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Diagnóstico de enfermedades vegetales Participantes { { { { { { { { { { Vivienne Gepp Agueda Scattolini Laura Hernández Sandra Alaniz Mª José Montelongo Pablo González Elsa Perdomo Carina Ojeda MGAP Jacques Borde MGAP Diego Maeso INIA 2015 Participantes { { { { { { { { INTRODUCCIÓN Santiago Cores Vanessa Cuozzo Pablo Haubman Valentina Martinez S Brian Raskin Federico Scaparoni Ariel Scarzella Lucía Villagrán Cronograma Objetivos Desarrollar habilidades para realizar diagnósticos de enfermedades en plantas Desarrollar criterio de análisis Repasar métodos convencionales Aplicar métodos convencionales 17 de setiembre: Clínica. Diagnóstico. Diagnóstico de bióticas y abióticas. Esterilización. Medios de cultivo. 23 de setiembre: Áreas del laboratorio. Preparado de medios. Microscopía básica. Observación de estructuras de hongos 24 de setiembre: Diagnóstico de enfermedades causadas por hongos y virus. Identificación por T. moleculares. Inoculación de fitopatógenos. 1 de octubre: Identificación morfológica de H. de inóculo e inoculación de hongos y virus 8 de octubre: Diagnóstico de enfermedades causadas por nematodos e identificación de nematodos. Visita al MGAP 15 de octubre: Diagnóstico de enfermedades causadas por bacterias Aislamiento, identificación e inoculación de bacterias Adquirir los conocimientos fundamentales para hacer funcionar una clínica de diagnóstico 22 de octubre: Serología, microscopio electrónico Diagnóstico de enfermedades causadas por virus. Visita a INIA-LB 29 de octubre: EVALUACION 1 Metodología de trabajo y evaluación { Clases presenciales teóricas y prácticas { Tareas personales o grupales teóricas y prácticas { { DIAGNÓSTICO Entrega de informes: Comentario sobre el reporte de una enfermedad Informe de diagnóstico y ejercicios prácticos Las tareas personales de laboratorio (coordinar) Evaluación Flexibilidad de horarios y asistencias Exigencia en los plazos de entrega Ejemplo de un proceso de diagnóstico DIAGNÓSTICO { PASOS DEL DIAGNOSTICO Proceso para determinar la causa de una enfermedad. IDENTIFICACIÓN { El resultado de este proceso. Ejemplo de un resultado de diagnóstico Niveles de confianza de un diagnóstico {Diagnóstico positivo 100% confiable Cuando los postulados de Koch son cumplidos. {Diagnóstico “correcto” >99% confiable Se registran todas las características de la enfermedad o si no, se explica la razón de su ausencia. { Diagnóstico “útil” 95-99% confiable Las principales características de la enfermedad están presentes. Es el mas frecuente {Diagnóstico “indicativo” 85-95% confiable = diagnóstico “presuntivo” La información disponible permite establecer varias posibles causas {Diagnóstico “excluyente” 100% confiable No se sabe la causa pero se descartan algunas posibles Shurtleff & Averre (1997). 2 Niveles de complejidad Procedimiento de diagnóstico LIBROS DIAGNÓSTICO SIGNO 1. { PLANTA ENFERMA SÍNTOMA EXPERIENCIA Caracterizar el problema Características de la planta normal y de la variedad (orígen, grado de resistencia, estado fisiológico y fenológico) { Consulta de expertos mismo,en su entorno y manejo) { Planificar diagnóstico Procedimiento de comprobación Caracterizar el cultivo de donde proviene (en si { Consultar bibliografía y/o expertos sobre el cultivo (ppales enfermedades) Valoración del problema Procedimiento de diagnóstico Procedimiento de diagnóstico 2. 3. Comprobación de hipótesis Plantear presuntas causas HIPÓTESIS { Posible/s causa/s: { { Características biológicas Procedimientos de confirmación Siembra y aislamientos Identificación Prueba de patogenicidad (eventualmente) 4. Aceptación o rechazo de hipótesis Se repasan los pasos 1 y 2 y se replantea el procedimiento para la misma u otra hipótesis Conocer el huésped Conocer el cultivo!!!!! 