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PRODUCCION IN VITRO DE PLANTA DE CALIDAD. PRODUCCION DE MINITUBERCULO DE PAPA EN INVERNADERO Y CAMPO Responsable: Dr Humberto Antonio Lòpez Delgado Colaboradores: Dr. Roman Flores López M. en C. Victor Magallanes González Ing .Victor Magallanes González Sector: Agricola Sistema producto: Papa Tipo de proyecto: Transferencia de tecnología Eslabón: Producción Estatus del Proyecto: Nuevo Fecha de inicio: junio 2010 fecha de termino: mayo 2011 Grupo de interés: Productores Municipios: Metepec, Jiquipilco, San Jose del Rincon, Zinacantepec, Tenango del Valle. Palabras clave: Micropropagación, plantas libres de virus, minitubérculos, variedades mejoradas. 1 Introducción Entre las plantas cultivadas del mundo, la papa Solanum tuberosum L. (Fam. Solanaceae) ocupa el cuarto lugar después del trigo, maíz y arroz. En México, la papa se cultiva en 21 estados de la Republica y gracias a la diversidad climática del país se dispone de tubérculos todo el año, ocupando el sexto lugar de importancia como alimento de los mexicanos (Cepeda y Gallegos, 2003). Un factor limitante de la producciòn de papa es la insuficiencia de semilla con calidad fitosanitaria, fisiològica y pureza varietal ya que la utilizada en la actualidad es manejada a nivel de productor y conforme a SNICS solo el 10% es generada con el esquema de certificación o selección de semilla oficial. Los métodos de manejo en campo, almacenamiento y manejo de postcosecha inadecuados contribuyen a que la semilla pierde su calidad fisiológica y fitosanitaria. Por ello es necesario establecer un esquema de manejo adecuado partiendo de semilla sana. En México el Programa Nacional de Papa del INIFAP en 1982 estableció en el país el sistema de producción de semilla empleando el sistema in vitroinvernadero-campo (López-Delgado et al 1985). Este sistema debe emplearse tanto en nuevas variedades como en las de reciente introducción. En el estado de méxico se siembran aproximadamente 5000 Ha de papa, anteriormente se sembraban 6400 Ha, sin embargo por factores como enfermedades, adversidades del clima, falta se semilla, altos costos de producción y bajo precio de venta, ocasionaron el desaliento para la siembra por parte de productores. Cabe señalar, que actualmente los productores tienen identificado; el mercado de papa en fresco, las variedades que prefiere el consumidor, por lo que la principal demanda es la disponibilidad de variedades de uso más común, siendo la principal problemática del productor la producción de semilla de papa en el estado. Considerando que la semilla producida deberá ser de variedades con resistencia a las principales enfermedades, con calidad y libres de virus. Estas necesidades se pueden satisfacer no solo con variedades comerciales ya existentes, sino también con materiales nuevos generados por el INIFAP tanto las 2 variedades como nuevos clones los maneja el INIFAP. La disponibilidad anterior permitiría reducir costos de producción y satisfacer la demanda. Antecedentes El Programa Nacional de Papa del INIFAP en 1982 implemento por primera vez en el país el sistema de producción de semilla in vitro-invernadero-campo (LópezDelgado et al. 1985) obedeciendo a la falta de semilla libre de virus y de variedades con tolerancia a Phytophtora infestans, nematodo dorado y con calidad para industria, desde entonces el Programa a capacitado a técnicos y productores tecnificados en técnicas de micropropagacion y obtención de minituberculos en invernadero. Justificacion Contar con variedades que disminuyan el número de aplicaciones de agroquímicos de 25 a 10 con doble uso, industrial y en fresco, con tolerancia a punta morada, tizón tardio, nematodo dorado y de ciclo intermedio entre 90 y 70 días. Problematica Existe falta de semilla sana, libre de virus de variedades con tolerancia a phytophtora infestans, punta morada y nematodo dorado, tanto de variedades comerciales como de nuevos clones. Justificación Contar con variedades que disminuyan el número de aplicaciones de agroquímicos de 25 a 10 con doble uso, industrial y en fresco, con tolerancia a punta morada, tizón tardio, nematodo dorado y de ciclo intermedio entre 90 y 70 días. Evaluación Ex Ante El potencial de producción de semilla certificada es de 42 ton y la media nacional por hectárea es de 25 ton, se pierde aprox. el 45% del potencial productivo. Solo hay semilla para el 10% de la necesidad nacional para las 67 000ha, requiriéndose aprox. 