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RESÚMENES
Evaluación de la respuesta proinflamatoria en monocito/macrófago
y células endoteliales humanas estimuladas con lipopolisacárido de
Eikenella corrodens
Evaluating pro-inflammatory response in monocyte/macrophage
and endotelium human cells stimulated by Eikenella corrodens
lipopolysaccharide
Sebastián Bernau , Gloria Inés Lafaurie, Diego Fernando Gualtero
RESUMEN
Introducción: La periodontitis es una enfermedad multifactorial asociada a un componente poli bacteriano predominantemente Gram negativo en donde la respuesta inflamatoria conlleva pérdida de los tejidos de soporte del diente
y finalmente la pérdida dental. Se ha reportado que existe el paso de bacterias periodontales o de sus componentes a
circulación desde lesiones periodontales, en donde el sistema inmune del hospedero queda expuesto al lipopolisacárido (LPS) y se inducen respuestas sistémicas importantes. Estudios in vitro demuestran que el LPS de Porphyromonas
gingivalis induce activación de células endoteliales y macrófagos, expresión de moléculas de adhesión en células
endoteliales y formación de células espumosas; eventos que contribuirían al desarrollo de aterosclerosis. Así mismo
se han encontrado componentes de otros periodonto-patógenos como Eikenella corrodens en lesiones ateromatosas
y endocarditis pero se desconocen sus implicaciones en el desarrollo de enfermedad cardiovascular. Objetivo: Determinar el perfil de expresión de citocinas pro-inflamatorias en líneas celulares humanas de monocito (THP-1), macrófagos (U937) y en cultivos primarios de células endoteliales de arteria coronaria humana (HCAEC) estimuladas con
LPS de E. corrodens. Metodología: Células HCAEC, THP-1 y U937 fueron cultivadas in vitro y estimuladas con LPS
purificado de E. corrodens (ATCC 23834) a una concentración de 1 y 0.01 µg/ml durante 6 y 24 horas. Se evalúo la
expresión de TNFα, IL-6, IL-8 a nivel de mRNA por RT-PCR y la proteína soluble mediante el kit de citocinas inflamatorias (BD™ CBA No.cat551811). Como control se usaron células estimuladas con LPS de Escherichia coli o con
medio libre de LPS. Los experimentos fueron realizados por duplicado. La normalización y semicuantificación de los
datos de RT-PCR fue con el gen constitutivo β-actina y análisis densitométricos con el programa ImageJ. Resultados:
Luego del estímulo con el LPS de E. corrodens a las 6 y 24 horas, las HCAEC expresan mRNA para las citocinas IL-6
e IL8 y secretan las citoquinas IL12p70 e IL10 de manera soluble luego de 24 horas de estímulo. A las 24 horas de
estímulo los monocitos THP-1 expresan mRNA de TNF-α e IL-6 mientras que los macrófagos U937 expresan mRNA
para IL-6 e IL8. Asi mismo en la evaluación de citocinas solubles, se encontró que THP-1 tras el estímulo secretan IL1β, IL-10, TNF-α, IL-12p70. Mientras que los macrófagos U937 solo secretaron IL-10. Conclusión: Estos resultados
preliminares sugieren que LPS de E. corrodens inducen una respuesta proinflamatoria in vitro en el modelo monocito
THP-1 y célula endotelial HCAEC, mientras en el modelo de macrófago U937 al parecer la respuesta pro-inflamatoria se auto regula mediante la secreción de la citocina anti-inflamatoria IL-10. Por lo anterior, la línea celular U937
no es un buen modelo para la evaluación de respuesta inflamatoria mediada por antígenos de periodontopatógenos.
Palabras clave: Periodoncia, Citoquinas, Respuesta inflamatoria, Lipopolisacáridos.
Unidad de Investigación Básica Oral - UIBO / Facultad de Odontología Universidad El Bosque
1. Biólogo - Universidad el Bosque
2. Odontóloga, Especialista en Periodoncia - Directora UIBO
3. Licenciado en Biología y Química, Magíster en Biología. Doctor en Biotecnología
Este trabajo fue financiado por la fundación del Banco de la Republica (proyecto 2706)
Autor responsable de correspondencia: Diego Fernando Gualtero
Correspondencia: [email protected]
Citar como: Bernau S, Lafaurie GI, Gualtero DF. Evaluación de la respuesta proinflamatoria en monocito/macrófago y células endoteliales
humanas estimuladas con lipopolisacárido de Eikenella corrodens. Journal Odont Col. 2013;6(12):63-68
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Número 12, Diciembre 2013
RESÚMENES
ABSTRACT
Introduction: Periodontitis is a multifactorial disease associated to a poly-bacteria component predominantly Gram
negative whose inflammatory response causes breakdown of tooth-supporting tissues and eventually tooth lost. It has
been reported that periodontal-pathogen bacteria or their components are delivered to the circulation from the periodontal lesion, and therefore the host immune system is exposed to lipopolysaccharides (LPS) and important systemic
responses are induced. In vitro studies indicate that Porphyromonas gingivalis LPS induce activation of endothelial
and macrophage cells, expression of adhesion molecules in endothelial cells and formation of foamy cells, events that
may contribute to the development of atherosclerosis. Additionally it has been reported that components from other
periodontal-pathogens including Eikenella corrodens in atheromatous lesions and endocarditis but it is not established whether they are implicated in the development of cardiovascular disease. Objective: To establish the profile of
expression of pro-inflammatory cytokines in human cell lines of monocyte (THP-1), macrophage (U937) and primary
cultures of endothelial cells from human coronary artery (HCAEC) stimulated by LPS from E. corrodens. Method:
Cells HCAEC, THP-1 and U937 were cultured in vitro and stimulated by purified E. corrodens (ATCC 23834) LPS at
concentrations of 1 to 0.01 µg/ml for 6 and 24 hours. The expression of TNFα, IL-6, IL-8 was evaluated as mRNA by
RT-PCR and the soluble protein was measured using an inflammatory cytokine kit (BD™ CBA cat number 551811). As
control were used cells stimulated by Escherichia coli LPS or LPS-free culture media. All the experiments were performed by duplicate. Normalization and semiquantification of the RT-PCR f data was carried out using the constitutive
β-actin gene and densitometric analysis using the ImageJ program. Results: under stimulation by E. corrodens LPS for
6 and 24 hours, HCAEC cells express mRNA for IL-6 and IL8 and secrete soluble cytokines IL12p70 and IL10 after 24
hour stimulation. 24 hour stimulated THP-1 monocytes express mRNA for TNF-α and IL-6 while U937 macrophages
express mRNA for IL-6 and IL8. The evaluation of soluble cytokines, shows that stimulated THP-1 secrete IL-1β, IL10, TNF-α, IL-12p70; U937 macrophages only secreted IL-10. Conclusion: The preliminary results obtained suggest
that E. corrodens LPS in vitro induces pro-inflammatory response in the THP-1 monocyte model and in endothelium
HCAEC cell, while in the U937 macrophage model pro-inflammatory response is probably self-regulated by IL-10
secretion. Hence, the U937 cell line is not a good model to evaluate inflammatory response mediated by periodontal-pathogen antigens.
Key words: Periodontics. Cytokines. Lipopolysaccharides. Inflammatory response.
Journal Odontológico Colegial - ISSN: 2011-4095
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