICA Vilma S. Martínez JUNIO DE 2006 PROLOGO Los recintos de Bayamón y San Germán de la Universidad Interamericana de Puerto Rico y las Regiones Educativas de Bayamón y San Germán, desde hace dos años participan en el proyecto Math and Science Partnership for the 21st Century Middle School Teacher (MSP21) que tiene como meta mejorar el rendimiento académico de los estudiantes de escuela intermedia mediante la capacitación integral de los maestros de ciencias y matemáticas. Al final de los tres años del proyecto se espera que: 1. el 85% de los maestros participantes demuestre dominio de los conceptos incluidos en los estándares de matemáticas y ciencias establecidos por el Departamento de Educación de Puerto Rico. 2. el 85% de los maestros participantes integren a su práctica docente experiencias de aprendizaje activo fundamentadas en la interconexión de las disciplinas. 3. los estudiantes de las escuelas participantes mejoren en al menos un 3% su ejecutoria en las pruebas estandarizadas de matemáticas y una prueba correspondiente de ciencias. Para el logro de los objetivos se diseñó un Programa de Desarrollo Profesional en el cual los profesores de la Universidad y los maestros debían explorar y redactar actividades educativas con énfasis en el desarrollo y la búsqueda de conexiones entre las ciencias y las matemáticas. Además, las actividades debían estar alineadas con los Marcos Curriculares de Ciencias y Matemáticas del Departamento de Educación de Puerto Rico y, en específico, atender la integración por los temas y los procesos correspondientes a los estándares de conservación y cambio, interacciones, geometría y álgebra. Durante el segundo año del proyecto se ofrecieron conferencias, talleres y simposios que tenían como tema central la integración de las ciencias y las matemáticas. Para cada uno de ellos, se le pidió a los profesores y a los maestros que produjeran un trabajo que evidenciara su reflexión sobre el tema. Las conclusiones de este proceso indican que para lograr la integración es necesario que los maestros dominen con profundidad su disciplina y que posteriormente exploren avenidas que lleven a la integración. Parte del resultado de los trabajos realizados se presenta en la serie de libros INTEGRACIÓN DE LAS CIENCIAS Y LAS MATEMÁTICAS A NIVEL INTERMEDIO. Los títulos de los libros que componen la serie son: • Geometría • • Taller de Genética • • Calculadoras Gráficas para Maestros de Escuela Intermedia • • Matemáticas para Maestros de Escuela Intermedia: Conexiones y Tasas de Cambio • • El Aprendizaje Basado en Problemas y Proyectos: Una Estrategia de Integración • • Memorias de los Residenciales Académicos 2006 • • Actividades Integradoras de Ciencias y Matemáticas para Escuela Intermedia • Los libros Geometría y Taller de Genética de los profesores Javier O. Sierra y Vilma S. Martínez, respectivamente, tienen como objetivo fortalecer y ampliar los conocimientos de los maestros. El profesor Sierra define y explica los conceptos geométricos de una manera formal a diferencia de los autores tradicionales, que lo hacen de una manera intuitiva. Esta forma de presentar los conceptos geométricos fortalece el pensamiento deductivo que es fundamental para el desarrollo de un curso de geometría. Por su parte, la profesora Martínez, presenta actividades experimentales para reforzar los conceptos de genética y sus aplicaciones a las ciencias forenses. En el libro Calculadoras Gráficas para Maestros de Escuela Intermedia, sus autores, el profesor Rafael Canales y el doctor Omar Hernández exploran la integración de la tecnología para la enseñanza de las ciencias y las matemáticas. Tiene como objetivo enseñar a los maestros a utilizar la calculadora gráfica y prepararlos en el uso de sensores para la recolección de datos del ambiente. La información posteriormente es analizada para descubrir patrones y crear modelos matemáticos. En el libro Matemáticas para Maestros de Escuela Intermedia: Conexiones y Tasas de Cambio, el doctor Ángel Cruz nos presenta una guía para un curso de matemáticas integrada. El doctor Cruz hace un análisis profundo sobre la integración de los conceptos de matemáticas de escuela intermedia y los conceptos relacionados a los estándares de las interacciones, la conservación y el cambio. Además, presenta sugerencias metodológicas y ejemplos para el de las “assessment” actividades integradoras. En el libro El Aprendizaje Basado en Problemas y Proyectos: Una Estrategia de Integración, las autoras, las profesoras Carmen Caiseda y Evelyn Dávila, hacen un análisis profundo sobre el uso de estas metodologías para la integración de las ciencias y las matemáticas. Discuten aspectos como la planificación, el diseño, el desarrollo y la evaluación de actividades fundamentadas en la solución de problemas y el desarrollo de proyectos. Además de ejemplos y sugerencias para implantar estas estrategias en la sala de clases, incluyen instrumentos de assessment y una guía para el estudiante. El libro Memorias de los Residenciales Académicos 2006 incluye las transcripciones de las conferencias y los talleres ofrecidos, y el resultado de los trabajos en comisiones realizados durante los simposios Retos, controversias y oportunidades de la enseñanza de las ciencias y las matemáticas realizados durante agosto y septiembre de 2006. Además, recoge las reflexiones, opiniones y sugerencias de los maestros sobre los temas trascendentales que se discutieron. El aporte de los maestros al proyecto se recoge en el documentos: Actividades Integradoras de Ciencias y Matemáticas para Escuela Intermedia. Desde la perspectiva de su salón de clases, los maestros desarrollan actividades integradoras para los estudiantes de escuelas intermedias. Se integran la biología, la ecología, las ciencias terrestres, la electrónica, la astronomía, la química y las matemáticas. Algunas de estas actividades se validaron con estudiantes y mostraron que la integración es una estrategia que motiva a los estudiantes, requisito indispensable para que se de el aprendizaje. Ha sido un año muy productivo. El trabajo ha sido arduo pero gratificante. Tenemos asuntos pendientes: es necesario validar todas las actividades con los estudiantes y mostrar la efectividad de la integración en el dominio de los conceptos matemáticos y científicos. Finalmente, quiero agradecer a todas las personas que han colaborado en el proyecto MSP-21. Ha sido un ejercicio intelectual interesante. Omar Hernández Rodríguez, MS, EdD Director, Proyecto MSP-21 La genética y las combinaciones de genes Introducción Si observamos el mundo que nos rodea, nos daremos cuenta cuanta diversidad existe entre los seres vivos. Existe diversidad entre organismos de especies diferentes y aún entre organismos de la misma especie. Esa diversidad responde en gran medida a lo que llamamos genética. La genética es la rama de la biología que estudia la herencia y las variaciones que existen entre los organismos. La herencia es la transmisión de características de una a otra generación. Las leyes básicas de genética fueron establecidas por un monje austriaco de nombre Gregor Mendel, el cual hizo sus investigaciones utilizando guisantes. La unidad básica hereditaria es lo que conocemos como un gen. Los genes pueden ser dominantes ó recesivos. Los genes dominantes se representan con letra mayúscula y los recesivos con letra minúscula. Los genes dominantes visualmente inhiben la expresión del gen recesivo. Los genes van a estar en pares, así que puedes tener combinaciones como las siguientes: • Gen dominante – gen dominante (AA) → homocigoto dominante • Gen dominante – gen recesivo (Aa) → heterocigoto • Gen recesivo – gen recesivo (aa) → homocigoto recesivo Para que se forme una combinación cada parental tiene que haber aportado un gen (ejemplo: el padre aportó un gen para esa característica que fue enviado en el espermatozoide y la madre envió el otro gen en el óvulo). Ejemplo de combinaciones de genes: En humanos la pigmentación normal es determinado por el gen dominante y el albinismo por el recesivo. Así que personas con combinación de genes AA o Aa tendrán pigmentación normal y los de combinación aa serán albinos. Taller de Genética 1 Si dos personas normales Aa se casan. ¿Cómo pueden ser los hijos? Aa hombre (gametos) x A a espermatozoides A a óvulos A A a Aa mujer (gametos) AA normal Aa normal a Aa normal aa albino En hijos aparece una proporción de: ¾ ¼ ó 25 % AA ¾ 2/4 ó 50 % Aa ¾ ¼ ó 25 % aa Esta proporción o razón es una genotípica. En ellos también aparece una proporción de: ¾ ¾ ó 75 % normales ¾ ¼ ó 25 % albinos Esta proporción o razón es una fenotípica. Los por cientos resultan ser ciertos, solo cuando la progenie es numerosa. Cuando trabajamos con muestras pequeñas pueden haber desviaciones de los por cientos esperados. Otro factor que puede afectar las combinaciones de genes son los cruces al azar, que es el tipo de cruce que se practica en nuestra población. En este ejercicio se pretende demostrar el factor azar en una simulación de una población. Materiales 2 bolsas de papel por grupo 200 habichuelas rosadas (por grupo). 