Download Frecuencias de HLA-DR en pacientes mexicanos

Instituto Nacional de Salud Pública
Centro de Investigaciones sobre
Enfermedades Infecciosas
“Frecuencias de HLA-DR en pacientes mexicanos
con infección por virus dengue:
HLA-DR4 como posible factor de resistencia
genética para fiebre hemorrágica por dengue”
Dr. Celso Ramos
La Habana, Cuba. Junio 2, 2004
Infección por virus
dengue
Asintomática
Sintomática
Fiebre indiferenciada
Fiebre por dengue
Fiebre hemorrágica
por dengue
(fuga plasmática)
Sin
hemorragia
Con
hemorragia
inusual
Sin
choque
Síndrome de
choque por
dengue
Dengue and Dengue Hemorrhagic Fever. D.J. Gubler / G. Kuno (Eds.). CABY Pub. 1999.
Factores de riesgo de FHD/SCD
Especie
Edad
Genero
Raza
individuo
Competencia
vector
Capacidad
vectorial
FHD/SCD
Estado
nutricional
Densidad vectorial
Enfermedades
crónicas
Enfermedades
respiratorias
Infección
secundaria
Factores
genéticos
virus
Serotipo
Genotipo
Hiperendemicidad
Modificado de: Kouri P, Guzmán M, Bravo J, Triana C. Dengue hemorrhagic fever/Dengue shock,
syndrome: lessons from the Cuban epidemic, 1981
Complejo principal de histocompatibilidad-HLA
Clase II
TNF a
b
C
B
E
J
A
H
G
F
Clase III
Clase I
B2
a2
b1 polymorphic
a1
a2
b2
a1
b1 polymorphic
b3 polymorphic
b2 polymorphic
b1 polymorphic
a
a
HLA-DP
HLA-DQ
HLA-DR
HLA-DZ
P450C21
C4B
P450C21
C4A
B1
C2
HLA-B
HLA-C
Transferrin
HLA-A
Importancia del Complejo Principal de Histocompatibilidad
•Reconocimiento celular
•Regulación del sistema inmune
•Receptores
•Asociación con enfermedades
Ejemplos reportados de asociaciones alélicas con enfermedades infecciosas
Enfermedad infecciosa
Alelo HLA
Población
Estudio
Malaria
B53↓, DRB1*1302↑
Gambia
Hill et al. (1991)
Leishmaniasis mucocutánea
A28↑, B22↑, DQ28↑
Venezuela
Lara et al. (1991)
DR2↓, DQ3↑
Brasil
Petzl-Erler et al. (1991)
A11↑, B5↑, B7↑
Egipto
Morsy et al. (1990)
Leishmaniasis visceral
A26↑
Irán
Faghiri et al. (1995)
Filariasis
DQ1*0201↑, DPB1*0402↑,
Liberia
Meyer et al. (1994)
DQA1*0501↑, DQB1*0301↑
Nigeria
Murdoch et al. (1997)
DRB1*1302↓
Gambia
Thursz et al. (1995, 1997)
DRB1*1302↓
Alemania
Hohler et al. (1997)
DR6↓
Holanda
Van Huttum et al. (1987)
DR2↓, DR7↑
Qatar
Almary y Batchelor (1994)
DR5↓
Italia
Peano et al. (1994); Zavaglia et al. (1996)
DR5↓
Inglaterra
Minton et al. (1998)
DQB1*1301↓
Inglaterra
Tibbs et al. (196)
DQB1*1301↓
Francia
Airic et al. (1997); Cramp et al. (1998)
DQA1*0501↓, DQB1*0301↓,
Persistencia de Hepatitis B
Persistencia de Hepatitis C
Minton et al. (1998)
B54↑, DQB1*0601↓
Japón
Kuzushita et al. (1998)
Hantavirus
B8↑, B27↓
Finlandia
Mustonen et al. (1996, 1998)
Infecciones por Parvovirus
DRB1*01↑, DRB1*04↑,
Inglaterra
Kerr et al. (2002)
DRB1*07↑, B49↑
Formas severas de HTLV-1
A*02↓, DRB1*0101↑
Japón
Jeffery et al. (1999)
Enfermedad de Lyme crónica
DRB1*0401↑
EU
Steere et al. (1990)
↑: alelo susceptible, ↓: alelo protector
Modificado de: Glyne P, Price M. HLA and infectious diseases. En: Lechter R, Warrens A. HLA in health and disease 2nd.
Ed. AP. 299-326.
