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BT2005
Diagnós.co
Molecular
1
Diagnós.co
Molecular
1
Relevancia,
Áreas
de
Aplicación
y
Tendencias
Actuales
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Diagnós.co
Molecular
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PCR
hizo
crecer
al
Diagnós.co
Molecular
Técnicas
derivadas
de
PCR:
 
Basadas
en
Métodos
Enzimá.cos
 
Basadas
en
Métodos
Electroforé.cos
 
Basadas
en
Métodos
de
Fase
Sólida
 
Secuenciación?
Molecular
Diagnos.cs
Fundamentals
Methods
and
Clinical
Applica.ons
‐
Patrnos
‐
Ansorge
‐
Elsevier
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Diagnós.co
Molecular
1
PCR
hizo
crecer
al
Diagnós.co
Molecular
Técnicas
derivadas
de
PCR:
 
Basadas
en
Métodos
Enzimá.cos
  RFLP
(Enzimas
de
Restricción)
  Estructura
Secundaría
/
Heterodúplex
(Resolvasas
y
endonucleasas)
  Oligo‐Ligated‐Assay
(Ligasas)
 
Basadas
en
Métodos
Electroforé.cos
  SSCP
(Single
strand
conforma.on
polymorphism)
  HAD
(heteroduplex
analyses)
  Two‐dimensional
gene
scanning
(1D
tamaño
y
2D
secuencia)
 
Basadas
en
Métodos
de
Fase
Sólida
(la
más
usada
actualmente)
  Tirillas
:
Reverse‐dot‐blot
(oligos
en
membranas
hibridados
con
productos
de
PCR)
  Hibridación
Alelo‐Específica
en
filtros
(PCR‐ASO)
  Microarreglos
SNP’s
 
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Consideraciones
de
uso
de
PCR
 
 
Taq
Polimerasa
  Regiones
GC
  Error
~
10‐4
a
10‐5
  Condiciones
de
amplificación
  Magnesio
  pH
  Temperatura
  Concentraciones
(dNTP,
…)
Considerar
Polimerasas
de
Alta
Fidelidad
 
ESTÁNDAR
DE
ORO
PARA
DETECCIÓN
DE
MUTACIONES
 SECUENCIACIÓN
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Criterios
para
la
Selección
de
Técnicas
 
Espectro
de
Mutaciones
 
Infraestructura
disponible
 
Costos
 
Número
de
pruebas
a
realizar
 
Propiedad
Intelectual
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Relevancia
y
Aplicaciones
del
Diagnós.co
Molecular
 
Clínica
 
Ecología
 
 
 
Colaboración
 
 
Alimentos
Ciencia
Forénse
y
Legal
 
 
Hacer
equipos
de
5
o
6
alumnos.
El
profesor
asigna
un
tema
a
cada
equipo.
Cada
equipo
discute
su
tema
en
10
minutos.
Cada
equipo
da
un
breve
resumen
de
lo
discu.do
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Aplicaciones
Clínicas
 
Diagnós.co
de
Enfermedades
Prenatales
 
Indicadores
de
progresión
(enfermedad
y
recuperación)
 
Diagnós.co
de
Enfermedades
 
Detección
de
Agentes
Infecciosos
 
Detección
de
Exposición
Previa
a
Agentes
o
Infecciones
 
Detección
de
Flora
Intes.nal
 
Medicina
Personalizada
(farmacogené.ca)
 
Cél.
falciformes,
fenilcetonuria,
firbrosis
quís.ca,
tuberculosis,
HIV
 
Propensión
y
Riésgo
 
Cáncer
  Leucemias,
próstata,
mama
 
Respuesta
a
terapia
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Aplicaciones
Ecológicas
 
Detección
de
Flora
y
Fauna
 
Detección
de
exposición
a
agentes
tóxicos
 
Comparación
de
cepas
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Aplicaciones
en
Alimentos
 
Detección
de
agentes
infecciosos
 
Detección
de
cruzas/invasión
en
plantas
(por
ejemplo
maíz)
 
Detección
de
Transgénicos
 
“Alimentos
Funcionales”
(foods
and
beverages
with
claimed
health
benefits
based
on
scien.fic
evidence)
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Aplicaciones
en
Ciencia
Forénse
y
Legal
 
Determinación
de
Parentesco
 
Determinación
de
Iden.dad
 
Implicaciones
É.cas
y
Legales
 
Matrimonios
 
 
Seguros
Tratamiento
 
Trabajo
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Tendencias
Actuales
 
Derivadas
del
conocimiento
de
la
secuencia
“completa”
del
Genoma
Humano
 
DHPLC
denaturing
high
performance
liquid
chromatography
(Xiao
and
Oefner,
2001)
 
 
 
 
Retención
diferencial
de
homo‐
hetero‐
dúplex
en
fase
reversa
(no
polar)
y
condiciones
parcielmente
desnaturalizante
Detección
de
SNP,
deleciones
e
inserciones
en
minutos
usando
amplicones
ES
EL
MAS
PODEROSO
Piro‐secuenciación
(pyrosequencing)
–ciclos
de
extensión
y
detección
de
nucleó.dos‐
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Tendencias
Actuales
 
PCR
Tiempo
Real
(Real‐Time
PCR)
 
Rapidez,
Sensibilidad
y
reproducibilidad
 
Detección
en
fase
exponencial
Acopla
Detección
y
Amplificación
en
1
sola
fase
 
 
 
Reducción
de
Ciclos,
eliminación
de
proc.
Post‐PCR,
uso
de
fluorogenos
Volumnes
pequeños
 
Microarreglos
 
 
Polimorfismos
y
alteraciones
en
secuencias
Proteómica
  Geles
de
2D
 
Espectrómetros
de
Masas
 
Microarreglos
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Perspec.vas
Futuras
 
Tecnologías
con
miles
de
reacciones
diagnós.cas
al
mismo
.empo
 
Uso
de
secuencias
genómicas
 
Incremento
en
el
diseño
de
nuevas
pruebas
diagnós.cas
 
Lab.
de
Diag.
Molecular
serán
indispensables
en
medicina
 
Predispoción
familiar
(matrimonios)
 
“Teranos.cs”
(Diagnós.co
+
Terapia)
 
 
Medicina
Personalizada
Lab
on
a
chip
Molecular
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Tendencias
y
Problemas
en
Comercialización
 
Selección
de
la
plataforma
de
detección
de
mutaciones
 
Protocolos
no
standard
(tabla
1.1)
 
Entrenamiento
del
personal
 
Automa.zación
de
procesos
manuales
 
Consideraciones
É.cas
y
Legales
 
Propiedad
Intelectual
 
Reconocimiento
de
Gené.ca
Médica