200 habichuelas blancas (por grupo). Marcadores 2 Vilma Susana Martínez Metodología El trabajo se hará de forma grupal (2 personas por grupo). Cada grupo hará lo siguiente: 1. Rotula una de las bolsas de papel con un #1 y la otra con un #2. 2. En cada bolsa coloca 100 habichuelas rosadas y 100 habichuelas blancas. 3. Cierra las bolsas de forma segura y agita su contenido. 4. Sin mirar el contenido de las bolsas, selecciona una habichuela de cada una. 5. Repita el paso #4 ciento noventa y nueve (199) veces adicionales. 6. Anota el número de veces que obtuviste cada combinación. Las anotaciones puedes hacerlas en la hoja de datos que se provee para esos fines. Posibles combinaciones: rosada – rosada rosada – blanca blanca – blanca Resultados Tabla #1: Combinaciones de habichuelas Combinaciones de habichuelas rosada – rosada rosada – blanca blanca – blanca Número de veces que se presentó la combinación Los números que se presentan en la tabla deben ser los resultados de la contabilidad de las combinaciones de su hoja de datos. Analice los resultados y conteste las siguientes preguntas: : Suponga que la habichuela rosada representa el gen dominante (A) y la blanca el gen recesivo (a). 1. ¿Cuántas se esperaban que presentaran la combinación AA? ¿La combinación Aa? ¿La combinación aa? ¿En términos de probabilidad como expresarías tus resultados? 2. ¿Cuántas posibles combinaciones se pueden hacer usando las dos clases de habichuelas? 3. ¿ Porqué es necesario seleccionar 200 veces diferentes las combinaciones? 4. ¿Cuál es la probabilidad de seleccionar el mismo color en un par de genes cada vez? ¿de seleccionar un color diferente cada vez? 5. ¿Porqué crees que la selección al azar provee la base para las diferencias que existen en los seres vivos? Taller de Genética 3 Actividad: La genética y las combinaciones de genes HOJA DE DATOS COMBINACIÓN QUE SE PRESENTÓ (Marque la indicada con una x) rosada-rosada rosada-blanca blanca-blanca # DE SELECCIÓN 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 Σ= 4 Σ= Σ= Vilma Susana Martínez COMBINACIÓN QUE SE PRESENTÓ (Marque la indicada con una x) rosada-rosada rosada-blanca blanca-blanca # DE SELECCIÓN 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 Σ= Taller de Genética Σ= Σ= 5 COMBINACIÓN QUE SE PRESENTÓ (Marque la indicada con una x) rosada-rosada rosada-blanca blanca-blanca # DE SELECCIÓN 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 Σ= 6 Σ= Σ= Vilma Susana Martínez COMBINACIÓN QUE SE PRESENTÓ (Marque la indicada con una x) rosada-rosada rosada-blanca blanca-blanca # DE SELECCIÓN 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 Σ= Taller de Genética Σ= Σ= 7 COMBINACIÓN QUE SE PRESENTÓ (Marque la indicada con una x) rosada-rosada rosada-blanca blanca-blanca # DE SELECCIÓN 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 Σ= 8 Σ= Σ= Vilma Susana Martínez USO DE LOS DATOS DEL EJERCICIO DE LA GENÉTICA Y LAS COMBINACIONES DE GENES PARA LA SIMULACIÓN DE UNA POBLACIÓN Supongamos que las 200 combinaciones obtenidas representan 200 organismos de una población, los cuales tienen un genotipo específico. Para esa población podríamos conocer si una característica genética específica se ajusta a una proporción fenotípica esperada. Esa información podría ser obtenida a través de una prueba estadística sencilla conocida como chi-cuadrada (x2 o “chi-square”). La estadística sirve para proveernos un resumen descriptivo de una muestra (en este caso de la muestra de la población simulada), también para inferir información de grupos más grandes de donde los datos originales fueron obtenidos. Como ya mencionamos, la prueba estadística que estaremos usando es la de chi-cuadrada. Esta prueba nos permite averiguar si lo que estamos observando era lo que estábamos esperando o si observado no es lo esperado. Veamos alguna información de la prueba. Prueba de chi-square : Toma las diferencias entre lo observado y lo esperado (se conoce como desviación), las corrige para signo (+ ó - ) y tamaño de la muestra y se obtiene un valor de chisquare calculado. El valor de chi-square calculado se compara con un valor de chi-square de una tabla (x2 tabulado) y de esa comparación se puede determinar rápidamente si las desviaciones en el experimento fueron causadas al azar o por cualquier otra razón. Comparación de los valores de x2 calculado vs. x2 tabulado En la tabla de valores de x2 (valor crítico) se usan dos parámetros: ¾ Probabilidad – va desde .99 hasta .01 (son probabilidades de que las desviaciones fueron causadas por el azar). Generalmente se utiliza .05 ¾ Grados de libertad (df) – el cual se determina sumando el número de categorías o fenotipos menos uno (n-1) El valor de x2 tabulado se obtiene en la hilera donde concuerdan los grados de libertad y la probabilidad correspondiente. Convencionalmente se acepta que cualquier valor de x2 calculado que exceda el valor de x2 tabulado (valor crítico) es significativo y se interpreta que las desviaciones no pueden ser atribuidas al azar. Por el contrario, las desviaciones se consideran no significativas (debidas al azar) cuando el valor calculado es menor que el valor crítico. Metodología para hacer la prueba de chi-cuadrada 1. Seleccione una característica genética para la población. Supongamos que en la población se espera una proporción fenotípica de 3:1 para esta característica. Ejemplo: Lóbulo de la oreja (fenotipo) Lóbulo libre – dominante Lóbulo adherido – recesivo 2. Escriba los fenotipos en la tabla de chi-cuadrada que se le provee. Taller de Genética 9 3. Escriba el número de personas con lóbulo libre y adherido (representan los valores observados). Recuerde que utilizará las combinaciones de genes de su tabla de datos y lo que representan. Combinación Genotipo que representa Fenotipo que representa rosada-rosada AA Lóbulo libre rosada-blanca Aa Lóbulo libre blanca-blanca aa Lóbulo adherido 4. Calcule cuántas personas de esa población se espera que tengan lóbulo libre y cuántas se esperan de lóbulo adherido. Lo harás de la siguiente manera: a) Tome el número total de organismos de la población y multiplíquelo por ¾ . Con este cálculo obtendrás el número esperado de personas con lóbulo libre. Anota el número obtenido en la tabla de chi-cuadrada. b) Tome el número total de organismos de la población y multiplíquelo por ¼ . Con este cálculo obtendrás el número esperado de personas con lóbulo adherido. Anota el número obtenido en la tabla de chi-cuadrada. 5. Calcula la desviación en la población. Esto se hace restando lo observado de lo esperado. 6. Cuadra tu desviación para poder trabajar con números positivos. 7. Divide los números que cuadraste entre le número esperado. Haz una sumatoria de esos resultados y obtendrás un resultado, el cual llamarás tu valor de x2 calculado. Ese valor lo compararás con un valor conocido como x2 tabulado. Las instrucciones de cómo buscar el valor de x2 tabulado o valor crítico se encuentran en la separata. TABLA DE CHI-CUADRADA Fenotipo (tipo de lóbulo) TOTAL Razón Número observado (O) (O-E)2 x2 calculado = ∑ --------- = E Número esperado (E) Desviación (d) O–E d2 d2/e Valor crítico ó x2 tabulado ▼ ▼ ▼ x2 calculado = d2 ---e Procederemos a hacer las comparaciones correspondientes. Primeramente se establecen las hipótesis. Hipótesis nula: O=E. No hay diferencias significativas entre los observado y lo esperado. Cualquier diferencia se debe al azar. Hipótesis alterna: O≠ E. Las diferencias entre lo observado y lo esperado son significativas y no se deben al azar. 10 Vilma Susana Martínez Comparación del valor de x2 calculado con el x2 tabulado: En el límite de la gráfica coloca el valor de x2 tabulado. 