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REBIOL. Vol. 28, N° 2: julio-diciembre, 2008
Organo oficial de la Facultad de Ciencias Biológicas. Universidad Nacional de Trujillo. Trujillo-Perú
ARTÍCULO/ARTICLE
Ectopatógenos bacterianos aislados de
pimelódidos ornamentales procedentes de la
Cuenca del río Nanay, Iquitos-Perú
Ectopathogen bacteria isolated from ornamental fishes of
Pimelodidae family captured in Nanay river basin, Iquitos-Peru.
Álvaro Tresierra-Ayala*, Linda Flores V, Carlos Chuquipiondo G, Mildred
García D, A María, Teresa Mori del A y Julia Bardales G.
Departamento Académico de Microbiología y Parasitología. Universidad Nacional de la Amazonía
Peruana. Iquitos-Perú. *Autor de correspondencia: Dirección Universitaria de Investigación. Universidad
Científica del Perú. Av. Quiñones Km. 2,5, Iquitos-Perú, [email protected]
RESUMEN
La exportación de peces ornamentales es una de las actividades económicas más importantes para la
población de la ciudad de Iquitos; sin embargo, estos organismos constantemente se ven expuestos a
contraer infecciones por agentes microbianos, los cuales podrían ocasionarles la muerte. El propósito del
presente estudio fue identificar las bacterias ectopatógenas a partir de lesiones externas de peces
ornamentales de la familia Pimelodidae procedentes de la cuenca del río Nanay (Iquitos-Perú).
Empleando técnicas convencionales, a partir de 100 especímenes, se aislaron 80 cepas: Aeromonas
veronii (23), Pseudomonas fluorescens (19), Aeromonas sobria (15), Azomonas agilis (7), Aquaspirillum fasciculus (6),
Aeromonas sp. (5), Pseudomonas aeruginosa (3) y Plesiomonas sp. (2). La mayoría de ellas fueron sensibles al
cloramfenicol y las tetraciclinas, y fueron capaces de matar a peces sanos infectados experimentalmente.
Palabras clave: Bacterias patógenas, peces, Pimelodidae, río Nanay.
ABSTRACT
The exportation of ornamental fishes is one of the most important economic activities for the
population in Iquitos city; however, these organisms frequently are exposed to be infected for
microbiologic agents which, in some opportunities, could produce them the death. The purpose of this
study was identify the ectopathogen bacteria from external lesions of ornamental fishes of Pimelodidae
family captured in Nanay river basin (Iquitos-Peru). Using conventional techniques we isolated and
identified 80 strains from 100 individuals: Aeromonas veronii (23), Pseudomonas fluorescens (19), Aeromonas
sobria (15), Azomonas agilis (7), Aquaspirillum fasciculus (6), Aeromonas sp. (5), Pseudomonas aeruginosa (3) y
Plesiomonas sp. (2). Most of them were sensible to chloramphenicol and tetracyclines, and they were able
to kill healthy fish infected experimentally.
Key words: Ectopathogen bacteria, fishes, Pimelodidae, Nanay river.
INTRODUCCIÓN
Uno de los principales componentes biológicos de los ecosistemas amazónicos lo constituyen
los recursos ícticos, de los cuales, muchos de ellos, dadas sus características, son consideradas
como especies ornamentales1. Las estadísticas internacionales sobre el comercio de pescado vivo
incluyen también el comercio de peces ornamentales, el cual es elevado en términos de valor
pero insignificante en lo que respecta a la cantidad comerciada2.
En la amazonia peruana, la actividad de extracción para la exportación de peces
ornamentales es muy intensa y constituye una fuente de generación de trabajo y captación de
recursos económicos para la población3. Las personas involucradas en esta actividad solo se
preocupan por extraer, exportar y obtener ingresos económicos; sin embargo, no toman en
consideración algunos aspectos que podrían contribuir a obtener mejores logros, tal es el caso
del empleo de adecuadas condiciones sanitarias así como el diagnóstico y tratamiento de
enfermedades ocasionadas por agentes microbianos, entre otros, ya que la pérdida de estos
recursos, debido a la mortalidad por enfermedades y otras causas referidas al mal manejo,
representa un alto porcentaje de la cantidad exportada4,5.
El origen de las enfermedades en los peces es muy variado, pero aquellas que poseen mayor
importancia son las enfermedades de tipo infeccioso, debido a su fácil transmisión a través del
agua y entre las que destacan las de etiología bacteriana6,7.
Estudios previos han determinado que la cuenca del río Nanay constituye una de la fuentes
más importante en términos de diversidad de peces ornamentales3, entre los que destacan
miembros de la familia Pimelodidae, los cuales frecuentemente son afectados por
microorganismos ecto y endopatógenos, entre los que destacan las bacterias; sin embargo,
existen escasos estudios relacionados con su aislamiento, identificación y caracterización, de
allí que el desarrollo de un trabajo que proporcione información referente a estos seres
microbianos, constituiría un aporte importante tanto para la ciencia como para las personas
involucradas en el negocio de los peces ornamentales.
