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TOMOGRAFÍA ULTRAESTRUCTURAL DE LA DISPOSICIÓN ESPACIAL
DEL CITOESQUELETO DE BETA ACTINA EN EL EPITELIO SEMINÍFERO.
Juan Carlos Cavicchia 1, Jorge Ibañez1, Cristian Acosta1, Mabel Foscolo1, Juan Romero2,
Francisco Capani2
1-Facultad de Ciencias Médicas, U.N.Cuyo e Instituto de Histología y Embriología, Dr.Mario H. Burgos
(IHEM) CONICET.
2- Instituto de Investigaciones Cardiológicas (ININCA). UBA-CONICET.
El principal objetivo de nuestro estudio es la observación y cuantificación de los
filamentos de beta actina en las células de Sertoli y en las células germinales en donde
adquieren una disposición especial aún no dilucidada [1] en los diferentes estadíos del
ciclo espermatogénico del tubo seminífero. Para alcanzar este objetivo usamos técnicas
tomográficas combinadas con microscopía electrónica de transmisión de alto voltaje.
Se utilizaron ratas adultas (tres meses) y sacrificadas de acuerdo con las regulaciones
aprobadas por el Consejo Ético de la Universidad Nacional de Cuyo. Los testículos
fueron extraídos y fijados siguiendo el procedimiento estándar. Se obtuvieron secciones
de 40 micrones con un vibrátomo Oxford y éstas empleadas para inmunohistoquímica
(ABC/DAB) o incluidas en resina Epon para microscopía electrónica. Los cortes se
incubaron toda la noche con un anticuerpo monoclonal contra beta actina (Sigma, USA),
luego en el anticuerpo secundario (Vector Laboratory Inc., Burlingame, CA) y luego
revelados con avidin/biotin peroxidase seguido de 3,3’- diaminobenzidine. Para el
estudio tomográfico se obtuvieron por ultramicrotomía y luego observados en
microscopios electrónicos de voltaje intermedios provistos por el Laboratory of Cell
Ultra structure Hertha Meyer, Biophysics Institute, Rio de Janeiro Federal University.
Esta técnica permite observaciones tridimensionales (3D) y reconstrucción del
citoesqueleto de actina en secciones gruesas (250 nm).
Nuestros resultados se presentan en una secuencia de tomogramas. Estas imágenes de
video de alta resolución permiten observaciones únicas, no obtenibles por otros
métodos, sobre la incidencia y frecuencia de estructuras aún muy poco conocidas
durante la espermatogénesis como son los complejos túbulo-bulbares [2] localizados
entre las espermátides elongadas próximas a la espermiación y las células
sustentaculares de Sertoli (fig.1 y 2). La beta actina es el componente más abundante del
citoesqueleto del epitelio seminífero, en especial de las uniones intercelulares [3,4] y
complejos túbulo bulbares, por lo tanto su importancia histológica y funcional.
Esta es la primera observación directa de los procesos túbulo-bulbares en proyección
3D para lo cual es necesario el uso de secciones gruesas de 250 nm combinadas con
microscopios electrónicos de alto voltaje provistos de manipulación tomográfica para
obtener imágenes 3D.Estudios posteriores serán necesarios para continuar explorando
mediante estas tecnologías la compleja y cambiante interrelación morfo-funcional del
citoesqueleto de beta actina a lo largo de la onda espermática.
Agradecimientos: agradecemos al Dr. Wanderley de Souza, Director del Laboratory of
Cell Ultra structure Hertha Meyer, Biophysics Institute, Rio de Janeiro Federal
University por permitirnos el uso de los microscopios electrónicos y otras facilidades
del laboratorio.
Referencias:
1- Cavicchia, J.C., Fóscolo, M., Ibañez, J., Lillig, Ch., Capani, F. (2011). The actin filament network
associated to Sertoli- Sertoli ectoplasmic specializations.” Biocell 35, 81-89.
2- Young JS, Guttman JA, Vaid KS, Vogl AW (2009). Tubulobulbar complexes are intercellular
podosome-like structures that internalize intact intercellular junctions during epithelial remodelling
events in the rat testis. Biology of Reproduction 80: 162-174.
3-Dym M, Cavicchia JC (1977). Further observations on the bloodtestis barrier in monkeys. Biology of
Reproduction 17: 390-403.
4-Dym M, Cavicchia JC (1978). Functional Morphology of the testis. Biology of Reproduction 18: 1-15.
Fig.. 1: Varios complejos túbulo-bulbares
(flechas) emergen desde una espermátide
elongada hacia el citoplasma sertoliano.
.
Fig.2: En una de las imágenes de una serie
tomográfica se observa un complejo
túbulo-bulbar (flecha). Aumento similar a la
fig.1.