Download MONITORIZACIÓN SEROLÓGICA DE LA RESPUESTA INMUNE EN

PROFILAXIS
MONITORIZACIÓN SEROLÓGICA DE LA RESPUESTA
INMUNE EN AVES TRAS LA VACUNACIÓN CON UNA
VACUNA VECTORIAL FRENTE A HVT+IBD
Javier Torrubia Díaz y Magdalena Gibert Perelló
Departamento Técnico de Avicultura Merial Laboratorios S.A.
Introducción
Debido a la importancia económica de la enfermedad
de Gumboro –IBD- y la alta prevalencia del virus –IBDV-, la
vacunación sigue siendo esencial. Existen disponibles
comercialmente diferentes vacunas de virus vivos que
contienen virus clásicos o variantes y se clasifican según
su grado de atenuación. El principal problema de la
inmunización activa con las vacunas clásicas es la
interferencia con los anticuerpos maternos, que pueden
neutralizarlas, por lo que es fundamental el momento de
administración de la vacuna de IBD.
La fórmula de Deventer es útil para estimar el momento óptimo de vacunación -de Witt, 2001-. Si las aves
reciben la vacuna intermedia de IBD un día o más antes
de la fecha calculada, la respuesta humoral se retrasará
o no será detectable hasta el sacrificio -Block y col.,
2007-. Las vacunas suaves e intermedias son seguras,
ya que causan menos daño en la bolsa de Fabricio que las
vacunas «calientes», pero son poco eficaces en presencia de anticuerpos maternos y frente a las cepas muy
virulentas del virus IBD –vvIBDV-. En contraste, las cepas
menos atenuadas -vacunas «intermedias plus» y «calientes»- pueden sobrepasar ciertos títulos de anticuerpos
maternos, pero pueden causar lesiones más severas a
nivel de los folículos de la bolsa de Fabricio, dando lugar
a cuadros de inmunodepresión. Los problemas derivados
de la administración de las vacunas clásicas parecen
haber sido superados gracias al lanzamiento de las vacunas vectoriales.
Artículo patrocinado por
En la vacuna vectorial designada vHVT013-69
(vHVT13*), el virus HVT vacunal -que expresa el gen
VP2 del IBDV-, tiene la ventaja de combinar tanto una
mejor seguridad, como una mejor eficacia. vHVT13
puede ser administrada tanto “in ovo” como por vía
subcutánea en pollitos de un día de edad, en presencia
de altos títulos de anticuerpos maternos (revisado por
Bublot y col., 2007).
Se pueden medir anticuerpos específicos contra
IBDV por ensayos de neutralización viral –VN- pruebas
ELISA o por pruebas de precipitación en gel de agar –AGP-. Las
pruebas ELISA son las más utilizadas ya que son simples,
rápidas, reproducibles y adaptadas al uso a gran escala.
Hay varios kits de ELISA disponibles que utilizan diferentes tipos de antígenos IBDV (Jackwood y col., 1999).
Monitorización serológica
A lo largo de los años 2009 y 2010 se han analizado
aproximadamente 4000 muestras de sueros provenientes de 212 lotes de aves, de diferentes partes de España,
para comprobar los valores típicos de anticuerpos de
aves vacunadas con la vacuna vectorial vHVT13 en
diferentes momentos de la vida y de diferentes estirpes.
Para los análisis serológicos se han utilizado 2 kits
ELISA: el kit clásico IDEXX IBD Ab y un kit «mejorado»,
el kit PROFLOK Plus IBD Ab test. Ambos son ELISAs
indirectos y reconocen anticuerpos tanto frente a cepas
(*) vHVT13: Vaxxitek® HVT+IBD, Merial laboratorios S.A.
