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HPONE®
1. NOMBRE: HpOne
de protones, ya que se ha demostrado que dichos fármacos
poseen un efecto bactericida sobre el microorganismo.
2. APLICACIÓN
HpOne detecta la enzima ureasa para la presunta
identificación del Helicobacter pylori en las biopsias de la
mucosa gástrica. Este método está diseñado exclusivamente
para diagnóstico in vitro.
3. RESUMEN
La bacteria Helicobacter pylori es el agente causal de la
mayoría de los casos de gastritis aguda de tipo B (1). En la
actualidad se conoce que, en ausencia de la toma de AAS, de
AINES, o de los estados de hipersecreción, la bacteria está
directamente relacionada con la aparición de la enfermedad
ulcerosa péptica, tanto de la úlcera gástrica benigna como de
la duodenal (2). Existen datos epidemiológicos que relacionan
la presencia del H. pylori con el cáncer gástrico y con los
linfomas MALT (3,4). Se ha demostrado que la erradicación
del H. pylori mediante antibioterapia cicatriza las úlceras
gastroduodenales y previene su recurrencia (4, 5).
4. PRINCIPIO
La biopsia de la mucosa gástrica obtenida mediante
endoscopia se coloca en un pocillo de muestra, al que se
añade un reactivo que contiene urea, un indicador colorante de
pH y peróxido de hidrógeno.
La ureasa del H. Pylori desdobla la urea en amoníaco, lo que
eleva el pH, cambia el color del reactivo e indica que el test es
positivo.
5. REACTIVOS
5.1. Almacenamiento y estabilidad El reactivo HpOne se
puede almacenar a una temperatura entre 2-8°C durante un
máximo de 18 meses. El test no debe realizarse si el reactivo
no presenta un color amarillo o amarillo-anaranjado o si ha
caducado.
Cada bote de reactivo HpOne presenta una fecha de
caducidad y un número de lote para los exámenes de control.
5.2. Eliminación
Las muestras y el instrumental contaminado con los que se
haya llevado a cabo el test deberán ser eliminados de acuerdo
con las normas específicas sobre el tratamiento de residuos
biológicos.
6. RECOGIDA Y PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
6.1. Preparación del paciente
Cuando se ha realizado una terapia subóptima con
antibióticos y bismuto, estas sustancias pueden inactivar el
microorganismo sin llegar a eliminarlo. Por tanto, el paciente
no debería tomar dichos agentes en las semanas previas a
la prueba. El seguimiento inadecuado del tratamiento puede
hacer que el microorganismo se distribuya de forma parcheada
y no detectarse en una biopsia aleatoria. Asimismo, antes de
la prueba, el paciente no debe tomar inhibidores de la bomba
6.2. Localización de la biopsia
Debido a la infección parcheada natural del H. pylori, se
recomienda de forma general que se obtengan dos
muestras por paciente, una del área prepilórica y otra de la
porción proximal de la curvatura menor del antro (6). Con
cualquier pinza de biopsia estándar se obtiene una muestra de
tamaño suficiente; no obstante, si se utilizan pinzas de mayor
tamaño se podrá extraer un gran volumen de tejido que podría
incrementar la cantidad de microorganismos. Las biopsias
deberían obtenerse de mucosas con apariencia normal, ya que
las que presenten erosiones o ulceraciones podrían contener
escasos microorganismos.
7. PROCEDIMIENTO
PASO 1: Antes de empezar la prueba, debe ser evaluado
el estado del reactivo HpOne. Éste tiene que ser de color
amarillo. Si presenta un color verdoso o azulado puede indicar
la degradación del producto y no debería utilizarse. Para
comprobar que el reactivo funciona adecuadamente, véase el
procedimiento de control de calidad en el apartado 9 de este
prospecto.
PASO 2: Liberar el utensilio especialmente diseñado para
extraer la muestra. Éste consta de una aguja y una espátula
para retirar las biopsias del fórceps.
PASO 3: Colocar las muestras en el fondo del pocillo y añadir
directamente dos o tres gotas del reactivo HpOne.
