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Recuento de bacterias viables
Recuento de bacterias
Método y Resultados
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II. MÉTODOS
RECUENTO DEL NÚMERO DE BACTERIAS VIABLES POR DILUCIÓN Y SIEMBRA EN PLACA
1.Material necesario
Cultivo de Escherichia coli de 24 horas en caldo de tripticasa soja (TSB) 6 placas de TSA 6 tubos de ensayo con 4.5 ml de solución salina 0.9%
estéril. Puntas de pipetas estériles de 1 ml Pipeta automática de 1ml Espátula de Driglasky de acero Placa con alcohol
2. Técnica de recuento en placa por siembra en superficie. 2.1. Obtención de diluciones seriadas del cultivo.
Marcar los 6 tubos de solución salina con las diluciones 10-1, 10-2, …….10-6
Utilizando la pipeta de 1 ml con punta estéril, transferir asépticamente 0.5 ml del cultivo de E. coli a un primer tubo de solución salina estéril de 4.5
ml. (dilución 10-1). Retirar la punta y echarla al contenedor.
Mezclar la suspensión con un vortex durante unos segundos
Con una nueva punta de pipeta estéril, transferir 0.5 ml al siguiente tubo de dilución (dilución 10-2). Retirar la punta y echarla al contenedor.
Repetir el paso anterior hasta obtener la dilución 10-6.
2.2.Siembra en placa
Marcar las placas con las tres últimas diluciones 10-4, 10-5, 10-6 (2 placas por dilución). Comprobar que la superficie de las placas está bien seca.
Cambiar el volumen de la pipeta a 0.1 ml. Tomar una punta de pipeta estéril y transferir 0.1 ml de cada una de las tres últimas diluciones a placas de
TSA Esterilizar la espátula de Driglasky impregnándola en alcohol, escurrir el exceso de alcohol y pasar por la llama del mechero.
Sembrar la dilución sobre la superficie de la placa rotando y esparciendo la muestra en todas las direcciones.
Incubar las placas en posición invertida a 37ºC durante 24-48 horas.
III. RESULTADOS
2.3.Recuento de las colonias Tras la incubación, se observan las colonias bacterianas sobre la superficie del agar. Cada colonia representa a una
unidad formadora de colonia (UFC). Usualmente una UFC se corresponde con una célula viable.
Seleccionar las placas de la dilución que haya producido un número de colonias comprendido entre 30-300 y contar el número de colonias presentes.
En el ejemplo: 125 colonias
El resultado debe expresarse como UFC/ml para ello se multiplica el promedio del nº de colonias obtenido por el inverso de la dilución final de la
muestra.
Por tanto: UFC/ml= 125 x10 x10(exp 6)= 125 x 10(exp 7)
2.4. Resultados
Objetivos
Introducción
Autoevaluación
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