MONITORIZACIÓN SEROLÓGICA DE LA RESPUESTA INMUNE EN AVES...
variantes como clásicas del IBDV. El fundamento de
ambas pruebas es similar. Los anticuerpos específicos
contra IBDV en el suero problema, forman un complejo
Título medio ELISA
antígeno-anticuerpo con el
Clásico
antígeno de IBD pegado a la pla5.604
ca. El complejo se detecta mediante un conjugado de
peroxidasa. La diferencia entre las dos pruebas se encuentra en la naturaleza del antígeno IBDV que recubre
las placas. El test IDEXX IBD Ab utiliza un antígeno
derivado de una cepa clásica replicada en cultivo de
tejidos. El test PROFLOK Plus IBD Ab utiliza un antígeno
de una cepa clásica derivada de bolsas nativas, lo que
permite una detección más precisa de los anticuerpos
VP2 protectivos del IBDV. Este test mejorado es más
sensible que el test clásico y muestra una alta correlación con la prueba VN. El umbral de positividad se ha
fijado en un valor de 500 para el test IDEXX IBD Ab y en
1002 para el IBD PROFLOK Plus Ab.
Pollitas futuras ponedoras
comerciales
Título medio ELISA
Clásico
El seguimiento se realizó en
9 lotes de pollitas comerciales
246
con un total de 200 muestras de
suero, a una edad comprendida
entre los 21 y 35 días. La media de los resultados de los
9 lotes se expresa en la tabla siguiente:
La media de los resultados de los 24 lotes se expresa en
la tabla siguiente:
Título medio ELISA
IBD Plus
Desviación estandar
ELISA IBD Plus
% CV ELISA
IBD Plus
12.665
3.160
6,45
Se observa que el título medio de los lotes con el ELISA
clásico es de 5604, con un CV del 32,9%, mientras que
con el ELISA IBD Plus específico de VP2 es de 12665 - la
media de los resultados individuales también muestra
pocas diferencias con un valor de 12422 - y el CV muy
bajo de 6,45%. No hubo ningún suero que mostrara
resultados negativos, considerándose que estos títulos
son de origen materno.
Broilers de entre 20 y 26 días de edad
El seguimiento se realizó en 75 lotes comerciales con
un total de 1378 muestras de suero de entre 20 y 26 días
de edad. La media de los resultados de los 24 lotes se
expresa en la tabla siguiente:
Título medio ELISA
IBD Plus
Desviación estandar
ELISA IBD Plus
%CV ELISA
IBD Plus
6.181
1.762
49,01
Se observa que el título medio de los lotes con el ELISA
clásico es negativo -por debajo del umbral de corte-,
mientras que con el ELISA IBD
Plus específico de VP2 es de
Título medio ELISA
Título medio ELISA
Desviación estandar
% CV* ELISA
6181 -la media de los resultaClásico
IBD Plus
ELISA IBD Plus
IBD Plus
dos individuales es exactamente la misma con un valor
816
10.837
3.667
32,67
de 6181- y el CV de 49%. Esto
*CV: Coeficiente de Variación
indica que el kit ELISA IBD Plus
es
mucho
más
sensible
para determinar los
Se observa que el título medio de los lotes con el ELISA
anticuerpos
VP2.
clásico es bastante bajo, mientras que con el ELISA IBD
Plus específico de VP2 es de 10837 -la media de los
Un total de 66 sueros –el 4,79%- mostraron resulresultados individuales, muestra poca diferencia con
tados negativos por debajo del nivel de corte. De los 75
10675-. Del total de sueros, solamente 1 -el 0,5%- no
lotes, hubo 5 –el 6,6%- en los que el número de sueros
mostró respuesta.
que mostraron resultados negativos fue > 20%, lo que
parecería indicar -en el caso de los 3 lotes vacunados por
Broilers
vía subcutánea al primer día- un fallo de vacunación,
probablemente por excesiva velocidad del personal enPara hacer más comprensibles los resultados serolócargado de la inoculación. En el caso de los dos lotes
gicos en broilers, se han dividido en 4 subgrupos, de un
vacunados vía “in ovo”, la explicación es menos concredía de edad, de 20 a 26 días, de 30 a 36 días y por encima
ta, puesto que en teoría todos los embriones son inocude 40 días de edad.
lados por la máquina, y podría deberse a una inoculación
demasiado temprana, cercana a los 18 días ya que la
Broilers de un día de edad
mayor replicación de la vacuna se consigue aproximadamente a los 18 ¾ días, aunque como veremos posteEl seguimiento se realizó en 24 lotes comerciales con
riormente podría haber otra explicación.
un total de 492 muestras de suero al primer día de edad.