1. Ahora coloca en la gráfica el valor de x2 calculado. El valor de x2 calculado fue: Mayor Menor que el valor de x2 tabulado. 2. ¿Cuál hipótesis aceptas? _____Hipótesis nula _____Hipótesis alterna 3. Decide sobre las diferencias entre lo observado y lo esperado. Selecciona una: ______Las diferencias entre lo observado y lo esperado son pequeñas (no significativas) y se deben al azar. ______ Las diferencias entre lo observado y lo esperado son grandes (significativas) y no son debidas al azar. Taller de Genética 11 USO DEL DNA EN PRUEBAS FORENSES INTRODUCCION: Ya conocemos que la molécula DNA (ácido desoxiribonucleico) es la que contiene la información genética. Los genes, los cuales son las unidades básicas de la herencia, están compuestos de DNA. Esos genes compuestos de DNA en algunos casos tienen información que codifica para la producción de proteínas. Hay otras porciones de DNA que se conocen como no codificadoras o como DNA “inservible” Los científicos han encontrado la manera de utilizar ese DNA “inservible” para propósitos de identificación, basados en que cada uno de nosotros tenemos nuestra única colección de DNA “inservible” (lo llamaremos en lo sucesivo iDNA ). Aunque numerosas personas pueden compartir las mismas secuencias de iDNA en un sitio o locus específico, es muy poco probable que muchas personas compartan las mismas secuencias de ese tipo de DNA en diferentes lugares. Las estadísticas pueden ser utilizadas para determinar la probabilidad de que dos muestras de iDNA pertenezcan a una misma persona u organismo bajo investigación. La prueba conocida como “DNA “fingerprinting” está basada en la identificación de nuestros patrones únicos de iDNA. Ejercicio #1: Uso de secuencias de STR para identificar el perfil genético de una persona Un tipo de iDNA que es muy utilizado para trabajar con el perfil genético de una persona es el conocido como STR (las siglas de lo que en inglés se conoce como “simple tandem repeat”). Un STR es un locus o lugar en el DNA donde hay un segmento corto de nucleótidos repetidos (en este caso ATT). El número de repeticiones varía entre diferentes personas. Ejemplo: Un alelo puede ser: ATT ATT ATT ATT ATT ATT – tiene seis repeticiones ATT ATT ATT ATT ATT ATT ATT ATT ATT ATT ATT ATT – Tiene 12 repeticiones ATT ATT ATT ATT ATT ATT ATT ATT ATT ATT – 10 repeticiones Miles de locus de STR han sido identificados en el genoma humano, aproximadamente ocho mil. Anteriormente hemos mencionado los genes dominantes y recesivos. Aquí hay sólo dos posibles alelos: el alelo dominante o el alelo recesivo. En el caso de los STR, pueden haber muchos alelos diferentes para un mismo locus de STR de manera que la frecuencia de un alelo en particular en la población tiende a ser muy baja (ver ejercicio de frecuencia de los alelos en el anejo #1). 12 Vilma Susana Martínez Los organismos diploides presentan sus cromosomas en parejas (cromosomas homólogos). Dependiendo de su constitución alélica podemos decir que ellos son homocigotos o heterocigotos. Ejemplo: AA (homocigoto dominante) Con pico de viuda Aa (heterocigoto) Con pico de viuda aa (homocigoto recesivo) Sin pico de viuda Al igual que en las características mendelianas sencillas, los organismos para los locus STR pueden ser clasificados como homocigotos o heterocigotos. Ejemplo: Si un individuo tiene los dos alelos con 10 repeticiones, ese individuo es homocigoto. • alelo de STR con 10 repeticiones • alelo de STR con 10 repeticiones individuo homocigoto por que los alelos son iguales (los dos tienen igual número de repeticiones) Cromosoma Cromosoma Pareja de cromosomas homólogos Ejemplo: Si un individuo tiene dos alelos, uno con diez repeticiones y el otro con quince repeticiones, entonces ese individuo es heterocigoto. • • alelo de STR con 10 repeticiones alelo de STR con 15 repeticiones individuo es heterocigoto por que los alelos son diferentes (los alelos tienen repeticiones diferentes) Cromosoma Cromosoma Pareja de cromosomas homólogos El método que los científicos utilizan para analizar los alelos de los individuos involucra el aislar los segmentos repetidos y acomodarlos por tamaño. Taller de Genética 13 Técnica utilizada para distribuir STR por tamaño: La técnica utilizada para distribuir los pedazos de DNA es la conocida como electroforesis. Se ilustra una cámara de electroforesis que utiliza un gel de agarosa. La electroforesis es una técnica utilizada para la separación de moléculas (proteínas o ácidos nucleicos). En el caso de los ácidos nucleicos se usa un gel de agarosa (polisacárido originalmente obtenido de algas). La separación de las moléculas se hace basada en el tamaño molecular y la carga eléctrica. En el caso de DNA, las muestras son colocadas en los carriles del gel . El gel se somete a un campo eléctrico. Ya que los ácidos nucleicos tienen carga negativo, éstos migrarán al polo positivo del campo eléctrico. Esto causa que las muestras de DNA viajen en línea recta desde su punto de partida. El gel presenta resistencia a las moléculas, según éstas se mueven a través de él, de manera que los segmentos de DNA más pequeños se mueven más distantes que los segmentos más grandes. Una vez se han ubicado todos los segmentos de DNA a través del gel, hay técnicas que se usan para visualizar la ubicación de las bandas de DNA. En la siguiente figura se muestra una corrida de segmentos de DNA en un gel. Observa que el gel tiene incluido un carril que es un estándar. Los estándares contienen pedazos de DNA de tamaño conocido y se usan para compararlos con los pedazos de DNA de tamaño desconocido, de manera que los tamaños de los segmentos desconocidos puedan ser identificados por la comparación con los segmentos del estándar. POLO – Estándar Número de repeticiones 15 ___ Muestra #1 ___ 12 ___ Muestra #2 ___ 9 ___ 6 ___ ___ 3 ___ POLO + Cada banda de la muestra #1 y la muestra #2 que ves en el gel representa un alelo del locus STR. Observa el gel de electroforesis que se te presentó en la página anterior y contesta las siguientes preguntas. 1. Si la muestra #1 se supone que presente dos alelos y solo se presenta una banda en el gel de electroforesis, quiere decir que la muestra #1 muestra ___ alelos diferentes. 2. Si la muestra #2 se supone que presente dos alelos y presenta dos bandas en el gel de electroforesis, quiere decir que la muestra #2 muestra ___ alelos diferentes. 3. ¿Cuántas repeticiones tienen los alelos de la muestra #1? 14 Vilma Susana Martínez 4. ¿Cuántas repeticiones tienen los alelos de la muestra #2? 5. ¿Cómo será el genotipo del individuo de la muestra #1, homocigoto o heterocigoto? Explica tu contestación. 6. ¿Cómo será el genotipo del individuo de la muestra #2, homocigoto o heterocigoto? Explica tu contestación. Luego de haber presentado la información de los STR, los alelos de STR (basados en las repeticiones que presentan y la observación de esos alelos en un gel de electroforesis, trabajarás la metodología en un modelo de papel. Metodología 1. Se te ofrecerán cuatro bandas de papel de secuencias de nucleótidos (DNA). Corta cada una de las bandas ofrecidas. Estas bandas de papel representan pequeñas porciones de cromosomas de dos personas (las cuales llamaremos persona #1 y persona #2). Las bandas de nucleótidos se encuentran en el anejo #2. 