Download variables morfométricas nucleares en carcinoma epidermoide de

Tercer Congreso virtual de Ciencias Morfológicas.
Tercera Jornada Científica de la Cátedra Santiago Ramón y Cajal.
VARIABLES
MORFOMÉTRICAS
NUCLEARES
EN
CARCINOMA
EPIDERMOIDE DE CUELLO UTERINO CAUSADO POR EL VIRUS DEL
PAPILOMA HUMANO 16
Kenia,
Rodríguez
Duarte1,
Lucía,
González
Núñez2,
Sandra,
Rodríguez
Salgueiro3, Juan Carlos, Piña Napal1
1
Histología, Universidad de Ciencias Médicas, Camagüey, Cuba.
2
Histología, Dpto.
Biomédica II. Escuela Latinoamericana de Medicina, La Habana, Cuba.
3
Dirección de
Enfermedades Infecciosas, Centro Nacional de Investigaciones Científicas, La Habana,
Cuba. e-mail: [email protected]
Resumen
Introducción: El cáncer de cuello uterino es una de las primeras causas de muerte a
nivel mundial. La infección por el virus del papiloma humano es la causa principal de
casi todos
los casos de
cáncer
cervical.
Objetivos:
Caracterizar parámetros
morfométricos nucleares en biopsias de carcinoma epidermoide de cuello uterino.
Métodos: Se estudiaron 11 biopsias del cuello uterino de pacientes del Hospital
Materno “Ana Betancourt de Mora” de la ciudad de Camagüey, Cuba, diagnosticadas
previamente como carcinoma epidermoide, las cuales presentaban material genético
del virus del papiloma humano 16. Se procesaron mediante la técnica convencional de
inclusión en parafina, siguiendo un eje preferencial. En 10 campos histológicos por
biopsia, se analizaron los núcleos dentro de un área seleccionada, a los cuales se les
determinó: diámetros menor y mayor, perímetro y área, mediante el programa Image
J versión 1.39u. Se calculó el volumen nuclear utilizando la fórmula de Palkovits II. Se
realizó la estadística descriptiva mediante el programa Graph Pad Prism versión 5.0
para Windows. Resultados: Se determinaron los valores promedio para cada variable
nuclear estudiada. Conclusiones: Este estudio permitió cuantificar variables nucleares
del carcinoma epidermoide, lo que complementa el diagnóstico histopatológico
cualitativo realizado previamente y le confiere mayor objetividad.
1
Introducción
El cáncer cérvico uterino constituye un problema de salud a nivel mundial. Está
estrechamente relacionado con el virus del papiloma humano (VPH), el cual activa
genes que dan lugar a lesiones premalignas y malignas de cuello uterino. El VPH 16 es
el más oncogénico, siendo responsable del 50 % de todos los cáncer cervicales a nivel
mundial.1
Existen dos tipos histológicos principales de cáncer cervical invasivo, el carcinoma de
células escamosas, que constituye cerca del 75 % y el adenocarcinoma, que constituye
del 15-25 % de todos los casos. Otros tipos de carcinomas, como el carcinoma
adenoescamoso, carcinoma adenoide quístico y carcinoma metastásico, tienen baja
incidencia. Las técnicas de detección temprana han disminuido la mortalidad debida
principalmente al carcinoma de células escamosas.2,3
Los estudios morfométricos del cáncer de cuello uterino contribuyen al diagnóstico,
clasificación y evolución de la enfermedad.4 La generalización de métodos cuantitativos
reproducibles que permitan complementar el análisis histopatológico convencional,
realizando mediciones de los núcleos del epitelio del cuello uterino, sería de gran
utilidad en el diagnóstico del cáncer cérvico uterino.
Este trabajo tuvo como objetivo caracterizar varios parámetros morfométricos
nucleares en biopsias de carcinoma epidermoide de cuello uterino.
Materiales y Métodos
Este trabajo forma parte del Proyecto de investigación “Identificación molecular del
VPH en pacientes con cáncer de cuello uterino en la ciudad de Camagüey”.
Se estudiaron biopsias obtenidas por ponche de cuello uterino de mujeres que
asistieron a la consulta de Patología de cuello del Hospital Materno “Ana Betancourt de
Mora” de la Ciudad de Camagüey, en el período comprendido entre septiembre de
2013 y septiembre de 2015.
La muestra quedó conformada por 11 biopsias que habían sido diagnosticadas
previamente como carcinoma epidermoide, las cuales presentaban material genético
2
del virus del papiloma humano serotipo 16, confirmado mediante estudios de Biología
Molecular.5
Procesamiento histológico
Las biopsias se obtuvieron por ponche del cuello uterino, se fijaron por inmersión en
formol neutro al 10 % entre 24 y 72 h. Se procesaron mediante la técnica histológica
convencional y se incluyeron en parafina, para microscopia óptica de campo brillante.
La inclusión se realizó siguiendo un eje preferencial, perpendicular a la superficie libre
del epitelio de revestimiento. Se obtuvieron cortes de 6 a 8 µm de grosor. Los cortes
se tiñeron con la tinción de Hematoxilina y Eosina.
