Download 5.4. Virginia de Lucas. EGFR y ALK carcinoma pulmón no microcítico

RendimientodelestudiodemutacionesdeEGFRy
reordenamientosdeALK,sobrematerialcitológico
conpacientesCPCNP(CarcinomadePulmónde
CélulaNoPequeña)
VirginiadeLucas,NuriaPérez,AlmudenaLópez,IvánPrieto,Jennifer
Plaza,CarmenLauraAúz,NereaCarvajal, JoséIgnacioCornejo,Franklin
Idrovo,Alicia Cazorla
FUNDACIÓNJIMÉNEZDÍAZ- Quirónsalud
SanSebastián,16deAbrilde2016
Guión
1. Introducción.
2. RecomendacionesdelasguíasclínicasSEAP-SEOM.
3. RendimientodelEstudiodeBiomarcadoresenmaterial
citológico.
4. MaterialyMétodos.
5. Resultados.
6. Conclusiones
2
1.Introducción
ElCáncerdePulmónenCifras
§ El cáncer de pulmón fue en 2015 el tercer
tumor más frecuente diagnosticado en
España (~13%).
§ Es la causa principal de muerte por cáncer
en España (29% de las muertes por cáncer
en hombres y mujeres)
§ Aproximadamente el 80%-90% se da en
fumadores o personas que hayan dejado
de fumar recientemente.
§ Los últimos datos de 2015, recogen una
incidencia de 222,000 casos de cáncer.
Actualmente, se calcula que en 2020 se
diagnosticarán ~250,000 casos de cáncer
en España, un incremento del 12% en la
incidencia.
LascifrasdelcáncerenEspaña2016- SEOM
3
1.Introducción
Alteraciones
MolecularesenNSCLC
Predictoresdelaeficaciaa
determinadosfármacosenel
contextodeensayosclínicos
Li,Tetal.JClinOncol2013
4
1.Introducción
EGFR
§ Mutaciones de los exones 18-21 del dominio tirosina quinasa de EGFR.
§ Entre el 10-16% de los pacientes con CPCNP presentan mutaciones en EGFR
§ Se asocian a beneficio con el tratamiento con inhibidores de tirosina-quinasa de EGFR
§ 85-90%delecionesenel
exón19(rodeandolos
codones746-750)y
mutacionespuntuales
enelexón21(L858R).
§ Lasmutaciones
puntualesenlosexones
18y20(principalmente
T790M)sumanentreel
2-5%.
§ Las inserciones en el
exón 20 son el 5-10% del
total.
Chong,CR&Janne,PA.NatMedicine2013
5
1.Introducción
ALK
§ Gen situado en el cromosoma 2
§ Receptor tirosina-quinasa à interviene en
la transducción de señales al núcleo
Sureordenamientoprovoca:
Activaciónconstitutivadelaactividad
tirosinquinasa
§ El 2-7% de los pacientes con CPCNP
presentan reordenamiento de ALK
§ Más frecuente en mujeres y pacientes
con escasa o nula historia de tabaquismo.
§ Inhibidores de la actividad tirosinaquinasa de ALK demuestran un beneficio
en SLP
LosreordenamientosdeALKnosuelencoexistirconlasmutacionesdeEGFR
AtlasdelaIASLCdePruebasdeALKenCáncerdePulmón
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1.Introducción
§ Mínimo de50células tumoralesparallevaracabolatécnicaFISHALK
§ Existen alteraciones en el nº de copias que no parecen relacionadas con la buena
respuesta al fármaco.
AtlasdelaIASLCdePruebasdeALKenCáncerdePulmón
7
ß ALKtraslocado
ALKNotraslocadoà
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Guión
1. Introducción.
2. RecomendacionesdelasguíasclínicasSEAP-SEOM.
3. RendimientodelEstudiodeBiomarcadoresenmaterial
citológico.
4. MaterialyMétodos.
5. Resultados.
6. Conclusiones
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2.RecomendacionesdelasguíasSEAP-SEOM
Recomendaciones delasguíasSEAP-SEOMenCPCNPpara
citologías
§ Optimizar el procesamiento de
las citologías para poder obtener
la
mayor
cantidad
de
información posible.
MORFOLOGÍA
§ Se recomienda el uso de
citologías en fase líquida ya que
evita artefactos y proporciona
una gran calidad en el estudio
de la morfología y fenotipo, así
como una buena calidad en la
obtención de ADN o ARN a
partir del material celular
excedente
INMUNOCITOQUÍMICA
MOLECULAR
10
PublicadoenRev Esp Patol.2012;45(1):14-28.
2.RecomendacionesdelasguíasSEAP-SEOM
Recomendaciones paraladeterminacióndeBiomarcadoresen
CPCNPSEAP-SEOM
§ Determinar la mutación del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR)
en pacientes con CPCNP avanzado si presentan un carcinoma no escamoso y en
histología escamosa, sólo si es no fumador.
§ El estudio de reordenamientos de ALK (gen de la quinasa del linfoma anaplásico)
estaría indicado en pacientes con CPCNP avanzado:
§ No Escamosos: siempre
§ Escamosos: sólo si es no fumador
IndicacionesdeEGFR=IndicacionesdeALK
“Para decidir el tratamiento de los pacientes con CPCNP y enfermedad metastásica, es
necesario conocer el subtipo histológico y en la mayoría de casos, el resultado del
análisis de biomarcadores”
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PublicadoenRev Esp Patol.2012;45(1):14-28.