PASO 4: Cerrar el pocillo presionando la tapa firmemente, de
lo contrario podría verterse su contenido. En la etiqueta deben
quedar reflejados el nombre del paciente y la hora a la que se
haya realizado la prueba.
8. INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
8.1. Los tiempos de lectura recomendados de HpOne son 5,
15, 30 y 60 minutos tras la inserción de la biopsia. Una vez que
se haya obtenido un resultado positivo no se requieren más
lecturas.
8.2. Si el H. pylori está presente, el reactivo del pocillo
empezará a tornarse de color azul claro. Al principio se
buscará el cambio de color en la parte de la espuma que
forma la interfase aire-líquido. La aparición de cualquier color
azul, incluso el azul claro, debería considerarse positivo. El
color azul claro se expandirá rápidamente hasta cubrir toda
la espuma y después el fluido se tornará azul a medida que
aumente el pH del medio.
pH aproximado
Color
Resultado
4,2 – 5,4
amarillo
negativo
5,5 – 6,9
azul pálido
positivo
7,0 o más
azul
positivo
8.3. Si el reactivo permanece de color amarillo, indica la
ausencia de la enzima ureasa y que el test es negativo. La
última lectura de un resultado negativo no debería efectuarse
más allá de una hora.
8.4. Cualquier cambio de color del reactivo a un azul más
o menos intenso en menos de una hora se considerará un
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resultado positivo (diagnóstico de presunción).
8.5. Las reacciones indeterminadas en una hora son raras (no
se han encontrado en los resultados clínicos) y deberían ser
interpretadas en conjunto con la histología u otros criterios. Es
posible que haya que llevar a cabo un examen histológico con
una tinción adecuada, por ejemplo la tinción de Giemsa o la
de Warthin - Starry.
9. CONTROL DE CALIDAD
Para realizar el control de calidad cada estuche de HpOne
incluye tiras absorbentes y un pequeño bote que contiene
aproximadamente 25 ml por gota de la preparación de ureasa
glicerol (Catálogo Sigma # U1B75) para realizar el control
positivo del ensayo. Como control negativo puede usarse un
microorganismo no productor de ureasa o una solución salina
estéril.
En las siguientes circunstancias se realizarán los controles:
• cuando cambie el número de lote
• cuando cambie el técnico que realiza los ensayos
• cuando haya cambios en el medio.
• cuando se desee verificar la veracidad de un resultado
negativo.
9.1. Pruebas de control de calidad.
a. Control positivo. Colocar una gota del reactivo HpOne en
la almohadilla absorbente de una de las tiras preparadas para
el control de calidad y dejar que se absorba durante 10-20
segundos. A continuación, colocar en el mismo punto una
gota de la solución control positivo de ureasa. La zona debería
tornarse azul en 10 minutos. Nota: es posible que la tira
absorbente recupere el color amarillo con el tiempo, por lo que
no se recomienda hacer lecturas después de una hora.
b. Control negativo. Colocar una gota del reactivo HpOne
en la almohadilla absorbente de una de las tiras preparadas
para llevar a cabo el control de calidad y dejar que lo absorba
durante 10-20 segundos. A
continuación, colocar en el mismo punto una gota de la
solución control negativo. Éste debería permanecer de color
amarillo durante al menos 10 minutos. Si alguno de los
controles mostrara un comportamiento anómalo, póngase en
contacto con Laboratorio BOHM, S.A. al número 91 642 18 18.
10. LIMITACIONES Y ADVERTENCIAS
10.1. Este ensayo no está definido para pacientes menores de
18 años.
10.2. Falsos positivos:
Los estudios indican que la ureasa presente en otros
microorganismos tales como Proteus, Klebsiella o
Pseudomonas no resulta tan activa en el rango ácido de
pH donde se desencadena la reacción con HpOne. Esta
característica distingue la actividad de la ureasa del H. pylori
de la de otras bacterias. Los pacientes con aclorhidria total
(anemia perniciosa, cirugía gástrica previa y la supresión
ácida prolongada por fármacos) podrían tener un crecimiento
bacteriano de otras bacterias gástricas que contengan
ureasa. En general, estas bacterias tienen menos ureasa y no
producen un test azul positivo tan rápido.