MATERIAL Y MÉTODOS
Se analizaron un total de 100 peces ornamentales de la familia Pimelodidae, que poseían
lesiones externas a nivel de piel, branquias y aletas y fueron capturados en la cuenca del río
Nanay (Iquitos-Perú). Los especimenes, preferentemente vivos, fueron transportados
cuidadosamente en bolsas de polietileno de primer uso, evitando manipulaciones inadecuadas, a
fin de ser analizados en el laboratorio.
Aislamiento e Identificación de Bacterias Ectopatógenas:
Dependiendo de la sintomatología observada y ubicada la región afectada, se realizó la
siembra de las regiones afectadas en medios de cultivo adecuados para bacterias (agar
Cetrimide, medio TSA, agar sangre, agar TCBS, etc) e incubaron bajo condiciones aeróbicas, a
temperatura ambiente (aproximadamente 28°C), a fin de obtener colonias aisladas. Las cepas
obtenidas fueron posteriormente sometidas a su respectivo proceso de identificación, para lo
cual se realizó una serie de técnicas convencionales, tomando como base la determinación de
sus características fenotípicas, tanto a nivel morfológico, tintorial, fisiológico, bioquímico, etc.
Confirmación de la Capacidad Patogénica:
Para confirmar la capacidad patogénica de las cepas se aplicaron los postulados de Koch,
para lo cual se preparó una suspensión densa del microorganismo (aprox. 10 8 cél/ml), el cual
había sido previamente aislado a partir de un individuo enfermo, bajo la forma de un cultivo
puro. Un ml de esta suspensión se incorporó a un depósito de vidrio que contenía un litro de
agua y dos individuos sanos de la misma especie íctica a fin de determinar el efecto que
producían las bacterias a peces sanos y el tiempo en el cual los peces comenzaban a mostrar los
primeros síntomas de enfermedad. Finalmente, el agente microbiano fue reaislado de los peces
infectados experimentalmente. Como control negativo se utilizaron peces mantenidos bajo las
mismas condiciones que los anteriores, a excepción de que no estuvieron en contacto con la
especie bacteriana en estudio.
Determinación de la Sensibilidad Antibiótica de las Cepas Bacterianas:
La sensibilidad antimicrobiana de las cepas se determinó mediante la prueba de difusión en
disco, mediante el método de Kirby-Baüer (Livermore y Brown, 2001), empleando Agar
Mueller-Hinton. Los discos de antibióticos que se utilizaron para esta prueba fueron los
siguientes: cloramfenicol (30 µg), clortetraciclina o aureomicina (30 µg), enrofloxacina (5 µg),
eritromicina (15µg), estreptomicina (10 µg), oxitetraciclina (30 µg), así como una suspensión de
las cepas en estudio equivalente a una concentración celular similar a 3 x 10 8 céls/ml, para lo
cual se utilizó la escala de Mac Farland. Según parámetros estandarizados, se determinó el nivel
de sensibilidad de las bacterias frente a los antibióticos ensayados.
RESULTADOS
Se analizaron un total de 100 peces ornamentales de la familia Pimelodidae, correspondiendo
33 a Perrunicthys perruno “achara común”, 28 a Pimelodus ornatus “ornatus”, 22 a Pseudoplatystoma
fasciatum “doncella” y 17 a Brachyplatystoma juruense “zúngaro alianza”.
Todos los especímenes mostraban síntomas externos de infección, ya sea a nivel de piel,
aletas, apéndices o branquias, lográndose aislar un total de 80 cepas bacterianas, las cuales se
lograron identificar a nivel de género y/o especie.
De las 80 cepas bacterianas aisladas, 23 pertenecieron a la especie Aeromonas veronii, 19 cepas a
Pseudomonas fluorescens, 15 cepas a Aeromonas sobria, 7 cepas a Azomonas agilis, 06 cepas a
Aquaspirillum fasciculus, 5 cepas a Aeromonas sp., 3 cepas a Pseudomonas aeruginosa y 2 a Plesiomonas
sp. (Tabla 1).
Tabla 1. Número de cepas de espécies bacterianas encontradas em Pimelodidos ornamentales de la Cuenca Del rio
Nanay, Iquitos-Perú durante El 2008
Especie bacteriana
P. pe
P. or
P. fa
B. ju
N° cepas
9
5
6
3
23
Aeromonas veronii
7
8
2
2
19
Pseudomonas fluorescens
3
4
6
2
15
Aeromonas sobria
2
3
1
1
07
Azomonas agilis
2
3
0
1
06
Aquaspirillum fasciculus
3
0
2
0
05
Aeromonas sp.
2
0
1
0
03
Pseudômonas aeruginosa
1
0
1
0
02
Plesiomonas sp.
TOTAL
29
23
19
9
80
P. pe= Perrunicthys perruno, P. or= Pimelodus ornatos, P. fa= Pseudoplatystoma fasciatum,
B. ju= Brachyplatystoma juruense
La determinación de la sensibilidad antibiótica de las 80 cepas bacterianas aisladas mostró
que la mayoría de ellas eran sensibles al cloramfenicol y a las tetraciclinas (clortetraciclina y
oxitetraciclina) (Tabla 2).