Factores genéticos humanos en la fisiopatología de FD/FHD
Asociaciones alélicas de HLA con FHD
Autor
Chiewsilp et al.
Alelo
HLA-B13↓
Población
Referencia
Tailandia
Am J Trop Med Hyg 1981; 30(5): 1100
Cuba
Haematologia (Budap) 1987; 20(2): 83
HLA-A2↑, HLA-B↑
Paradoa et al.
HLA-A1↑, HLA-B↑
HLA-B14↓, HLA-A*29↓
Loke et al.
HLA-A*24↑, HLA-A*33↓
Vietnam
J Infect Dis 2001; 184(11): 1369
Stephens et al.
HLA-A*0203 ↓, HLA-B*52↓
Tailandia
Tissue Antigens 2002; 60(4): 309-318
México
Hum Immunol 2002; 63: 1039
HLA-B44 ↓, HLA-B62↓
HLA-B76 ↓, HLA-B77↓
HLA-A*0207↑, HLA-B*51↑
LaFleur et al.
HLA-DR*04↓
↑: alelo susceptible, ↓alelo protector
Factores genéticos humanos en la fisiopatología de FD/FHD
Estudios sobre otros genes
Gen del receptor de la vitamina D y receptor FcγRIIa:
Se reportó una asociación entre la severidad de la enfermedad y el receptor de
vitamina D
Loke H, et al. Susceptibility to dengue hemorrhagic fever on Vietnam: Evidence of an association with
variation in the vitamin D receptor and Fcγ receptor IIA genes. Am J Trop Med Hyg 2002; 67(1): 102-106.
“HLA-DR antigen frequencies in Mexican patients
with dengue virus infection:
HLA-DR4 as a possible genetic resistance factor for
dengue hemorrhagic fever”
La Fleur C, Granados J, Vargas Alarcón G, Ruíz-Morales J, Villarreal- Garza C, Higuera
L, Hernández-Pacheco G, Cutiño-Moguel T, Rangel H, Figueroa R, Acosta M, Lazcano E,
Ramos C. Human Immunology 2002; 63: 1039-1044.
Materiales y métodos
Población de estudio
34 sujetos con FHD*
47 sujetos con FD*
99 controles sanos
Definición de población mestiza mexicana**
Sujetos mexicanos de nacimiento, con antecedente de antepasados
mexicanos en al menos 2 generaciones anteriores y apellido con
derivación hispánica.
*World Health Organization. Dengue hemorrhagic fever: Diagnosis, treatment and control. Geneva
WHO, 1997.
**Lisker R. Estructura genética de la población mexicana, Salvat, 1981.
Tipificación de HLA
•5 ml de sangre venosa
•PCR-SSO
•PCR-SSOP
Análisis estadístico
•Prueba de Fisher de dos colas
•Valor de p de 0.05
•Razones de momios con intervalos de confianza a 95%
•Prueba de t
•Regresión logística
Tabla 1. Manifestaciones clínicas de pacientes con FD y FHD
FHD
Manifestación
FD
n = 34
porcentaje
n = 47
porcentaje valor de p
Fiebre
34
100
47
100
-
Mialgia
34
100
47
100
-
Hemorragia
34
100
29
61.7
< 0.00
Trombocitopenia
34
100
27
57.4
< 0.00
Artrlagia
41
91.2
45
95.7
1
Cefalea
41
91.2
46
97.9
1
Dolor retro orbital
28
82.4
38
80.9
1
Infeccion secundaria
24
80
18
58.1
0.06
Rash
25
73.5
31
66
0.05
Torniquete positivo
11
73.5
5
20
< 0.00
Hematocrito elevado
22
64.7
0
0
< 0.00
Dolor abdominal
18
52.9
20
42.6
0.12
Hipoproteinemia
8
23.5
0
0
< 0.00
Infección primaria
6
20
13
41.9
-
Ascitis
1
2.9
0
0
-
Tabla 2. Distribución y asociación de alelos de HLA-DRB1
en los participantes del estudio
FHD (n = 34)
FD (n = 47)
Controles (n = 99)
Alelo
numero
fa
numero
fa
numero
fa
DR8
15
0.441
16
0.340
33
0.116
DR4
12
0.352*
30
0.638
47
0.237
DR2
9
0.264
11
0.234
18
0.090
DR13
6
0.176
6
0.127
10
0.050
DR14
5
0.147
4
0.085
21
0.106
DR7
4
0.117
6
0.127
22
0.111
DR11
4
0.117
1
0.021+
20
0.101
DR1
2
0.058
5
0.106
10
0.050
DR3
2
0.058
2
0.042
11
0.055
DR9
2
0.058
0
0.000
3
0.015
DR12
2
0.058
0
0.000
2
0.010
DR10
1
0.029
1
0.021
1
0.005
* Frecuencia disminuida en FHD comparado con FD (p = 0.011)
+ Frecuencia disminuida en FD comparado con controles sanos (p = 0.003)
Discusión
•A pesar de tener una población de estudio pequeña es el primer estudio
que reporta una asociación en alelos de HLA de clase II
•La frecuencia de HLA-DRB1*04 fue menor en las personas que tuvieron
FHD comparados con los que tuvieron FD.