2. Aislarás los STR. Lo harás de la siguiente manera: Cortarás las bandas de DNA con dos enzimas de restricción diferentes. Las enzimas de restricción son moléculas que tienen la habilidad de cortar segmentos de DNA en pedazos más pequeños. Son producidas por las bacterias como un mecanismo de defensa contra los virus que las puedan atacar. Hoy en día son muy utilizadas por los científicos. Actualmente se han identificado alrededor de 200, de las cuales 100 de ellas son muy utilizadas por los científicos. Hay diferentes enzimas de restricción y unas se diferencian de otras en las secuencias de DNA que pueden cortar. En tu caso utilizarás dos enzimas de restricción para cortar las bandas de DNA que se te proveen en el anejo #2 (usarás tus tijeras para hacer los cortes correspondientes en el DNA). Las enzimas de restricción que utilizarás son las siguientes: Hae III y Xhol. Utilizarás la enzima Hae III que reconoce la secuencia GGCC y corta entre la segunda base ( G ) y la tercera base ( C ). El corte lo hará de la siguiente manera: GG↓CG En esa misma secuencia utilizarás la enzima Xhol que reconoce la secuencia CTCGAC y corta entre la primera base (C) y la segunda base (T). El corte lo hará de la siguiente manera: C↓TCGAC Así que si tomamos como ejemplo la primera banda de DNA de la persona #1, verás que sucede lo siguiente, luego de los cortes: TCGACGG↓CCCCCCCCCCCCCCC↓CTCGACGGA Taller de Genética 15 Corte Hae III Corte Xhol Verás que el segmento corto repetido de este STR es CC. Si cuentas los segmentos CC repetidos desde la primera secuencia subrayada hasta la última subrayada, verás que hay 8. Por lo tanto es un alelo de 8 repeticiones. Harás el mismo procedimiento de corte de enzimas con la segunda banda de DNA de la persona #1 y con las bandas de la persona #2. Recuerda mantener las secuencias de la persona #1 y #2 separadas. 3. Ahora has aislado los alelos de STR de esos cromosomas. Conserva sólo los alelos de STR (los que tienen secuencias repetitivas) y descarta los otros pedazos de DNA Contesta Luego de cortar los segmentos de DNA asignados ¿cuál secuencia repetitiva se presentó en este STR? ______________ 4. En el papel que se te provee en el anejo #3, que representa un gel de electroforesis, utiliza el primer carril para el estándar, el carril #2 para el DNA de la persona #1 y el carril #3 para el DNA de la persona #2. 5. En ese papel que representa un gel de electroforesis, coloca los STR de la persona #1 y de la persona #2 en los lugares que correspondan. Asegura los STR con cinta adhesiva (“tape”). Esto representa un perfil genético o lo que conocemos como DNA “fingerprinting”. Luego de completada la tarea, contesta las siguientes preguntas: ¿Cuál es el genotipo de la persona #1 para los locus de STR? ¿es homocigoto o heterocigoto? ¿Cuál es el genotipo de la persona #2 para los locus de STR? ¿es homocigoto o heterocigoto? Anejo #1 16 Vilma Susana Martínez Suponga que una población consta de 800 individuos (diploides), así que el número total de alelos será 1,600. Trabajemos con un locus STR1. Si 150 de los alelos STR1 tiene nueve repeticiones, entonces la frecuencia de ese alelo en la población será de: 150/1,600 = 0.094 Si 600 alelos tienen 16 repeticiones. Entonces la frecuencia de esos alelos en la población será de: ________________________________ Si 730 alelos tienen 22 repeticiones. Entonces la frecuencia de esos alelos en la población será de: ________________________________ El restante de los alelos _________________________ será ____________ y su frecuencia será Anejo #2 Bandas de secuencias de nucleótidos de la persona #1 y persona #2 Taller de Genética 17 PERSONA #1 TCGACGGCCCCCCCCCCCCCCCCTCGACGGA TCGACGGCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCTCGACGGA PERSONA #2 TCGACGGCCCCCCCCCCCCCCCCCCTCGACGGA TCGACGGCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCTCGACGGA 18 Vilma Susana Martínez Anejo #3: Simulación de un gel de electroforesis Estándar Persona #1 Persona #2 16 14 12 10 8 Taller de Genética 19 20 Vilma Susana Martínez REALIZACIÓN DE PRUEBAS DE PATERNIDAD ANALIZANDO LOS LOCUS DE STR INTRODUCCIÓN: En el ejercicio anterior observamos como los STR pueden ser utilizados para establecer el perfil genético de una persona. Esta no es la única aplicación que pueden tener lo STR. Ellos se utilizan para una amplia gama de aplicaciones que incluyen: • • • • Investigaciones de personas desaparecidas. Investigación de sospechosos en casos criminales (ejemplo: crímenes, violaciones, etc). Biología de la conservación. Identificar restos humanos en sitios de desastres, tal como se hizo la identificación de restos humanos encontrados como consecuencia de los ataques terroristas al “World Trade Center” en septiembre 11. El objetivo principal de utilizar los STR es el de determinar la probabilidad de que una muestra paree con la otra. Veamos un ejemplo: • Que la muestra de STR levantada en la escena de un crimen concuerden con las muestras de uno de los sospechosos. Esto serviría para determinar la inocencia o culpabilidad de una persona. El análisis de STR unido a las leyes de herencia mendeliana es muy utilizado en pruebas de paternidad. Los alelos para STR son heredados de la misma manera en que se heredan otras características, como por ejemplo, pico de viuda. Aunque hay dos alelos para pico de viuda (recuerda dominante o recesivo) y numerosos alelos STR en un locus dado, cada individuo sólo presentará dos de esos alelos. Uno de esos alelos será heredado del padre y el otro de la madre. Las pruebas de “DNA fingerprinting” para pruebas de paternidad se hacen con suma facilidad ya que la sangre extraída del niño, la madre y el que se sospecha que es el padre proporciona una gran cantidad de células frescas e intactas. Tomemos un caso hipotético de un STR, digamos STR 3. Supongamos que el genotipo del hombre para este STR es 9,9 y el de la mujer 10,12. Si hacemos un cuadro de Punnet y colocamos las combinaciones de alelos que pueden proveer el hombre y la mujer, encontraremos que sus hijos pueden ser: Cruce 6,6 x 10,12 (espermatozoides) Alelo 10 (óvulos) Alelo 12 Taller de Genética Alelo 6 6,10 6,12 hijos 21 Puedes ver los resultados del cuadrado de Punnett en la representación del gel de agarosa de una electroforesis de esta manera: En una electroforesis esto podría representarse de esta manera: Estándar (número de repeticiones) Padre (6,6) Madre (10,12) Hijo #1 (6,10) Hijo #2 (6,12) 14 ------12 ------- -------- 10 ------- -------- 8 -------- ------- 6 ------4 -------- -------- -------- -------- ------- Puedes observar que cada uno de los hijos de esta pareja obtuvo un alelo de cada parentales, esta es la razón por la que los genotipos de los hijos no son idénticos a los genotipos de los parentales. 22 Vilma Susana Martínez Resuelve el siguiente caso haciendo un análisis de STR en una prueba de paternidad 1. Observa el siguiente análisis de STR para una prueba de paternidad. El caso que debes resolver es el siguiente: Tres matrimonios alegan ser los padres de un niño encontrado perdido en una ciudad. Estándar (número de repeticiones) Matrimonio #1 NIÑO HOMBRE -------- -------- Matrimonio #2 MUJER Matrimonio #3 HOMBRE MUJER HOMBRE MUJER 18 -------16 -------- -------- 14 -------- -------- 12 -------- -------- 10 -------- -------- --------------- -------- 8 -------- -------- 6 -------- -------- -------- 4 -------- -------- 2 -------- TABLA DE COLECCIÓN DE DATOS DE LOS GENOTIPOS: NIÑO Matrimonio #1 HOMBRE MUJER Matrimonio #2 HOMBRE MUJER Matrimonio #3 HOMBRE MUJER GENOTIPO Contesta las siguientes preguntas: (a) ¿Cuáles matrimonios podrían excluirse como los padres biológicos del niño? (b) ¿Cuáles podrían señalarse como los posibles padres biológicos del niño? Taller de Genética 23 USANDO LOS STR PARA PAREAR DNA EN INDIVIDUOS DE UNA POBLACIÓN INTRODUCCIÓN: Como ya hemos mencionado, los locus de STR pueden exhibir alelos muy variados. El hecho de que dos muestras de DNA tengan un alelo en común no es una prueba de que el DNA proviene de una misma persona u organismo. En una población lo que se hace es buscar la probabilidad de que las personas tengan un mismo perfil genético. Para esto podemos aplicar la regla de multiplicación de la probabilidad, la cual establece que la probabilidad de que ocurran dos eventos independientes simultáneamente es el producto de la multiplicación de sus probabilidades separadas. Cuando se trabaja con los STR en una población, el primer paso debe ser el análisis de las muestras de DNA. Los resultados de los análisis de los STR se analizan usando la estadística, la probabilidad y la genética de poblaciones. Se ha medido la frecuencia de cada alelo STR en los diferentes grupos de una población y en todo el mundo. Utilizando esa información se puede calcular la probabilidad de tener una combinación de alelos. Para el análisis estadístico de DNA, lo primero que tenemos que conocer es la frecuencia de los alelos que vamos a incluir en el análisis. La frecuencia de alelos varía por etnia y área geográfica. Hay bases de datos de frecuencia de los alelos para varias poblaciones, como para ejemplo para E.U. de caucásicos, afro-americanos, méjico-americanos, asiáticos y otros grupos. Los análisis estadísticos están basados en las frecuencias de los alelos conocidas. También existen bases de datos para animales, tales como: gatos, perros, caballos, etc. Ejemplo de caso: Aparece un cuerpo sin identificar. La descripción es similar a la de cuatro personas reportadas como desparecidas. El primer paso debe ser un análisis de DNA donde se pueda comparar la composición genética de las personas desparecidas con el DNA del cuerpo encontrado. ¿De dónde puede provenir el DNA de las personas desaparecidas? Cabellos en su cepillo de peinarse, células que se encuentran en el cepillo de dientes. El segundo paso debe ser la aplicación de la estadística para determinar si el DNA del cuerpo encontrado parea con alguno de las cuatro personas reportadas como desaparecidas. 