Estudio morfométrico
Los cortes se observaron en un microscopio óptico marca Optika, con lente ocular de
10x y objetivo de 100 x, con inmersión en aceite. Se obtuvieron 10 imágenes por
biopsia mediante una cámara digital Optikacam de 9 Mpx acoplada al microscopio.
A cada imagen se le colocó una rejilla de 6 x 6 rectángulos y se seleccionaron los
cuatro rectángulos centrales, los cuales conformaron un rectángulo con un área de
2411 µm2. Se seleccionaron los núcleos que se encontraban completamente incluidos
en el rectángulo. A cada núcleo se le determinó: diámetro mayor, diámetro menor,
área y perímetro, mediante el programa Image J versión 1.39u (Figura 1).
A partir de las mediciones realizadas, se calculó el volumen nuclear por la fórmula de
volumen de estructuras ovoides de M. Palkovits
V= (ϖ / 6) x A x B², donde: A:
diámetro mayor: B: diámetro menor.6
Resultados y Discusión
Los parámetros morfométricos nucleares de las biopsias de carcinoma epidermoide se
muestran en la Tabla 1. En esta tabla se presentan los promedios por biopsia y los
promedios de las 11 biopsias por parámetro.
3
Otros autores han aplicado técnicas cuantitativas basadas en el uso de parámetros
morfométricos nucleares similares a los empleados en este trabajo, con el objetivo de
enriquecer el diagnóstico temprano de lesiones intraepiteliales de alto grado.4, 7, 8
Diversos autores han señalado la utilidad de la cuantificación del volumen nuclear en el
estudio de diversas lesiones incluyendo las de cuello uterino. En 1937 Strodtbeck
realizó una distinción entre el carcinoma de células escamosas y el epitelio cervical
normal utilizando este indicador. En 1956 Foraken y Reagan realizaron un estudio del
volumen nuclear en regiones de metaplasia, hiperplasia atípica y carcinoma in situ,
demostrándose diferencias en los valores del mismo en estas lesiones. 4
En otras investigaciones de morfometría nuclear realizadas en biopsias de endometrio
se compararon diferentes patologías de bajo y alto grado, como la hiperplasia atípica y
el adenocarcinoma en diferentes estadios de evolución. 9 En ese trabajo no se
encontraron diferencias en cuanto al perímetro, pero notificaron un aumento del área
nuclear según aumentaba el grado de malignidad de la lesión.
Existen diversos criterios con relación a los valores de volumen nuclear de las
neoplasias de cuello uterino. En estudios de carcinoma de células escamosas, se ha
planteado que el volumen nuclear no difiere en los diferentes estadios de la
enfermedad. 7,10 Por otra parte, en un estudio morfométrico de lesiones intraepiteliales
cervicales, se evidenció que el volumen nuclear aumentó a medida que se agravaba la
lesión.4
Conclusiones:
Este estudio permitió obtener resultados cuantitativos nucleares del carcinoma
epidermoide, lo que complementa el diagnóstico histopatológico cualitativo realizado
previamente y le confiere mayor objetividad.
La aplicación de técnicas morfométricas en el estudio del carcinoma epidermoide de
cuello uterino brinda la oportunidad de realizar una caracterización más objetiva de las
variaciones celulares que se producen en esta patología.
4
Referencias:
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1
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7
8
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10
5
ANEXOS
Figura 1. Pantalla del programa Image J. Epitelio del cuello uterino con diagnóstico de
carcinoma epidermoide. Rectángulo: área delimitada de 2411 µm 2. Los núcleos
medidos se delinearon en amarillo. Se señalan los diámetros menor y mayor y el área
nuclear.
6
Biopsia
D. menor
D. mayor
Perímetro
Área
Volumen
(µm)
(µm)
(µm)
(µm2)
(µm3)
1
4,7±0,6
8,1±0,9
22,2±5,8
26,4±9,0
79,1±34,6
2
4,2±0,8
8,3±1,4
21,5±6,0
24,4±8,6
82,3±40,2
3
4,1±1,0
8,3±1,5
21,7±5,6
26,4±9,6
80,3±46,7
4
4,2±0,8
8,5±1,3
20,9±5,8
25,3±9,2
82,0±36,3
5
4,1±0,8
8,5±1,2
21,8 ±6,1
26,6±9,1
79,2±37,9
6
4,1±0,8
8,3±1,3
21,4±5,6
27,2±10,0
77,0±38,7
7
3,9±0,8
7,7±1,6
22,0 ±5,6
27,7±9,4
68,3±38,0
8
3,9±0,7
7,9±1,4
20,2±5,3
26,1±9,2
67,1±34,6
9
3,9±0,7
7,9±1,4
19,7±5,0
25,0±9,9
61,3±35,6
10
3,7±0,8
7,9±1,3
21,9±5,8
25,2±9,3
74,5±32,8
11
3,9±0,7
8,2±1,2
21,9±6,1
26,3±9,8
74,5±32,8
P.
4, 1±0,9
8,1±1,7
21,4±6,3
25,7±9,0
74,4±38,2
Tabla I. Parámetros morfométricos nucleares en biopsias de carcinoma epidermoide de cuello
uterino.
Valores promedios ± desviación estándar. D. menor: diámetro menor, D. mayor: diámetro
mayor, P: promedio
7