Tabla 2. Sensibilidad a antibióticos por bacterias ectopatógenas aisladas de Pimelodidos ornamentales de
la Cuenca del río Nanay, Iquitos-Perú, durante 2008
Bacteria
Aeromonas veronii
Pseudomonas fluorescens
Aeromonas sobria
Aeromonas agilis
Aquaspirillum fasciatus
Aeromonas
Pseudomonas aeruginosa
Plesiomonas
N° cepas
Cloramf
Clortet
Enroflox
Eritro
Estrep
Oxitet
23
19
15
07
06
05
03
02
22
15
15
06
04
04
03
02
21
18
14
07
05
05
02
02
18
18
13
06
06
04
03
01
13
08
07
03
01
01
01
00
9
7
4
1
01
01
00
00
20
17
13
07
05
04
03
02
En relación a los bioensayos tendientes a confirmar la capacidad patogénica de las cepas
bacterianas, 72 (90%) de ellas causaron la muerte de peces sanos en un lapso no mayor a 48
horas después de iniciada la infección experimental.
DISCUSIÓN
La pérdida de peces ornamentales debido a la mortalidad causada por bacterias patógenas
constituye una gran problemática para las personas involucradas en el negocio de exportación
de peces ornamentales4. La cuenca del río Nanay ha sido caracterizada como la más importante
en términos de diversidad de recursos ícticos3, por ello, en el presente trabajo nos limitamos a
estudiar a cuatro de las especies de Pimelódidos ornamentales, que son extraídos con más
frecuencia, es decir: Perrunicthys perruno “achara común”, Pimelodus ornatus “ornatus”,
Pseudoplatystoma fasciatum “doncella” y Brachyplatystoma juruense “zúngaro alianza”, tal como se
aprecia en la Tabla 1.
De las 80 cepas bacterianas aisladas, al igual que lo reportado por otros autores como Buras et
al8, los bacilos Gram negativos son considerados como los agentes patógenos más frecuentes en
peces, destacando las especies de los géneros Aeromonas y Pseudomonas (Tabla 2).
Al parecer, las especies de Aeromonas, son conocidas como ictiopatógenas, ya que Fuentes y
Pérez9, lograron aislar a Aeromonas hydrophila, a partir de truchas arco iris (Oncorhynchus mykiss),
que habían muerto por septicemia hemorrágica en una granja piscícola del Estado de México.
Cabe destacar la presencia de especies bacterianas como Azomonas agilis y Aquaspirillum
fasciculus, las cuales son reconocidas como microorganismos propios de ecosistemas acuáticos10.
Al mismo tiempo, se conoce que los peces ornamentales no solamente padecen de
enfermedades de etiología bacteriana sino que también pueden ser afectados por parásitos,
hongos, virus u otros agentes3. Es así que de los 100 especímenes analizados, solamente 80 de
ellos estuvieron afectados por bacterias, mientras que los 20 restantes, que también mostraban
lesiones externas a nivel de branquias, piel o aletas, no mostraron este tipo de agentes
microbianos y tal vez, podrían haber sido afectados por alguno de los otros organismos ya
mencionados11. Aunque, no se debería descartar a las llamadas bacterias viables no cultivables,
las cuales han sido detectadas en muchos ecosistemas acuáticos y podrían estar desempeñando
un rol importante en la salud de estos peces12.
En relación al comportamiento de los microorganismos en estudio frente a los agentes
antibióticos seleccionados, el cloramfenicol y las tetraciclinas mostraron capacidad restrictiva
respecto al crecimiento de las cepas bacterianas ensayadas (Tabla 3), lo cual resulta ser una
información importante puesto que sería más fácil poder controlar las enfermedades causadas
por estos agentes mediante el empleo de estos antibióticos, más aún si se determinó, a través de
los bioensayos, que el 90% de las cepas eran capaces de ocasionar la muerte de peces infectados
experimentalmente, antes de las 48 h de la inoculación.
Cabe mencionar el trabajo realizado por Boijink y Brandao13, quienes inocularon
intramuscularmente la bacteria Aeromonas hydrophila (suspensiones de 3,5 x 108 y 1,3 x 109
UFC/ml de solución salina), en pimelódidos de la especie Rhamdia quelen, demostrando que la
totalidad de individuos morían a las 24 h de la inoculación.
Es probable que no todos los agentes bacterianos aislados sean altamente virulentos o que
sean capaces de producir una enfermedad de periodo de incubación superior a las 48 horas tal
es el caso de las micobacterias14,15, aunque tampoco se podría descartar el hecho que solo estén
presentes como flora comensal acompañante a nivel de las lesiones externas y que el verdadero
agente causal de la lesión sea otro.
Por todo ello, sería conveniente realizar mayores estudios relacionados con este tipo de
agentes ectopatógenos a fin de poder dilucidar muchos aspectos que hoy en día aún son
desconocidos y así poder comprender más claramente la epidemiología de las enfermedades de
estos recursos ícticos.
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