24 Vilma Susana Martínez Supongamos que todas personas desaparecidas son caucásicas, de manera que debe de usarse la base datos de frecuencia de genes para ese grupo. En la siguiente tabla se compara el perfil genético de las cuatro personas desaparecidas con el cuerpo encontrado. LOCUS ALELO FRECUENCIA EN CAUCáSICO PRESENTE EN EL CUERPO ENCONTRADO PRESENTE EN EL CUERPO DESAPARECIDO #1 PRESENTE EN EL CUERPO DESAPARECIDO #2 PRESENTE EN EL CUERPO DESAPARECIDO #3 PRESENTE EN EL CUERPO DESAPARECIDO #4 6 0.09 X X X X STR 1 8 0.12 STR 1 9 0.22 X STR 2 0.14 X X X STR 2 10 0.03 X X STR 2 15 0.18 X X X STR 3 12 0.13 X X STR 3 14 0.11 X STR 3 17 7 0.24 X X STR 4 9 0.05 X X X STR 4 (Las frecuencias presentadas son hipotéticas, se podrían buscar frecuencias reales) Trabajemos los cómputos necesarios para la identificación. X X X X TABLA DE GENOTIPOS DEL CUERPO SIN IDENTIFICAR Y LAS PERSONAS DESAPARECIDAS LOCUS CUERPO ENCONTRADO DESAPARECIDO #1 GENOTIPOS DESAPARECIDO #2 DESAPARECIDO #3 DESAPARECIDO #4 STR 1 STR 2 STR 3 STR 4 Para el locus STR 1 Cuerpo encontrado = 6,6 Desaparecido #1 = 6,6 Desaparecido #2 = 6,6 Desaparecido #3 = 6,6 Desaparecido #4 = 6,6 homocigotos Busquemos la probabilidad utilizando la frecuencia de genes: Frecuencia alelo 6 = 0.09 Individuos son homocigotos (6,6). Quiere decir que la probabilidad de que un individuo sea homocigoto para ese alelo es: 0.09 x 0.09 = 0.01 (esta frecuencia es considerada baja). Taller de Genética 25 A pesar de la frecuencia baja que se presenta relacionada a STR 1, ¿ayuda ese locus a determinar la identidad del cuerpo? Explica. Establece genotipos y frecuencia para STR2. ¿Ayuda el locus STR2 a determinar la identidad del cuerpo? El encontrado hasta el momento tiene homología con el desaparecido # 2. Como los locus STR1 y STR2 se heredan de forman independiente puedes obtener la probabilidad de tener ambos genotipos (6,6-STR1 y 10,15-STR2) utilizando la regla de multiplicación (multiplicando la frecuencia o probabilidad de ellos). Frecuencia 6,6 ____________ x Frecuencia = 10,15 __________=________ Ahora puedes establecer la probabilidad de forma diferente. En una población de _________________ personas, cuántos se esperan con el mismo perfil genético para ambos alelos? Tomemos el locus STR3. Hay tres alelos: 12, 14 y 17. Describe el genotipo de: Cuerpo encontrado → _________ Desaparecido # 1 → _________ Desaparecido # 2 → _________ Desaparecido # 3 → _________ Desaparecido # 4 → _________ 26 Vilma Susana Martínez ¿Nos ayuda el locus STR3 a determinar la identidad del cuerpo? Explica. Nuevamente el desaparecido #2 tiene homología con el cuerpo encontrado. El genotipo del cuerpo y del desaparecido #2 es heterocigoto, por lo que las frecuencias hay que multiplicarlas por 2. (Probabilidad de los heterocigotos 2/4). La frecuencia genotípica de STR3 para el cuerpo encontrado y el desaparecido #2 es: 2 (_______x _______) = _______ Tomemos el locus STR 4. Hay dos alelos: 7 y 9 , el genotipo del: Cuerpo encontrado → _________ Desaparecido # 1 → _________ Desaparecido # 2 → _________ Desaparecido # 3 → _________ Desaparecido # 4 → _________ ¿Cuál es la probabilidad de un individuo homocigoto para el alelo 7? ¿Cuál es la probabilidad de un individuo homocigoto para el alelo 9? ¿Cuál es la probabilidad de un individuo heterocigoto 7,9? De acuerdo a las frecuencias genotípicas presentadas y a las comparaciones de alelos el cuerpo encontrado es del desaparecido # _____. Calcule la probabilidad de que un individuo tenga ese genotipo (incluya los cuatro locus). __________ x __________ x __________ x _________ = Frecuencia Frecuencia Frecuencia Frecuencia STR1 STR2 STR3 STR4 Taller de Genética 27 Establece la probabilidad en una forma diferente: En una población de _______________ ¿Cuántas personas se esperan que su genotipo (de los 4 locus) pareen? El FBI usa 13 locus de STR, lo que le permite al investigador mostrar que las probabilidades de dos muestras de DNA que comparten el mismo genotipo son extremadamente pequeñas. Cuando se genera el genotipo de los alelos de los 13 loci de STR para producir un perfil genético completo, la probabilidad de que alguien tenga la misma combinación es de 1 en 100 billones. La población del planeta Tierra es de aproximadamente 6 mil millones de personas, por esta razón es que basados en la probabilidad de 100 billones y la población global encontrada, los análisis de STR son una prueba determinante de la identificación del DNA humano. 28 Vilma Susana Martínez TALLER DE MAESTROS UTILIZANDO SECUENCIAS DE DNA PARA IDENTIFICAR LAS PERSONAS Y RESOLVER CASOS PROF. VILMA S. MARTINEZ UNIVERSIDAD INTERAMERICANA DE PUERTO RICO RECINTO DE SAN GERMAN Taller de Genética 29 TALLER: UTILIZANDO SECUENCIAS DE DNA PARA IDENTIFICAR LAS PERSONAS Y RESOLVER CASOS La información genética de un individuo está contenida en la molécula de DNA (molécula de ácido desoxiribonucleico). Es en esa molécula donde están contenidos los genes, los cuales en algunos casos tienen información para proteínas. Las porciones de DNA que tienen información para proteínas se llaman porciones codificadoras. No obstante hay otras porciones de DNA que son las no codificadoras y se le llama DNA inservible (iDNA). Los científicos han encontrado la manera de utilizar ese iDNa para identificar personas, basados en la premisa de que cada uno de los seres humanos tiene una colección única de iDNA. Aunque numerosas personas pueden compartir las mismas secuencias de iDNA en un sitio, es muy poco probable que compartan las mismas secuencias en diferentes lugares. Repasando un poco de genética sencilla Las características que presentamos van a ser determinadas por los genes. Conocemos que los genes pueden ser dominantes o recesivos, que ocupan posiciones específicas en los cromosomas (locus) y que dependiendo de la combinación de genes que presenten los individuos podemos clasificarlos como: Homocigotos Dominantes heterocigotos homocigotos recesivos AA Lóbulo de la oreja libre Aa Lóbulo de la oreja libre aa Lóbulo de la oreja adherido Según los genes dominantes y recesivos sirven para establecer el perfil genético de las personas, hay secuencias del iDNA que se conocen como STR (“simple tandem repeat”) que también sirven para establecer el perfil genético de las personas. Un STR es un locus o lugar en el DNA donde hay un segmento corto de nucleótidos repetidos (ejemplo CGA). El número de repeticiones puede variar entre personas. 