3 Importancia de describir síntomas Cancros y gomosis Manchas foliares en vid Varias causas posibles Mirar todo el vegetal Identificar el síntoma { { { { Primario Secundario Específico Síndrome Identificar los recursos disponibles Distribución en el cultivo Características de una buena muestra { Representativa del problema del campo { Que incluya síntomas primarios { Abundante para: Observar síntomas en distinto grado de avance Hacer análisis destructivos { { Eventualmente planta entera con tierra Bien empaquetada con humedad suficiente pero no excesiva 4 CLÍNICA DE DIAGNÓSTICO Tiempo para decantar ¿Qué información adicional necesitamos para ayudarnos a identificar posibles causas? (hipótesis) Actividades Infraestructura ¿De qué elementos podemos valernos antes de enviar la muestra a una clínica? ¿Cuales son los pasos que podemos hacer independientemente de si se necesita o no un servicio de clínica? Actividades 1. Recepción - Formulario de diagnóstico 2. Análisis primario - Laboratorio “sucio” 3. Clínica de Diagnóstico 1. Recepción (Almacenaje) z Formulario de diagnóstico z Acondicionamiento de la muestra z Recepción de la inquietud del remitente z Propósitos del diagnóstico Para manejo y prevención 4. Análisis - Laboratorio “limpio” 5. Resultado Clínica de Diagnóstico 2. Análisis primario: zmuestra zinformación del formulario Para reclamo comercial Para peritaje Clínica de Diagnóstico 4. Análisis de laboratorio propiamente acordes a: z la hipótesis (bacterias, hongos,…) z la infraestructura z Las técnicas disponibles zBibliografía zDiagnóstico presuntivo zderivación a una “línea de análisis” zDerivación o consulta a un experto en el tema 3. Almacenaje en heladera y/o inducción de signo 5. Resultado según el diagnóstico: INFORME z Confirmar presencia z Identificar causa z Realizar peritaje z Aconsejar manejo 5 Infraestructura para una Clínica Laboratorio Plantas para análisis biológicos Equipos de trabajo y análisis Materiales Materiales básicos Laboratorio: equipamiento { Refrigerador { Autoclave { Horno esterilización { Incubadora { Lupa { Microscopio { Área de trabajo estéril Laboratorio: áreas Unidad de Fitopatología: { { { { { { { { { Agua destilada o deionizada Alcohol Hipoclorito de sodio Agar Medios nutritivos Hidróxido de sodio al 10% Acido acético o láctico al 10% Lactofenol y ác. láctico con y sin colorante azul Lactofuchsina ¿Qué está faltando? Área de recepción y laboratorio “sucio” Lavado, esterilización, preparación de medios. Laboratorio “limpio” Almacenaje e incubación Inoculación de plantas u órganos ¿Enfermedades bióticas o abióticas? Los componentes no bióticos del entorno ambiental de las plantas pueden causarles daños directamente o predisponerlas a ser atacadas por agentes bióticos 6 Enfermedades abióticas, ambientales o fisiológicas Un factor abiótico es patogénico si: { Su valor está por fuera del rango de tolerancia de la planta { Momento de aparición, evolución rápida o no existente. Distribución en el cultivo asociada al factor: z z z El daño es mayor cuanto más alejado del rango de normalidad cuanto más dure el valor extremo cuanto más brusca sea la variación del factor { Distribución en las plantas z { En todo el cultivo En bandas o según manejo realizado En zonas con determinada característica Igual posición en todas Distribución en predio o zona: z en plantas de ≠especie Es MUY IMPORTANTE la información adicional de ambiente y manejo del cultivo de donde proviene la muestra. Mucho mas que para una enfermedad de origen biótico. ¿Cómo diferencio un mosaico de un variegado? ¿Cómo se si una ornamental miniatura lo es por una característica varietal o por enanismo? Signo ¿Causa biótica o abiótica? ¿Cuáles son las pautas que indican que el síntoma es provocado por un factor abiótico? 7 ¿Causa biótica o abiótica? “Deberes” A. Diseñe un formulario para el ingreso de muestras para uno de estos casos: 1. Enfermedades de cereales 2. Enfermedades de frutales 3. Enfermedades de praderas 4. Enfermedades de cultivos hortícolas 5. Enfermedades de cultivos florales 6. Enfermedades de árboles forestales B. Lea dos reportes de enfermedad y escriba un informe contestando las preguntas que se le entregan adjuntas. 8