•Sujetos homocigotos para HLA-DRB1*04 tuvieron menos posibilidades de
padecer FHD en comparación con sujetos HLA-DRB1 negativos
•Sujetos con HLA-DR11 tuvieron menos posibilidades de desarrollar FD en
comparación con controles sanos.
Limitaciones
•Solamente se analizaron alelos de clase II y no de clase I
•Solamente se analizaron alelos de HLA-DR
•La muestra del estudio (81 sujetos) pudo haber sido demasiado pequeña
para poder describir otras asociaciones
•Una asociación no necesariamente explica el fenómeno biológico
Investigaciones subsecuentes
“Relación entre el complejo principal de histocompatibilidad y
la proliferación de linfocitos T ante el estímulo con antígenos
de virus dengue en pacientes que han padecido fiebre por
dengue/fiebre hemorrágica por dengue”.
Jorge A. Falcón Lezama
Instituto Nacional de Salud Pública
Metodología
Población de estudio:
~120 sujetos con antecedente de infección por virus dengue
Metodología
Tipificación de HLA de clases I y II
Ensayos de proliferación de linfocitos
Antígenos:
Virus dengue 1-4 inactivados
Proteína recombinante NS1 de Den-2
Péptidos sintéticos derivados de la proteína E Den-2*
específicos para HLA-DR4
Péptido 1: TLDEFELIKTEAKHPA
Péptido 2: NLEYTIVITPHSGEE
Péptido 3: RVQYEGDGSPCKIPF
*BAC77254
“Análisis del polimorfismo de la región promotora del gen de
TNF-α en sujetos con dengue”.
Alma Rosa García Trejo
Instituto Nacional de Salud Pública
Metodología
Población de estudio:
73 sujetos con antecedente de infección por virus dengue
162 controles sanos
Metodología
Amplificación por PCR de las regiones -238 y -308 del gen de TNF-α
COMPLEJO PRINCIPAL DE HISTOCOMPATIBILIDAD
TNF
α
4066pb
1254 pb
+131
tata box
-1123
-308
G/A
G/A
GGGCATGGGGACG
-308
-107 pb
-238
GGAATC GGAGCA
-238 -155 pb
-20
0
GenBank L11698 Homo sapiens tumo...(gi:409223) pri 21 Oct 1993
GenBank U42625 Homo sapiens TNF...(gi:1353717) pri 05- Jun
1996
GenBank X02910 Human gene for tu...(gi:37209) pri 17- Feb 1997
Resultados
FHD (31
n
TNF-α genotipo
Polimorfismo -308
TNF 1/1
TNF 1/2
TNF 2/2
27
4
0
/ 62)
(fg)
0.870
0.129
0.0
FD (39
n
37
2
0
/ 78)
(fg)
Controles
n
(162/324
(fg)
0.948
0.051
0.0
148
14
0
0.913
0.086
0.0
0.869
0.124
0.005
Polimorfismo -238
TNF G/G
TNF G/A
TNF A/A
31
0
0
1
0.0
0.0
38
1
0
0.974
0.025
0.0
n=169/338)
147
21
1
TNF-α alelos
Polimorfismo -308
TNF 1
TNF 2
58
4
0.935
0.064
76
2
0.974
0.025
310
14
0.956
0.043
0.987
0.012
n=169/338
315
23
0.931
0.068
Polimorfismo -238
TNF G
TNF A
62
0
1
0
77
1
CONCLUSIONES Y DISCUSIÓN
•Los datos obtenidos no muestran diferencias significativas en la
distribución de los polimorfismos de TNF- 238 y –308 entre pacientes con
FHD y FD.
•Se observó una tendencia de mayor frecuencia del alelo TNF2 –308 en
pacientes con FHD en relación con pacientes con FD.
•Estos datos necesitan ser analizados en el contexto de un grupo más
grande de pacientes.
•Lo anterior podría tener implicaciones importantes en la patogénesis de
las manifestaciones graves de dengue.