2.RecomendacionesdelasguíasSEAP-SEOM:
AlgoritmodiagnósticoenCPCNPavanzado
CPCNPAvanzado
Escamoso
No-escamoso
No-fumador
Fumador
MutaciónEGFR
Traslocación
ALK
CPCNP:CarcinomadePulmóndeCélulanopequeña,EGFR:Receptordelfactordecrecimientoepidérmico,ALK:QuinasadelLinfoma
Anaplásico
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Guión
1. Introducción.
2. RecomendacionesdelasguíasclínicasSEAP-SEOM.
3. RendimientodelEstudiodeBiomarcadoresenmaterial
citológico.
4. MaterialyMétodos.
5. Resultados.
6. Conclusiones
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4. Rendimientodelestudiodebiomarcadoresenmaterial
citológico
Inconveniente
§ Muestra tumoral escasa
§ Diagnóstico anatomopatológico
§ Preservación
de
material
posteriores estudios
para
Lacitologíaesválidasiempre
quetengasuficientecantidad
decélulas
Requisitos
§ 30%decelularidad tumoralpara
estudios desecuenciación directa.
§ 5%sirealizamostécnicasbasadas
enPCRatiemporeal.
§ Mínimo de50células tumorales
parahibridación insitu
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4. Rendimientodelestudiodebiomarcadoresenmaterial
citológico
BENEFICIOS
ParaFISH:
§ Encomparaciónconlassecciones histológicas, losnúcleosenextensiones
citológicas estáníntegros.
§ Podremosseleccionar laextensión citológicaóptimaentretodaslas
extensiones previamente teñidas.
ParaPCR:
§ LacalidaddelADNenmuestrascitológicas fijadasenbasealcohólicaosecadas
alaire,esmejorequelaquehaydespués delafijaciónenformaldehído.
Lacitologíaesunmétodopocoinvasivopararecogermaterialtumoralparaelanálisisde
biomarcadoresenlaenfermedadenrecaídaometastásica
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Guión
1. Introducción
2. RecomendacionesdelasguíasclínicasSEAP-SEOM.
3. RendimientodelEstudiodeBiomarcadoresenmaterial
citológico.
4. MaterialyMétodos.
5. Resultados.
6. Conclusiones
15
4.MaterialyMétodos
MaterialyMétodos
§ 338 citologías (Desde2011– Actualidad) depacientes conCPCNP
§ 68EBUS-PAAF
§ 4PAAFtranstorácica
§ 34Cepillado bronquial
§ 102Lavadobronquial
§ 81Lavadobroncoalveolar
§ 23Líquidopleural
§ 26Líquidoascítico
§ Determinación deEGFRporqPCRmediante CobasZ480Roche
§ DNAgenómicoobtenido con:HighPurePCRTemplate PreparationKit(Roche)
§ Determinación deALKporFISHconsondaVysisALKBreakApartFishProbe(Abbott
Molecular) - LaúnicapruebaaprobadaporlaFDAestadounidense,acompañandoalfármacoCrizotinib.
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Guión
1. Introducción.
2. RecomendacionesdelasguíasclínicasSEAP-SEOM.
3. RendimientodelEstudiodeBiomarcadoresenmaterial
citológico.
4. MaterialyMétodos.
5. Resultados.
6. Conclusiones
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6.Resultados
Resultados
Delas338citologías (2011-2016):
§ 332evaluables(98.2%)
§ 6noevaluables porescasarepresentación de
tumor/deficiente preservación delDNA(1.8%)
Delas100citologías (2014-2016):
§ 81evaluables (81%)
§ 19noevaluables porescasa
representación detumor/deficiente
preservación delDNA(19%)
*Ladoblemutaciónfue:L858RyT790M
8,8%de
resultados
positivos
4,9%de
resultados
positivos
NoseidentificaronalteracionesdeEGFRyALKcoincidentes
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6.Resultados
Resultados
FACTORES
N
EGFRN=332
EGFR+
EGFR-
%
ALKN=81
ALK+
ALK-
N
338
100
N
29
%
100,0%
N
303
%
100,0%
N
4
%
100,0%
N
77
%
100,0%
Tipo
Histológico
Adenocarcinoma
Otrostipos
histológicos
226
67%
20
69,0%
214
70,6%
3
75,0%
65
84,4%
112
33%
9
31,0%
89
29,4%
1
25,0%
12
15,6%
Sexo
Hombre
Mujer
206
132
61%
39%
16
13
55,2%
44,8%
169
134
55,8%
44,2%
3
1
75,0%
25,0%
57
20
74,0%
26,0%
Hábito
tabáquico
Fumador
ExFumador
Nofumador
135
98
105
40%
29%
31%
8
6
15
27,6%
20,7%
51,7%
125
79
99
41,2%
26,0%
32,7%
1
1
2
25,0%
25,0%
50,0%
7
15
55
9,1%
19,5%
71,4%
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Guión
1. Introducción.
2. RecomendacionesdelasguíasclínicasSEAP-SEOM.
3. RendimientodelEstudiodeBiomarcadoresenmaterial
citológico.
4. MaterialyMétodos.
5. Resultados.
6. Conclusiones
20
7.Conclusiones
Conclusiones
§ El material citológico es altamente informativo (98,2% para EGFR y 81% para
ALK) para el estudio de biomarcadores en cáncer de pulmón, siendo una
alternativa al tejido, especialmente en tumores de baja accesibilidad.
§ El tipo histológico y el hábito tabáquico no deben descartar la realización del
estudio de EGFR y ALK, ya que se identifican alteraciones incluso en fenotipos
clínicos no favorables.
§ Serecomiendan laspruebas moleculares enpacientes conCPCNPenestadío
temprano enlaspiezasquirúrgicas conelfindeproporcionar información sise
produjese recaídaounavance enlaenfermedad.
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Muchasgracias
VirginiadeLucasLópez
HospitalUniversitarioFundaciónJiménezDíaz
[email protected]