10.3. Falsos negativos:
Varios factores pueden producir un resultado falso negativo.
a. Distribución parcheada de la infección. Se ha demostrado
que la infección por H. pylori puede distribuirse de forma
parcheada; por eso se recomienda extraer dos biopsias
antrales, generalmente una en el área prepilórica y la otra en la
curvatura menor del antro proximal.
b. Metaplasia intestinal. El H. pylori no coloniza áreas
afectadas de metaplasia intestinal, por lo que si ésta se
encuentra muy extendida, es posible obtener un falso
resultado. Una vez más, se recomienda obtener múltiples
biopsias.
c. Efectos del tratamiento con antibióticos. El H. pylori es
sensible a muchos fármacos antimicrobianos, incluyendo el
bismuto. Si los pacientes han sido tratados recientemente
con antimicrobianos, éstos pueden ser inactivados sin llegar
a eliminarlos. En estas situaciones, pueden obtenerse un
inadecuado número de bacterias. Por ello, se aconseja
tomar múltiples biopsias si se han tomado antibióticos
recientemente.
d. Inhibidores de la bomba de protones.
Los inhibidores de la bomba de protones, tienen un rápido
efecto bactericida sobre el H. pylori. En condiciones ideales,
habría que interrumpir el tratamiento con estos fármacos dos
semanas antes de obtener la biopsia.
10.4. En casos de infecciones difíciles o cuestionables, debería
considerarse realizar otras pruebas tales como exámenes
histológicos, serológicos o la prueba del test del aliento de
urea (cuando sea posible).
11. VALORES ESPERADOS
En la población altamente sintomática sobre la que se realizó
el estudio clínico del reactivo HpOne, 65 de 117 pacientes
(55,6%) dieron un resultado positivo de infección por H. pylori
en un examen histológico.
12. RENDIMIENTO ESPERADO
En 3 lugares fuera del laboratorio, 60 usuarios sin experiencia
en laboratorio probaron el comportamiento de tres soluciones
ciegas randomizadas que incluían: un negativo, un débil
positivo y un positivo. En el 100% de los casos se identificaron
correctamente el resultado positivo y el negativo.
13. CARACTERÍSTICAS DEL RENDIMIENTO
En un estudio con 117 posibles enfermedades ulcerosas
pépticas, 65 demostraron un criterio histológico positivo
(presencia de H. pylori detectados mediante tinción) en las
gastritis por H. pylori, y 52 no lo demostraron. Hecha la prueba
con el reactivo HpOne, los resultados positivos coincidieron
con los del examen histológico en 60 casos (92,3%) y
los negativos, en los 52 casos (100%). Esto supone una
sensibilidad relativa del 92,3% y una especificidad relativa del
100%.
HpOne Positivos Verdadero + 60 HpOne Negativos
Histologías Positivas = 65
Histologías Negativas= 52
Falso - 5
Falso +
0
Verdadero 52
Sensibilidad de HpOne = 92,3% Valor predictivo positivo = 100%
Especificidad de HpOne = 100% Valor predictivo negativo = 91,23%
El procedimiento con el reactivo HpOne diagnosticó
correctamente el 66,67% de los positivos a los 5 minutos de
realizar la prueba y el 83,3% a los 15 minutos. En la lectura
final de la prueba, una hora después de llevarla a cabo, no se
detectó ningún falso positivo.
14. PRESENTACIÓN: Envase con 50 determinaciones.
BIBLIOGRAFÍA
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6. Genta RM., Graham DY.: Comparison of biopsy sites
for the histopathological diagnosis of Helicobacter pylori:
a topographic study of H. pylori density and distribution.
Gastrointestinal Endos. 1994; vol. 40, nº 3: 342-5.
IMPORTADO Y COMERCIALIZADO POR:
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