30 Vilma Susana Martínez Ejemplo de alelos de STR con diversas repeticiones Alelo #1 – CGA CGA CGA CGA CGA CGA CGA CGA – este alelo tiene 8 repeticiones Alelo #2 – CGA CGA CGA CGA CGA CGA CGA CGA CGA CGA – este alelo tiene 10 repeticiones Alelo #3 – CGA CGA CGA CGA CGA CGA – este alelo tiene 6 repeticiones Alelo #4 – CGA CGA CGA CGA CGA CGA CGA CGA CGA CGA CGA CGA CGA CGA – este alelo tiene 14 repeticiones Esto es una secuencia de STR, digamos la STR1 que consta de 4 aelos diferentes (alelo #1, alelo #2, alelo #3 y alelo #4). Miles de locus de las secuencias STR se han identificado en el genoma de los seres humanos. Basados en los alelos de STR que presente un individuo también lo podemos clasificar como homocigoto o heterocigoto. Ejemplo: Si un individuo tiene dos alelos con 14 repeticiones, entonces ese individuo es homocigoto. (14,14) • alelo de STR con 14 repeticiones • alelo de STR con 14 repeticiones individuo homocigoto por que los alelos son iguales Cromosoma Cromosoma Pareja de cromosomas homólogos Ejemplo: Si un individuo tiene dos alelos, uno con 8 repeticiones y el otro con 14 repeticiones, entonces ese individuo es heterocigoto. (8,14) • • alelo de STR con 8 repeticiones alelo de STR con 14 repeticiones individuo heterocigoto por que los alelos son diferentes Cromosoma Cromosoma Pareja de cromosomas homó Los científicos utilizan la técnica de electroforesis para analizar los alelos de los individuos y acomodarlos por tamaño. Taller de Genética 31 Ejemplo de electroforesis para presentar los alelos 14, 14 de la persona #1 y los 8, 14 de la persona #2. Estándar (número de repeticiones) Persona #1 (14,14) Persona #2 (8,14) -------- -------- 18 ------16 ------14 ------12 ------10 ------8 ------- 6 ------- 4 ------- -------- Los alelos de STR que poseemos los humanos son heredados de nuestros padres. Por ejemplo en el caso de la persona #1 que vimos anteriormente, el cual era (14,14), uno de los alelos 14 fue heredado del padre y el otro alelo 14 fue heredado de la madre. Hagamos un cruce con los alelos arriba mencionados. Supongamos que la mujer es (6,8) y el hombre es (6,14), entonces sus hijos podrán ser: MUJER HOMBRE Alelo 6 Alelo 8 Alelo 6 Alelo 14 6,6 6,8 6,14 8,14 COMBINACIONES DE ALELOS EN LOS HIJOS NO PODRÍAN SALIR HIJOS 8,8 32 Vilma Susana Martínez En una electroforesis esto podría representarse de esta manera: Estándar (número de repeticiones) Padre (6,14) Madre (6,8) Hijo #1 (6,6) Hijo #2 (6,8) Hijo #3 (6,14) Hijo #4 (8,14) 18 ------16 ------14 ------- -------- -------- -------- 12 ------10 ------8 ------6 ------4 --------------- -------- --------------- -------- --------------- ------- Podemos utilizar los STR para identificar personas en una población. En este caso tenemos que trabajar con las frecuencias de alelos. Los pasos a seguir son: • Analizar las pruebas de DNA • Hacer un análisis estadístico de DNA utilizando las frecuencias de los alelos de STR en la población. Hay datos de frecuencia de alelos por razas, áreas geográficas, para animales, etc. En una población estos análisis se hacen para saber si las muestras de DNA que se están analizando provienen de una misma fuente. Vea un ejemplo en la siguiente página. Taller de Genética 33 Supongamos que la policía encuentra un cadáver en un área desolada. Es cadáver no ha podido ser identificado, sin embargo la descripción del mismo es similar a la de dos personas reportadas como desaparecidas por sus familiares. En este caso es pertinente: 1. Hacer una comparación de la composición genética de las personas desaparecidas con la del cadáver encontrado. 2. Buscar la probabilidad de que el DNA provenga de una misma fuente, buscando la probabilidad basada en la frecuencia de alelos de STR. Miremos la siguiente tabla para comparar la composición genética del cadáver y los desaparecidos. LOCUS Alelos Frecuencia Alelos en el Alelos en el Alelos en el STR cadaver desaparecido 1 desaparecido 2 STR1 9 0.15 X X X STR2 10 0.13 X X STR2 6 0.28 X STR3 12 0.06 X X X STR3 9 0.02 X X STR3 4 0.13 X STR4 17 0.14 X STR4 6 0.04 X X Tabla de genotipos del cadáver y los desaparecidos LOCUS Genotipo del Genotipo del Genotipo del STR cadaver desaparecido 1 desaparecido 2 STR1 9,9 9,9 9,9 10,10 10,10 6,6 STR2 STR2 STR3 12,9 12,9 12,12 STR3 STR3 6,6 6,6 17,17 STR4 STR4 Vemos que en composición genética el cadáver y el desaparecido #1 concuerdan, pero esto no es suficiente, hay que buscar la probabilidad de que esas dos individuos sean la misma persona. Trabajemos entonces la parte de análisis estadístico de DNA utilizando las frecuencias de los alelos de STR. Frecuencias de cadáver y desaparecido #1: (9,9) = 0.15 x 0.15 = 0.0225 (10,10) = 0.13 x 0.13 =0.169 (12,9) = 2(0.06 x 0.02) = 0.0024 (6,6) = 0.04 x 0.04 = 0.0016 Si multiplicamos las frecuencias = 0.0225 x 0.169 x 0.0024 x 0.0016 = .00000000146 ó 1.46 x 10-9. Esto quiere decir que en un billón de personas, se espera que solo 1.46 de ellas presenten ese genotipo. 34 Vilma Susana Martínez Instrucciones: Trabajarás en la solución de un caso. Déjate llevar de las noticias que se ofrecen al final del documento. Saca toda la información que puedas de ellas. Luego has un análisis del DNA de las personas y de los animales que se mencionan en las noticias (las muestras de DNA humano y de gato se te ofrecen a continuación) y contesta las preguntas que se te hacen al finalizar los análisis de DNA. Para hacer una comparación estadística entre los perfiles genéticos, utiliza las siguientes tablas de frecuencias alélicas. TABLA DE FRECUENCIAS ALÉLICAS PARA LOS STR EN GATOS DE PELO CORTO STR Alelo 1 7 5 0.32 0.21 15 7 3 0.16 0.09 0.13 0.25 0.12 0.17 0.05 0.40 0.39 0.11 0.51 0.60 0.14 0.00 0.40 11 10 0.33 0.15 0.23 0.41 0.00 0.17 0.16 0.22 0.14 0.40 4 8 14 0.00 0.34 0.29 0.27 0.13 0.21 0.36 0.35 0.07 0.16 5 11 9 0.12 0.14 0.11 0.28 0.19 0.22 0.14 0.39 0.28 0.12 2 3 Burmilla Tonkinese Egypcian Abyssinian Bengal Mau 0.50 0.11 0.30 0.15 0.32 0.13 0.00 0.20 TABLA DE FRECUENCIAS ALÉLICAS EN LOS HISPANOS DEL PAÍS DE ANTAL STR 1 Alelo 3 6 7 8 9 Frecuencia en hispanos 0.20 0.12 0.18 0.06 0.04 2 11 15 17 0.31 0.03 0.14 3 4 10 12 0.09 0.22 0.16 4 15 16 18 0.19 0.24 0.32 5 7 8 9 0.12 0.28 0.09 Taller de Genética 35 Instrucciones para trabajar las muestras en humanos: 1. Trabajarás los diferentes locus de STR con diferentes enzimas de restricción. Las enzimas que hipotéticamente utilizarás son las siguientes: LOCUS 1 Utilizarás la enzima Bsp 681 que reconoce la secuencia TGCCGA y corta entre la tercera base ( C ) y la cuarta base ( C ). El corte lo hará de la siguiente manera: TGC↓CGA En ese mismo locus utlizarás la enzima Hind III que reconoce la secuencia AAGCTT y corta entre la primera base (A) y la segunda base (A). El corte lo hará de la siguiente manera: A↓AGCTT Así que si tomamos como ejemplo la primera banda de DNA de Mrs. D, verás que sucede lo siguiente TCCTGC↓CGACGACGACGACGACGA↓AGCTTACC Verás que el segmento corto repetido de este STR es CGA. Si cuentas los segmentos CGA repetidos desde la primera secuencia subrayada hasta la última subrayada, verás que hay 6. Por lo tanto es un alelo de 6 repeticiones. Harás el mismo procedimiento de corte de enzimas con la segunda banda de DNA del locus 1. ¿Cuántas repeticiones CGA tiene esa banda? Ve copiando tus resultados en la tabla de alelos STR encontrados en los diferentes locus. LOCUS 2 Harás el mismo procedimiento que con el locus 1, pero esta vez utilizarás las siguientes enzimas: FspB1 - Secuencia que reconoce CTAG y corta entre C y T (C↓TAG) Paul - Reconoce GCGCGC y corta entre la primera y segunda base 36 Vilma Susana Martínez G↓CGCGC Marque con un lapiz el segmento corto repetido. Anote las repeticiones. LOCUS 3 Harás el mismo procedimiento que con el locus 1, pero esta vez utilizarás las siguientes enzimas: Pvul - Secuencia que reconoce CAGCTG corta entre G y C (CAG↓CTG) Sall - Reconoce GTCGAC y corta entre la primera y segunda base G↓TCGAC Marque con un lapiz el segmento corto repetido. Anote las repeticiones. LOCUS 4 Harás el mismo procedimiento que con el locus 1, pero esta vez utilizarás las siguientes enzimas: Rsal - Secuencia que reconoce GTAC y corta entre T y A (GT↓AC) Pfl2311 - Reconoce CGATCG y corta entre la primera y segunda base C↓GTACG Marque con un lapiz el segmento corto repetido. Anote las repeticiones. LOCUS 5 Harás el mismo procedimiento que con el locus 1, pero esta vez utilizarás las siguientes enzimas: Hae III - Secuencia que reconoce GGCC y corta entre G y C (GG↓CC) Xhol - Reconoce CTCGAC y corta entre la primera y segunda base C↓TCGAC Taller de Genética 37 Marque con un lapiz el segmento corto repetido. Anote las repeticiones. Recuerda anotar los datos de los alelos de STR en la tabla que tienes para esos fines. ¿Te atreves a colectar tus datos en una hoja de una simulación de una electroforesis? 