171 000 Ton de semilla. El método de producción de semilla in vitro-invernadero-campo implementado por INIFAP en 1982, permitirá aumentar 3 la disposición de semilla libre de virus de materiales comerciales y generados por INIFAP. Materiales y Mètodos Se trabajara con 20 genotipos de clones avanzados obtenidos a través de mejoramiento genético. Se iniciara a partir de brotes de tubérculo de cada genotipo los cuales se incorporaran in vitro en medio MS. A los 30 días de establecidas la plantas se multiplicaran con el fin de aumentar la población para realizar pruebas de virosis mediante la prueba serológica de ELISA. Una vez identificados los virus presentes en cada genotipo se diseñaran los diferentes tratamientos de termoterapia que se requieren de acuerdo a los diferentes virus presentes. El método de termoterapia a emplear será el previamente generado en este laboratorio (López-Delgado et al. 2004). Se procederá a aplicar termoterapia in vitro con 50-80 plantas por cada material, el régimen de temperatura (30- 42 ºC) temperaturas continuas o discontinuas y el periodo de termoterapia (4-6 semanas) estará en función del o los virus en cuestión. Al cabo de la termoterapia se procederá a cultivar los meristemos axilares para subcultivarlos en MS por 30 dias. Se evaluara porcentaje de sobrevivencia al salir de termoterapia y 30 dias después del subcultivo de meristemos axilares para cada genotipo. Las plantas obtenidas se subcultivarán con el fin de multiplicarlas y al cabo de 30 días se muestrearan para probar su estado de virosis mediante serología (ELISA) (Clark y Adams 1975). Las plantas que se encuentren con reacción negativa a las virosis detectadas al inicio, se someterán a micropropagación por 2-3 meses hasta escalar el número a 500 plantas por genotipo, esto dependerá del número de plantas libres de virus que se obtengan a partir de termoterapia. Las microplantas obtenidas se transferirán a suelo en condiciones de invernadero para al cabo de 4 meses se obtendrán aproximadamente 2500 minitubérculos por genotipo, los cuales podrán ser llevados a campo en campos de productores en el segundo año. Bibliografia López D. H., Zavala Q. T. y Cadena H. M. 1985. Obtención y con conservación de genotipos de papa libres de virus. Folleto Misceláneo No. 3 SARH-INIA. 4 López-Delgado H., Mora-Herrera M.E., Zavaleta-Mancera H.A, Cadena-Hinojosa M. and Scott I.M. 2004. Salicylic acid enhances heat tolerance and potato virus X (PVX) elimination during thermotherapy of potato microplants. American Journal of Potato Research. 81: 161-166. Demanda Los productores tienen identificado el mercado de papa en fresco, las variedades que prefiere el consumidor, por lo que la principal demanda es la disponibilidad de variedades de uso más común, siendo la principal problemática del productor la falta de semilla de papa en el estado. Producto/Componente 500 microplantas libres de virus de 17 genotipos generados por INIFAP y con tolerancia a Phytophtora infestans y punta morada. 500 microplantas de 3 variedades comerciales. Tiempo estimado 7-8 meses. 2500 minitubérculos de cada genotipo a partir de las microplantas obtenidas. Tiempo estimado 3-4 meses. Cronograma de actividades Actividad Trimestre 1 Incorporación X Trimestre 2 Trimestre 3 Trimestre 4 in vitro y pruebas de virosis a 20 genotipos Termoterapia X subcultivo de yemas y multiplicacion para prueba ELISA Escalamiento X 5 de plantas negativas a virosis al numero deseado Siembra en X invernadero y producción de minituberculos Recursos Solicitados por Trimestre a Fundación Produce Trimestre 1 Trimestre 2 Trimestre 3 Trimestre 4 Total $80000 $65000 $50000 $50000 $200000 Resumen de memoria de calculo Reactivos, medios de cultivo, $ 50 000 cristalería, tubos de cultivo, tapas para frascos de cultivo, alcohol, buffers, gas, consumibles en gral.herramientas. Antisueros para prueba ELISA, placas, $30 000 reguladores del crecimiento. Mantenimiento de equipo y cuarto de $80 000 incubación, iluminación, sistema refrigeración, mantenimiento equipo de computo, pago servicios. Combustible, viaticos, compras $20 000 directas con provedores. Papeleria, publicaciones, un Congreso $15 000 6 Materiales invernadero, consumibles $ 50 000 TOTAL $ 245 000 Resumen de memoria de calculo Valor de minitubérculos: 70 plantas/m2, considerando producción de 5minis/pl = 350 minis/m2. Producción de minis en 1000 m2= 350 000 minis x $3.00 c/u = $1050 000. Valor de tubérculos producidos en campo: 3750 plantas/1000 m2 = 5.6 Ton, $ 9.00/Kg = $50 400. Relación Beneficio Costo La producción de semilla a partir de microplantas en invernadero es de 350 000 minitubérculos en 1000 m2 lo que tiene un valor de $ 1050 000 considerando el minituberculo a $3.00. Sin embargo el valor de producción