SELECCIONES AVÍCOLAS • DICIEMBRE 2010
•
Pág. 31
MONITORIZACIÓN SEROLÓGICA DE LA RESPUESTA INMUNE EN AVES...
Broilers de entre 30 y 38 días de edad
Otras puntualizaciones
El seguimiento se realizó en 19 lotes comerciales con
un total de 690 muestras de suero de entre 30 y 38 días
de edad. La media de los resultados de los 19 lotes se
expresa en la tabla siguiente:
Siete lotes de animales -122 muestras de suero- no
mostraron respuesta serológica, lo que indica que no
fueron vacunados. Uno de estos lotes era de pollitas, y
se trató de un error de la incubadora. Los otros 6 lotes
de pollos correspondían a animales teóricamente vacunaTítulo medio ELISA
Título medio ELISA Desviación estandar
% CV ELISA
dos vía “in ovo” y, probableClásico
IBD Plus
ELISA IBD Plus
IBD Plus
mente, se debió a una confu690
10.976
3.910
28,61
sión bien fuera en la incubadora o en los camiones de
Se observa que el título medio de los lotes con el ELISA
transporte de reparto a las granjas.
clásico es de 690, mientras que con el ELISA
IBD Plus específico de VP2 es de 10976 -la
media de los resultados individuales es muy
parecida con un valor de 10939- y el CV de
28,61%.
Hubo sólo 5 sueros –el 1,85%- que mostraron resultados negativos por debajo del
nivel de corte. Esta reducción con respecto a
la edad anterior parece indicar que existe un
cierto porcentaje de animales inmunológicamente inmaduros en el momento de la vacunación, que tardan más en responder a la
misma.
Broilers mayores de 40 días
de edad
El kit ELISA IBD Plus específico de VP2, que se
correlaciona bien con la prueba de neutralización, permite observar una respuesta activa y fuerte anti VP2
desde el día 20 de edad en los pollos vacunados con
vHVT13. Por lo tanto, no se produjo vacío inmunitario
durante el período de edad de 3
a 5 semanas, el más importanTítulo medio ELISA
Título medio ELISA Desviación estandar
% CV ELISA
te para la exposición ante IBDV
Clásico
IBD Plus
ELISA IBD Plus
IBD Plus
de campo. Se puede obtener
esta respuesta más temprana
1.376
12.708
3.882
20,66
porque la eficacia de vHVT13
no se ve afectada por la presencia de altos niveles de anticuerpos maternos.
Se observa que el título medio de los lotes con el ELISA
clásico es de 1376, mientras que con el ELISA IBD Plus
La utilización conjunta de los 2 kits, el clásico y el IBD
específico de VP2 es de 12708 -la media de los resultados
Plus
hacia el final del período de engorde permite igualindividuales es muy parecida con un valor de 12423- y
mente
diagnosticar si en un grupo de animales ha habido
el CV de 20,66%.
una infección por el virus de campo.
Solamente 17 sueros -1,36%- mostraron resultados
negativos por debajo del nivel de corte. Seis de estos
En la gráfica podemos observar la evolución media
sueros -0,48%- correspondían a animales vacunados
típica de la respuesta de anticuerpos o largo de la vida
“in ovo”, lo que parecería indicar que fueron incapaces
del pollo.
de responder a la vacunación y 11 sueros -0,88%- eran
de animales vacunados al primer día que, o bien no
Bibliografía
fueron vacunados, o fueron incapaces de responder a la
(Se enviará a quienes la soliciten)
vacunación.
El seguimiento se realizó en 78 lotes comerciales con
un total de 1254 muestras de suero de animales mayores
de 40 días de edad. La media de los resultados de los 78
lotes se expresa en la tabla siguiente:
Pág. 32 • SELECCIONES AVÍCOLAS • DICIEMBRE 2010