38 Vilma Susana Martínez Taller de Genética 39 Muestras de DNA humano Mrs. D Locus 1 TCCTGCCGACGACGACGACGACGAAGCTTACC TCCTGCCGACGACGACGACGACGACGACGAAGCTTACC Locus 2 ACCCTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGCGCGCCCC ACCCTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGCGCGCCCC Locus 3 CAGCTGCTGCTGCTGTCGACCATC CAGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGTCGACCAT Locus 4 TTAGTACACACACACACACACACACACACACACACACGTACG TTAGTACACACACACACACACACACACACACACACACGTACG Locus 5 GCAGGCCCCCCCCCCCCCCTCGACAAT GCAGGCCCCCCCCCCCCCCTCGACAAT Arturo Solano Locus 1 TCCTGCCGACGACGACGACGACGAAGCTTACC TCCTGCCGACGACGACGACGACGAAGCTTACC 40 Vilma Susana Martínez Locus 2 ACCCTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGCGCGCCCC ACCCTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAG Locus 3 CAGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGTCGACCATC CAGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGTCGACCAT Locus 4 TTAGTACACACACACACACACACACACACACACACGTACG TTAGTACACACACACACACACACACACACACACACACGTACG Locus 5 GCAGGCCCCCCCCCCCCCCTCGACAAT GCAGGCCCCCCCCCCCCCCCCTCGACAAT Esposa de Arturo Solano (Camila) Locus 1 TCCTGCCGACGACGACGACGACGACGAAGCTTACC TCCTGCCGACGACGAAGCTTACC Locus 2 ACCCTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAG ACCCTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAG Locus 3 CAGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGTCGACCATC CAGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGTCGACCATC Locus 4 Taller de Genética 41 TTAGTACACACACACACACACACACACACACACACGTACG TTAGTACACACACACACACACACACACACACACACGTACG Locus 5 GCAGGCCCCCCCCCCCCCCCCTCGACAAT GCAGGCCCCCCCCCCCCCCCCCCTCGACAAT Hijo de Arturo Solano (Luis Arturo) Locus 1 TCCTGCCGACGACGACGACGACGAAGCTTACC TCCTGCCGACGACGACGACGACGACGAAGCTTACC Locus 2 ACCCTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGCGCGCCCC ACCCTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAG Locus 3 CAGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGTCGACCATC CAGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGTCGACCAT Locus 4 TTAGTACACACACACACACACACACACACACACACGTACG TTAGTACACACACACACACACACACACACACACACGTACG Locus 5 GCAGGCCCCCCCCCCCCCCTCGACAAT GCAGGCCCCCCCCCCCCCCCCCCTCGACAAT 42 Vilma Susana Martínez Hija de Arturo Solano (Amanda) Locus 1 TCCTGCCGACGACGACGACGACGAAGCTTACC TCCTGCCGACGACGACGACGACGACGACGAAGCTTACC Locus 2 ACCCTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGCGCGCCCC ACCCTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGCGCGCCCC Locus 3 CAGCTGCTGCTGCTGTCGACCATC CAGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGTCGACCAT Locus 4 TTAGTACACACACACACACACACACACACACACACACGTACG TTAGTACACACACACACACACACACACACACACACACGTACG Locus 5 GCAGGCCCCCCCCCCCCCCTCGACAAT GCAGGCCCCCCCCCCCCCCTCGACAAT Linda Asturias Locus 1 TCCTGCCGACGACGACGACGACGACGAAGCTTACC TCCTGCCGACGACGACGACGACGACGACGAAGCTTACC Taller de Genética 43 Locus 2 ACCCTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGCGCGCCCC ACCCTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGCGCGCCCC Locus 3 CAGCTGCTGCTGCTGTCGACCATC CAGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGTCGACCATC Locus 4 TTAGTACACACACACACACACACACACACACACACACGTACG TTAGTACACACACACACACACACACACACACACACACGTACG Locus 5 GCAGGCCCCCCCCCCCCCCTCGACAAT GCAGGCCCCCCCCCCCCCCCCCCTCGACAAT Yordana Locus 1 TCCTGCCGACGACGACGACGACGAAGCTTACC TCCTGCCGACGACGACGACGACGACGACGAAGCTTACC Locus 2 ACCCTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGCGCGCCCC ACCCTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGCGCGCCCC Locus 3 CAGCTGCTGCTGCTGTCGACCATC CAGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGTCGACCAT Locus 4 44 Vilma Susana Martínez TTAGTACACACACACACACACACACACACACACACACGTACG TTAGTACACACACACACACACACACACACACACACACGTACG Locus 5 GCAGGCCCCCCCCCCCCCCTCGACAAT GCAGGCCCCCCCCCCCCCCTCGACAAT Carmel Locus 1 TCCTGCCGACGACGACGACGACGACGACGACGAAGCTTACC TCCTGCCGACGACGACGACGACGACGACGAAGCTTACC Locus 2 ACCCTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAG ACCCTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAG Locus 3 CAGCTGCTGCTGCTGTCGACCATC CAGCTGCTGCTGCTGTCGACCATC Locus 4 TTAGTACACACACACACACACACACACACACACACGTACG TTAGTACACACACACACACACACACACACACACACACACACGTACG Locus 5 GCAGGCCCCCCCCCCCCCCCCTCGACAAT GCAGGCCCCCCCCCCCCCCCCTCGACAAT Muestra de vaso desechable Taller de Genética 45 Locus 1 TCCTGCCGACGACGACGACGACGAAGCTTACC TCCTGCCGACGACGACGACGACGACGACGAAGCTTACC Locus 2 ACCCTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGCGCGCCCC ACCCTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGCGCGCCCC Locus 3 CAGCTGCTGCTGCTGTCGACCATC CAGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGTCGACCAT Locus 4 TTAGTACACACACACACACACACACACACACACACACGTACG TTAGTACACACACACACACACACACACACACACACACGTACG Locus 5 GCAGGCCCCCCCCCCCCCCTCGACAAT GCAGGCCCCCCCCCCCCCCTCGACAAT Muestra de cigarillo Locus 1 TCCTGCCGACGACGACGACGACGAAGCTTACC TCCTGCCGACGACGACGACGACGACGACGAAGCTTACC Locus 2 ACCCTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGCGCGCCCC ACCCTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGCGCGCCCC Locus 3 46 Vilma Susana Martínez CAGCTGCTGCTGCTGTCGACCATC CAGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGTCGACCAT Locus 4 TTAGTACACACACACACACACACACACACACACACACGTACG TTAGTACACACACACACACACACACACACACACACACGTACG Locus 5 GCAGGCCCCCCCCCCCCCCTCGACAAT GCAGGCCCCCCCCCCCCCCTCGACAAT Saliva en pega sobre de carta Locus 1 TCCTGCCGACGACGACGACGACGACGACGACGAAGCTTACC TCCTGCCGACGACGACGACGACGACGACGAAGCTTACC Locus 2 ACCCTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAG ACCCTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAG Locus 3 CAGCTGCTGCTGCTGTCGACCATC CAGCTGCTGCTGCTGTCGACCATC Locus 4 TTAGTACACACACACACACACACACACACACACACGTACG TTAGTACACACACACACACACACACACACACACACACACACGTACG Locus 5 Taller de Genética 47 GCAGGCCCCCCCCCCCCCCCCTCGACAAT GCAGGCCCCCCCCCCCCCCCCTCGACAAT Saliva en pega de sello Locus 1 TCCTGCCGACGACGACGACGACGACGACGACGAAGCTTACC TCCTGCCGACGACGACGACGACGACGACGAAGCTTACC Locus 2 ACCCTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAG ACCCTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAG Locus 3 CAGCTGCTGCTGCTGTCGACCATC CAGCTGCTGCTGCTGTCGACCATC Locus 4 TTAGTACACACACACACACACACACACACACACACGTACG TTAGTACACACACACACACACACACACACACACACACACACGTACG Locus 5 GCAGGCCCCCCCCCCCCCCCCTCGACAAT GCAGGCCCCCCCCCCCCCCCCTCGACAAT Tejido en uñas de Mrs. D Locus 1 48 Vilma Susana Martínez TCCTGCCGACGACGACGACGACGAAGCTTACC TCCTGCCGACGACGACGACGACGACGACGAAGCTTACC Locus 2 ACCCTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGCGCGCCCC ACCCTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGTAGCGCGCCCC Locus 3 CAGCTGCTGCTGCTGTCGACCATC CAGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGTCGACCAT Locus 4 TTAGTACACACACACACACACACACACACACACACACGTACG TTAGTACACACACACACACACACACACACACACACACGTACG Locus 5 GCAGGCCCCCCCCCCCCCCTCGACAAT GCAGGCCCCCCCCCCCCCCTCGACAAT Alelos de STR encontrados en los diferentes locus Muestras analizadas Mrs. D Locus 1 Locus 2 Locus 3 Locus 4 Locus 5 Arturo Solano Camila Luis Arturo Amanda Linda Asturias Taller de Genética 49 Yordana Carmel Muestra saliva sobre Muestra saliva sello Muestra vaso desechable Muestra cigarillo Muestra tejido de uñas Contesta las siguientes preguntas: 1. ¿Quién fue el agresor(a)? 2. ¿Quién realmente es Mrs. D? 3. ¿Quién fue la persona que envió los mensajes anónimos? 4. ¿Qué observas si comparas los alelos de Yordana con los de Amanda? 5. Si haces un análisis estadístico de DNA ¿cuántas personas en una población se espera que compartan el mismo genotipo? Usa la tabla de frecuencia de alelos preseantada anteriormente. 