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Diagnóstico de
virus
fitopatógenos
Dos páginas web
• Gergerich, R.C., and V. V. Dolja. 2006.
Introduction to Plant Viruses, the Invisible
Foe. The Plant Health Instructor. DOI:
10.1094/PHI-I-2006-0414-01
http://www.apsnet.org/edcenter/intropp/Pathog
enGroups/Pages/PlantViruses.aspx
Curso: “Diagnósticos en Fitopatología.”
24 de setiembre de 2015
Vivienne Gepp
• Plant Pathology Guidelines for Master
Gardeners. Symptoms Of Viral Diseases.
http://erec.ifas.ufl.edu/plant_pathology_guidelin
es/module_06.shtml
Características generales
Criterios de clasificación
Virus fitopatógenos:
• Acido nucleico + proteína
• 90% ARN , 1 cadena
• Huésped
• Síntoma
• Forma de transmisión
• Forma
Viroides:
• ARN
• cadena simple, circular
Clasificación
• Tamaño
• Ácido nucleico
Tobacco mosaic
virus
(TMV)
Género Luteovirus
• Grupos
• Virus
• Potato leafroll luteovirus
• Barley yellow dwarf luteovirus
• Familias
• Géneros
• Especies
Tobacco mosaic
virus (TMV)
Family: Virgaviridae
Genus: Tobamovirus
Species: Tobacco mosaic virus
= Tobacco mosaic tobamovirus
Acronym: TMV
http://www.dpvweb.net/dpv/showdpv.php?dpvno=370
1
Dificultades en el diagnóstico de
virus:
Técnicas de diagnóstico
• pequeño tamaño
• Biológicas
• poca diversidad morfológica
• Físicas
• síntomas similares
• Serológicas
• síntomas variables:
• Moleculares
– cultivar
– condiciones ambientales
• ¿Una técnica es suficiente para el diagnóstico?
Diagnóstico por propiedades
biológicas:
1. Plantas huéspedes:
– ¿Cuál(es)?
– Síntomas
2. Infección de plantas indicadoras:
– ¿Cuál(es)?
– Síntomas
3. Transmisión:
– ¿Cómo?
Diagnóstico por síntomas
Síntomas
• Macroscópicos
• Microscopicos:
– Cuerpos de inclusión
– Efectos citopatológicos
(en núcleo, cloroplastos,
mitocondrias)
APS. Illustrated Glossary of Plant Pathology.
http://www.apsnet.org/edcenter/illglossar
y/Pages/I-M.aspx
Síntomas de diferente virus en
pimiento
2
Síntomas - cloróticos
Síntomas necróticos
Síntomas necróticos
Síntomas
¿Específicos de virus?
Síntomas
Los síntomas dependen de:
Planta
¿Síntomas específicos de
virus?
Patógeno
Ambiente
3
Los síntomas dependen del ambiente
Los síntomas dependen de la variedad
ej. TSWV
Plantas indicadoras
• Nicotiana spp., Solanum spp.,
Chenopodium spp., Cucumus spp.,
Phaseolus spp., Vicia spp., Pisum spp.,
Brassica spp, etc. según los casos.
Plantas indicadoras
• ¿Cuáles inocular?
• ¿Cómo reaccionan?
– Susceptible o no, sin síntomas
– Síntomas: locales y/o sistémicos
• Fuentes de información:
– Bibliografía,
– Internet
Internet
• Association of Applied Biologists.
Descriptions of Plant Viruses.
http://www.dpvweb.net/
Plantas indicadoras
• Sin síntomas
• Lesiones locales
• Síntomas sistémicos
• Brunt, A.; Crabtree K.; Dallwitz, M.; Gibbs,
A.; Watson, L. and Zurcher, E. Plant
Viruses Online. Descriptions and Lists
from the VIDE Database. http://pvo.biomirror.cn/refs.htm
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Tospovirus
Petunia sp.
Impatiens sp.
Blackberry chlorotic ringspot Ilarvirus
Métodos de transmisión
• Por injerto
• Mecánica = por savia
• Por vectores:
Rubus sp.
Chenopodium quinoa
– pulgones
– trips
– moscas blancas
– otros insectos
– nematodos
Nicotiana tabacum cv. Xanthi-nc
Pepino
Ann Appl Biol 149 (2006) 125–135
Transmisión por injerto
Wikipedia. Strawberry
vein banding virus
VIRUS INDEXING PROCEDURES
http://www2.bioversityinternational.org/publi
cations/Web_version/117/ch5.htm
http://www.fruitdise
ase.co.uk/virusrese
archpage3.asp
Transmisión mecánica
1. Macerado de planta enferma
2. Abrasivo (carborundum)
3. Planta sana
= Transmisió
Transmisión
“por jugos”
jugos”
5
Transmisión por pulgones u otros
insectos
Técnicas basadas en
características físicas
Forma y tamaño
Propiedades de sedimentación
Microscopio electrónico
Forma y tamaño
Partículas de virus:
Sombreadas
Con tinción negativa
Fuente: Walkey, 1991
Técnicas que dependen
de la proteína del virus
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Serología
Serología
1. Producción de antisuero
• Antígeno
• Anticuerpo
• Antisuero
– Policlonal
– Monoclonal
2. Técnicas serológicas - diagnóstico
Técnicas serológicas (1)
• Reacción antígeno anticuerpo
• Precipitación
Técnicas serológicas
• Difusión
• Aglutinación
http://www.scielo.br/scielo
.php?pid=S010041582001000400016&scr
ipt=sci_arttext
Técnicas serológicas
Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay
• Difusión
Enzyme Linked ImmunoSorbant Assay
(ELISA)
http://bioscienceden.blogspot.com/2010/11/en
zyme-linked-immunosorbant-assay-elisa.html
How Do You Diagnose a Virus Infection
in a Plant?
http://www.freshfromflorida.com/pi/enpp
/pathology/florida_viruses/Diag/What%2
0is%20it.html
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Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay
Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay
http://www.alibaba.com/productgs/321516400/Tetanus_IgG_Elisa_Kit.html
Serología – ventajas:
•
•
•
•
Especificidad
Rapidez
Sensibilidad
Menor dependencia de condiciones
biológicas e ambientales
• Semi-cuantitativo (ELISA)
Técnicas que detectan
del ácido nucleico del
virus
ARN de doble cadena
Hibridación de ácidos nucleicos (Sondas)
PCR
Serología - desventajas
• Detecta sólo la proteína del virus
• Cada antisuero detecta UN
virus/género/raza
• Posibles reacciones cruzadas
• Disponibilidad de antisueros
ARN de doble
cadena
J.R. Fisher. 2008. DoubleStranded RNA Analysis as a
Tool for Diagnosing Plant
Viruses. NPDN News. Vol. 3
Issue 5, May 2008
http://www.npdn.org/webfm_s
end/20
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Hibridación de ácidos nucleicos
Hibridación de ácidos nucleicos
Base: unión de un trozo conocido (sonda) a
uno desconocido, si es complementario.
• Southern Blot - ADN
• Northern Blot - ARN
“Northern blot” – Fuente: Techniques of Molecular Biology.
http://8e.devbio.com/printer.php?ch=1&id=32
Hibridación de ácidos nucleicos
PCR con primers específicos
• Clonar segmentos de virus en cuestión
• Dot-Blot
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