de semilla en 1000 m 2 de campo es de $ 50 400, considerando a $9.00/ kg. Fin Mejorar la calidad del tuberculo-semilla de papa en el estado de mexico. Proposito Aumentar el uso de tuberculo-semilla de papa de calidad en el estado de mexico. Productos/Componentes 1 Guia tecnica para la produccion de semilla. Indicadores: Manuscrito que incluye las tecnicas de obtencion de plantas libres de virus y micropagacion al final de los 12 meses de duracion del proyecto en su primer año. Medios de verificación: Documentos 2 Validacion de inovacion al metodo de obtencion de plantas libres de virus. Indicadores: Mayor numero de plantas con mayor tolerancia a termoterapia, mayor porcentaje de plantas termotolerantes y libres de virus, mayor numero de plantas libres de virus disponibles para la micropropagacion, en menor tiempo. Medios de verificación: Plantas disponibles en cada etapa de la termoterapia y micropropagación. Supuestos Existe experiencia de 28 años en el laboratorio del INIFAP en obtención de plantas libres de virus respaldada con publicaciones y en la obtencion de minituberculos 7 en invernadero, por lo que no existe riesgo de fracaso en terminos tecnicocientificos para no obtener los productos deseados Impactos Ambientales Se reducirá el numero de aplicaciones de agroquímicos de 25 a 10 por ciclo. Impactos económicos Se aumentara la disponibilidad de semilla sana reduciendo la deficiencia de semilla existente, ya que el potencial de producción de semilla certificada es de 42 Ton y la media nacional por hectárea es de 25 Ton, se pierde aprox. El 45% del potencial productivo. Impacto Social Se aumentara la disponibilidad de semilla libre de virus disponible ya que solo hay semilla para el 10% de la necesidad nacional para las 67 000Ha, requiriéndose aprox. 171 000 Ton se semilla. Impactos Tecnologicos o cientificos Se validara una inovación al método de obtención de plantas libres de virus que aumenta el porcentaje de sobrevivencia a la termoterapia y el número de plantas libres de virus. Se pondrán a disposición 17 nuevos genotipos libres de virus generados por el INIFAP y 3 variedades comerciales. Beneficiarios directos Román Maldonado Castillo: Jiquipilco: 712 139 26 42 Gabriel García Rojas : San Jose del Rincon: 722 394 81 96 Tito de la Cruz Garcia: Zinacantepec Mario Velázquez Mejia: Tenango del Valle Grupo de trabajo Colaborador: Julián Víctor Magallanes González. Proporcionara tubérculos de 17 nuevos genotipos obtenidos por mejoramiento genético. siembra de microplantas en invernadero para obtención de minitubérculos. Colaborador: Román Flores López. Siembra de microplantas en invernadero para 8 la obtención de minitubérculos. Fortaleza institucional El programa de papa cuenta con 28 años de experiencia en la obtención de plantas libres de virus en papa y en micropropgacion, cuenta con 17 nuevos genotipos obtenidos por fitomejoramiento que pone a disposición al presente proyecto. El laboratorio ha capacitado y asesorado a lo largo de estos años a laboratorios nacionales, de centroamerica y del Caribe, cuenta con infraestructura propia para la obtención de plantas libres de virus y micropropagacion, nuestro laboratorio ha inovado la metodologia de termoterapia que permite aumentar la sobrevivencia de plantas al salir de termoterapia y también aumentar el número de plantas libres de virus, dicha metodología esta publicada en American Journal of Potato Research (Lopez-Delgado et al. 2004)(ver bibliografia). Lo anterior permite ventajas de eficiencia en calidad y tiempo en relación a laboratorios particulares, adicionalmente nuestro laboratorio cuenta con personal con experiencia en las técnicas a utilizar, asi como equipo para tomar lecturas de virosis por la técnica de ELISA, aumentando la precision del diagnostico, se tiene la infraestructura y experiencia para la obtención de minitubérculos en invernadero para las necesidades del proyecto. Comentarios aclaratorios Se anexa el articulo : LÓPEZ-DELGADO H., MORA-HERRERA M.E., ZAVALETA-MANCERA H.A, CADENA-HINOJOSA M. AND SCOTT I.M. 2004. SALICYLIC ACID ENHANCES HEAT TOLERANCE AND POTATO VIRUS X (PVX) ELIMINATION DURING THERMOTHERAPY OF POTATO MICROPLANTS. AMERICAN JOURNAL OF POTATO RESEARCH. 81: 161-166. 9 En donde el responsable del presente proyecto aparece como primer autor, en dicho articulo se demuestra una metodologia que permte aumentar la tolerancia a la termoterapia y se incrementa el numero plantas que se obtienen libres de virus, dicho método fue desarrollado en nuestro laboratorio como resultado de la experiencia acumulada en esta área y se empleara en el presente proyecto 10