6. ¿Qué tu crees que pudo haber pasado en este caso? 50 Vilma Susana Martínez Instrucciones para trabajar las muestras de los pelos de gato: 1. Trabajarás los diferentes locus de STR con diferentes enzimas de restricción. Las enzimas que hipotéticamente utilizarás son las siguientes: LOCUS 1 Utilizarás la enzima BspTI que reconoce la secuencia CTTAAG y corta entre la primera base ( C ) y la segunda base ( T ). El corte lo hará de la siguiente manera: C↓TTAAG En ese mismo locus utlizarás la enzima Bsp1201 que reconoce la secuencia GGGCCC y corta entre la primera base (G) y la segunda base (G). El corte lo harás de la siguiente manera: G↓GGCCC Ve copiando tus resultados en la tabla de alelos STR encontrados en los diferentes locus. LOCUS 2 Harás el mismo procedimiento que con el locus 1, pero esta vez utilizarás las siguientes enzimas: Cfr9II - Secuencia que reconoce AGCT y corta entre G y C (AG↓CT) BspMI- Reconoce TCCGGA y corta entre la primera y segunda base T↓CCGGA Marque con un lapiz el segmento corto repetido. Anote las repeticiones. LOCUS 3 Harás el mismo procedimiento que con el locus 1, pero esta vez utilizarás las siguientes enzimas: Alul - Secuencia que reconoce AGCT corta entre G y C (AG↓CT) Taller de Genética 51 BCII - Reconoce TGATCA y corta entre la primera y segunda base T↓GATCA Marque con un lapiz el segmento corto repetido. Anote las repeticiones. LOCUS 4 Harás el mismo procedimiento que con el locus 1, pero esta vez utilizarás las siguientes enzimas: Bal - Secuencia que reconoce TGGCCA y corta entre G y C (TGG↓CCA) Miul - Reconoce ACGCGT y corta entre la primera y segunda base A↓CGCGT Marque con un lapiz el segmento corto repetido. Anote las repeticiones. LOCUS 5 Harás el mismo procedimiento que con el locus 1, pero esta vez utilizarás las siguientes enzimas: Rsal - Secuencia que reconoce GTAC y corta entre T y A (GT↓AC) HpaII - Reconoce ACCGG y corta entre la segunda y tercera base AC↓CGG Marque con un lapiz el segmento corto repetido. Anote las repeticiones. Recuerda anotar los datos de los alelos de STR en la tabla que tienes para esos fines. 52 Vilma Susana Martínez Muestras de DNA de gatos Muestras de DNA de pelos de gato recogidos en la escena de la agresión Locus 1 GGAACTTAAGTTAAGTTAAGTTAAGTTAAGGGCCCAAT GGAACTTAAGTTAAGTTAAGTTAAGTTAAGGGCCCAAT Locus 2 AGCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCCGGACCT AGCTCTCTCTCTCTCTCCGGACCT Locus 3 TTTAGCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTGATCACCCT TTTAGCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTGATCACCCT Locus 4 CCAGTGGCCACCACCACCACCACCACCACCACGCGTTTTAC CCAGTGGCCACCACCACCACCACCACCACCACGCGTTTTAC Locus 5 CCCCGTACACACACACACACACACCGGTTTAT CCCCGTACACACACACACACACACCGGTTTAT Taller de Genética 53 Muestras de DNA – gato de Amanda Locus 1 GGAACTTAAGTTAAGTTAAGTTAAGTTAAGGGCCCAAT GGAACTTAAGTTAAGTTAAGTTAAGTTAAGGGCCCAAT Locus 2 AGCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCCGGACCT AGCTCTCTCTCTCTCTCCGGACCT Locus 3 TTTAGCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTGATCACCCT TTTAGCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTGATCACCCT Locus 4 CCAGTGGCCACCACCACCACCACCACCACCACGCGTTTTAC CCAGTGGCCACCACCACCACCACCACCACCACGCGTTTTAC Locus 5 CCCCGTACACACACACACACACACCGGTTTAT CCCCGTACACACACACACACACACCGGTTTAT 54 Vilma Susana Martínez Muestras de DNA de pelos de gato de Luis Arturo Locus 1 GGAACTTAAGTTAAGTTAAGTTAAGTTAAGTTAAGTTAAGGGCCCAAT GGAACTTAAGTTAAGTTAAGTTAAGTTAAGTTAAGTTAAGGGCCCAAT Locus 2 AGCTCTCTCCGGACCT AGCTCTCTCCGGACCT Locus 3 TTTAGCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTGATCACCCT TTTAGCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTGATCACCCT Locus 4 CCAGTGGCCACCACCACCACCACCACCACCACCACCACCACCACCACCACGCGTTTTAC CCAGTGGCCACCACCACCACCACCACCACCACCACCACCACCACCACCACGCGTTTTAC Locus 5 CCCCGTACACACACACACACACACACACCGGTTTAT CCCCGTACACACACACACACACACCGGTTTAT Taller de Genética 55 Alelos de STR encontrados en los gatos Muestras analizadas Pelos de gato escena Locus 1 Locus 2 Locus 3 Locus 4 Locus 5 Gato de Amanda Gato de Luis Arturo 1. ¿A qué raza de gatos pertenecían los pelos de gato de la escena? 2. Si haces un análisis estadistico de DNA ¿cuántos gatos en una población pueden mostrar el mismo genotipo que presenta el de la escena de la agresión? Usa la tabla de frecuencia de gatos que se ofrece en una de las páginas anteriores. 56 Vilma Susana Martínez PERIÓDICO EL IMPERIAL Aparece mujer golpeada en estacionamiento del Centro Comercial aumentando Amán Los habitantes de la provincia de Pompóm se mostraron muy preocupados pues la policía reportó el hallazgo del cuerpo de una mujer en el estacionamiento del Centro Comercial Amán, el cual está ubicado al norte de esa provincia. La mujer presentaba un fuerte golpe en la cabeza, el cual posiblemente fue ocasionado al caer sobre el muro de uno de los estacionamientos del centro comercial. También presenta hematomas en la cara, por lo que está muy hinchada. También se encontraron algunos pelos de gato en el lugar de los hechos, que por las características que presentaban, la policía determinó que pertenecen a un gato de pelo corto. El cuerpo de la mujer fue encontrado en la parte posterior del centro comercial, el cual tiene alumbrado, por lo que se estima que la agresión ocurrió en horas en que el centro comercial estaba cerrado pues no se han encontrado testigos de la escena. Mrs. D vestía ropa y usaba prendas de gran valor. Se descarta el móvil de robo pues la mujer, que aún no ha sido identificada, tenía en su cartera dinero en efectivo y aún tenía puestas todas sus joyas, aunque no se encontró ningún documento o tarjeta que la pudiese identificar (por lo que se le ha llamado Mrs. D, por desconocida). En su cartera también fue encontrado un boleto de transporte de la provincia de Iguamá, otra de las provincias del país de Antal. La provincia de Iguamá queda a gran distancia de Pompóm. Luego del hallazgo la mujer fue transportada al Hospital La Fe, donde, aunque en estado de coma, aún sigue viva. De las uñas de la mujer se extrajo algún tejido el cual puede pertenecer a su agresor. Por los rasgos de Mrs. D se le identificó como hispana, se calcula que puede tener algunos 24 años y mide 5’7” de estatura. Cerca de su cuerpo se encontró un vaso desechable de café, un cabo de un cigarillo con lápiz labial y un periódico con una foto de Arturo Solano (candidato a la alcaldía de Pompóm) y su familia en primera plana. Taller de Genética La policía reporta que está investigando todas las pistas encontradas en el lugar de los hechos para tratar de identificar al agresor. Arturo Solano sigue su ventaja política Arturo Solano se vislumbra como el ganador de la alcaldía de Pompóm. Solano, que estudió en la prestigiosa Escuela de Derecho de Iguamá, ha prometido trabajar arduamente por el bienestar de los ciudadanos de Pompóm. En la foto que Solano enseñó a los periodistas aparecen su esposa Camila, su hija Amanda de 25 años y su hijo Luis Arturo de 22. También aparecen los gatos de la familia, mascotas de diferentes razas con las cuales dicen ser muy afines. Amanda es dueña de una gata de la raza tonkinese y Luis Arturo de un gato de raza abyssinian. Solano dice estar muy agradecido a su familia por todo el apoyo brindado durante su propaganda política. Los periodistas preguntaron a Solano sobre unas supuestas cartas anónimas que ha estado recibiendo en las últimas semanas, a lo que él contestó que no prestaba ninguna importancia, pues entendía que podría ser una táctica de alguno de sus adversarios políticos para tratar de distraerlo, sobre todo en estos días cercanos a las elecciones. No obstante indica que los sobres donde fueron recibidos los mensajes anónimos fueron referidos a la policía para el análisis de saliva correspondiente en la pega del sobre y el sello. 57 PERIÓDICO EL IMPERIAL Desaparece misteriosamente hija de Linda Asturias Linda Asturias, la exitosa mujer de negocios y dueña de la cadena de hoteles ESPLENDOR está muy atribulada pues su hija mayor de 25 años de edad, Yordana, se encuentra desaparecida desde hace unos días. La última vez que la Sra. Asturias habló con Yordana, ésta le expresó su deseabilidad de vacacionar en un centro turístico del área norte de Pompóm. Yordana actualmente cursaba estudios de leyes, carrera a la que ha estado muy ligada, pues su madre posee un título de abogada, el cual fue obtenido en los años 70 en la Escuela de Derecho de Iguamá, provincia donde todavía residen la Sra. Asturias y su familia. La Sra. Asturias describió a su hija como una muchacha sana, sin vicios, pues nunca había ingerido alcohol ni utilizado cigarillos, vegetariana , pues no consumía ni carnes ni café. Linda Asturias ofreció a los periodistas una foto de su hija Yordana y su novio Carmel, quien alega no haberla visto desde hace días. La atribulada madre pide a través de este medio que si alguien ha visto a una persona como la de la foto, lo indique a las autoridades inmediatamente. 58 Vilma Susana Martínez Bibliografía Griffiths, Anthony J.F. et.al. (2002). Genética (7ma ed.). España: Mc Graw Hill. Klug, William S. and Michael R. Cummings (2003). Concepts of Genetics (7th ed.). New Jersey: Pearson Education, Inc. Dickey Jean (2003). Laboratory Investigations (2nd ed.). San Francisco: Benjamín Cimmings Taller de Genética 59