Download TP Grupo 5

Trabajo Practico: Efecto de compuestos adrenérgicos en la diferenciación y actividad de
macrófagos murinos y humanos.
Docentes:
Lic. Ezequiel Rivero ([email protected])
Lic. Lucia Gargiulo ([email protected])
Lic. Mara De Martino ([email protected])
Dra. Andrea Ziblat ([email protected])
Fecha tentativa de inicio: Principios de Abril
Antecedentes
Los receptores adrenérgicos son los receptores canónicos de la epinefrina (EPI) y
norepinefrina, moléculas mediadoras de las respuestas fisiológicas al estrés. Existen 9 subtipos de
estos receptores (Alexander y col., 2015). Nuestro grupo ha descripto que la estimulación de
receptores β2-adrenérgicos disminuye la proliferación y el crecimiento tumoral de células de cáncer
de mama humanas y murinas (Perez Pinero y col., 2012). Más recientemente observamos que el
agonista β2-adrenérgico Salbutamol (SALB) es capaz de inhibir la migración, invasión y el
desarrollo de metástasis de células de cáncer de mama humano en un modelo de metástasis
experimentales in vivo en animales inmunodeficientes (SAIC, 2015). Resultados similares en
proliferación, crecimiento tumoral y migración se obtuvieron con el agonista β-adrenérgico
Isoproterenol (ISO) (Bruzzone y col., 2014). El ISO, a diferencia del SALB, activa no sólo el
receptor β2-adrenérgico sino también a los subtipos β1 y β3.
Otros trabajos sugieren que la estimulación de estos receptores podría, por el contrario,
estimular la progresión tumoral. En un modelo murino de cáncer de mama en el cual el estrés
aumentó las metástasis a ganglio y pulmón, Sloan y col. (2010) observaron un aumento en la
infiltración de macrófagos en el tumor primario junto con un aumento en la expresión de genes
prometastásicos (MMP9, VEGF, etc) y polarización a M2 (fenotipo de macrófagos con actividad
protumoral). Resultados similares se obtuvieron con la estimulación farmacológica de receptores βadrenérgicos con ISO. Ha sido descripto que los macrófagos expresan los tres subtipos de
receptores β.
Hipótesis
Los compuestos adrenérgicos, que inhiben el crecimiento tumoral in vitro y en ratones
inmunodeficientes, podrían tener un efecto pro-tumoral sobre macrófagos asociados al tumor en
ratones wild type o inmunocompetentes.
Objetivo General:
1. Determinar si compuestos adrenérgicos como el SALB e ISO, inhibidores del crecimiento
tumoral in vitro y en ratones inmunosuprimidos podrían tener efectos pro-tumorales en
ratones wild type a causa de su acción sobre macrófagos.
2. Evaluar si ambos compuestos ejercen efectos diferentes sobre los macrófagos debido a su
selectividad por los distintos subtipos de receptor β-adrenérgico.
Objetivos específicos:
1. Determinar el efecto de SALB, EPI e ISO en la polarización de macrófagos M1/M2 por
citometría de flujo en líneas celulares de monocitos humanos THP-1 y/o U937.

El tratamiento durante 24 y 48hs de la línea celular de macrófagos murina RAW
264.7 con EPI induce un cambio de fenotipo hacia M2 (Qin y col., 2015).

La línea THP-1 de monocitos se diferencia a macrófagos al alcanzar una alta
confluencia o mediante un tratamiento con PMA 200nM durante 3 días (+ 5 días sin
tratamiento) según Daigneault et al. (2010).
2. Evaluar in vitro el efecto de macrófagos peritoneales murinos tratados in vitro con SALB,
EPI e ISO sobre la proliferación y migración de líneas celulares de cáncer de mama murino.
3. Evaluar in vitro el efecto de macrófagos peritoneales extraídos de ratones Balb/c tratados
con SALB e ISO sobre la proliferación y migración de líneas celulares de cáncer de mama
murino.
4. Evaluar por Western Blot la polarización de macrófagos M1/M2 tratados in vitro e in vivo
con los compuestos adrenérgicos.
 Aumento en los niveles de pSTAT1-2 están asociados con polarización a M1 y
aumento de pSTAT3-6 a M2. (Tugal y col., 2013)
Cronograma aproximado de trabajo:
Bibliografía
Alexander SP, Davenport AP, Kelly E, Marrion N, Peters JA, Benson HE, Faccenda E, Pawson AJ,
Sharman JL, Southan C, Davies JA (2015). The Concise Guide to PHARMACOLOGY 2015/16: G
protein-coupled receptors. Br J Pharmacol 172(24): 5744-5869.
Bruzzone A, Sauliere A, Finana F, Senard JM, Luthy I, Gales C (2014). Dosage-dependent
regulation of cell proliferation and adhesion through dual beta2-adrenergic receptor/cAMP signals.
FASEB J 28(3): 1342-1354.
Daigneault M, Preston JA, Marriott HM, Whyte MK, Dockrell DH (2010). The identification of
markers of macrophage differentiation in PMA-stimulated THP-1 cells and monocyte-derived
macrophages. PLoS One 5(1): e8668.
Perez Pinero C, Bruzzone A, Sarappa MG, Castillo LF, Luthy IA (2012). Involvement of alpha2and beta2-adrenoceptors on breast cancer cell proliferation and tumour growth regulation. Br J
Pharmacol 166(2): 721-736.
Qin JF, Jin FJ, Li N, Guan HT, Lan L, Ni H, Wang Y (2015). Adrenergic receptor beta2 activation
by stress promotes breast cancer progression through macrophages M2 polarization in tumor
microenvironment. BMB Rep 48(5): 295-300.
Sloan EK, Priceman SJ, Cox BF, Yu S, Pimentel MA, Tangkanangnukul V, Arevalo JM, Morizono
K, Karanikolas BD, Wu L, Sood AK, Cole SW (2010). The sympathetic nervous system induces a
metastatic switch in primary breast cancer. Cancer Res 70(18): 7042-7052.
Tugal D, Liao X, Jain MK (2013). Transcriptional control of macrophage polarization. Arterioscler
Thromb Vasc Biol 33(6): 1135-1144.