Download Se dispone de un aminoácido que posee los siguientes grupos

PROBLEMAS DE ELECTROFORESIS / M3 / FISICA
PROBLEMAS DE ELECTROFORESIS
1.- Responda V o F, justificando su respuesta:
a. La movilidad electroforética depende del pH del buffer de corrida, del campo eléctrico
aplicado y de la temperatura.
b. El aumento de la viscosidad del medio de corrida provoca un aumento en la distancia
recorrida por un anfolito pero no modifica la movilidad del mismo.
c. A pH constante, la movilidad electroforética disminuye cuando aumenta la fuerza iónica
del buffer, pero el pI de la sustancia no se modifica.
d. Cuando se realiza una electroforesis colocando una única tira en la cuba y Vab = 250 v,
un aminoácido se desplaza 6 centímetros. Si en vez de una sola tira se hubiesen
colocado dos tiras idénticas a la primera en dicha cuba, el aminoácido se hubiera
desplazado 12 cm en las mismas condiciones.
RESPUESTA: a) F; b) F; c) V; d) F
2.- Una macromolécula puede encontrarse en dos estados isoméricos. En el estado A adquiere
forma esférica y en el B de prolato –forma de huevo-. Suponiendo que los grupos ionizables se
encuentran en la superficie molecular en ambos estados:
a. Compare sus movilidades a un determinado pH
b. ¿Coinciden los pI de ambos estados isoméricos?
c. Grafique –en un mismo par de ejes- movilidad en función de pH para ambas
conformaciones moleculares.
d. Grafique –en un mismo par de ejes- movilidad en función de pH para la conformación A
si se usan dos series de buffers de distinta fuerza iónica tales que f i 2> fi 1.
RESPUESTA: a) A > B; b) sí
3.- Se desea determinar el punto isoeléctrico de una proteína. Los datos experimentales
obtenidos en las distintas corridas son:
pH
intensidad
(mA)
tiempo
(minutos)
distancia
recorrida por
la
proteína
(cm)
2.0
4.0
6.0
8.0
10.0
4.0
4.0
7.0
3.0
3.0
20
25
40
25
30
- 7.0
- 4.0
- 1.0
2.0
5.0
distancia
recorrida por
el
dextrano
(cm)
0.0
0.0
- 0.5
- 1.0
- 2.0
Longitud de cada tira = 20.0 cm. Resistencia de cada tira = 10 5 .
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a. Determine el campo eléctrico aplicado en cada corrida.
b. Calcule las movilidades de la proteína a cada pH.
c. Calcule pI de la proteína.
RESPUESTA: a) y b)
pH
Campo El.
movilidad
2
20
-1.75
V/cm
10 m2 min-1 V-1
-6
4
20
-0.80
6
35
-0.04
8
15
0.80
10
15
1.56
c) PI = 6.07
4.- Se realizan corridas electroforéticas a distintos pH, de 3 de las siguientes sustancias:
Sustancia
A
B
C
D
E
F
pI
2.0
4.5
6.0
8.5
10.0
11.0
Si los esquemas correspondientes a las corridas realizadas son los siguientes:
+
1
*
2
*
3
*
-
+
pH = 5.0
2
*
1
*
2
+ *
-
3
*
pH = 9.0
1
*
3
*
-
pH = 10.5
Determine a qué sustancias podrían corresponder las muestras 1, 2 y 3 (Desprecie el flujo
electroendosmótico)
RESPUESTA: muestra 1 sustancia D; muestra 2 sustancia A y muestra 3 sustancia F
5.- Se efectúa una electroforesis sobre papel de 3 sustancias -A, B y C-. El pI de A es 8.0 y C
es un polianfolito con tres grupos carboxilo y un grupo amino en su estructura. En el esquema
se han omitido los polos aplicados en los extremos de la tira.
B
*
C
*
A
*
pH = 9.0
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Considerando que el tamaño molecular de las tres sustancias es aproximadamente el mismo:
a. ¿Qué polo corresponde al extremo izquierdo?
b. La sustancia A, a pH 9.0, ¿tiene carga neta positiva o negativa? Explique su migración
hacia el cátodo.
c. ¿Corresponde B a una especie química sin grupos ionizables?
d. Estime el pI de B. Para responder, ¿es importante que el PM de las tres sustancias sea
aproximadamente el mismo?
RESPUESTA: a) positivo; b) negativa; efecto electroendosmótico; c) no; d) PI < 8; sí
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