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XIX Verano de la Investigación Científica y Tecnológica del Pacífico EVALUACIÓN BIOLÓGICA DE ALIMENTOS, PRODUCTOS NATURALES Y SUS COMPUESTOS María Irene Cornelio-Martínez1+, Luis Alberto Madrigal-Pérez1, 2 y Minerva Ramos-Gómez2* 1 Instituto Tecnológico Superior de Ciudad Hidalgo. 2Universidad Autónoma de Querétaro. + Estudiante: [email protected]. *Asesora: [email protected] El envejecimiento es un proceso gradual, en el que las funciones metabólicas se ven disminuidas a lo largo del tiempo y que todo ser vivo presenta. Se han propuesto varias teoría para explicar porque ocurre el envejecimiento, de entre las cuales, la más aceptada es la que propuso Harman en 1956, que indica que el consumo normal de oxígeno de los organismos produce subproductos oxidantes que dañan los principales componentes celulares, esta acumulación de daños conlleva al envejecimiento del organismo y subsecuentemente la muerte del mismo. Las células han adquirido sistemas de defensa en contra de los insultos oxidantes, uno de los reguladores maestros de este sistema de defensa antioxidantes es el factor transcripcional Yap1p de Saccharomyces cerevisiae, el cual es un factor transcripcional que regula la mayoría de los sistemas antioxidantes en la levadura. Por tal motivo se está trabajando con la cepa mutante del gen que codifica para la proteína Yap1p de la levadura, para conocer cómo es que lleva acabo el combate al estrés oxidativo, bajo diferentes condiciones. Para hacer la determinación y lograr detectar la función de Yap1p se están realizando ensayos de RT-PCR, la cual es una técnica eficiente para lograr la obtención de RNA y convertirlo en cDNA. El RT-PCR es una Reacción en Cadena de la Polimerasa en Tiempo Real. La diferencia que presenta RT-PCR es que es una técnica cuantitativa y no cualitativa como la PCR. La RT-PCR nos puede mostrar la cantidad de DNA presente en cada ciclo al momento de amplificar, ya que esta realiza sus mediciones en la etapa exponencial de la reacción donde se está presentado el crecimiento de la levadura. En esta técnica se pueden usar mRNA que nos sirven como referencia porque se transcriben de manera invariables a los cambios ambientales, a estos se les conoce como Housekeeping (UBC6, ubiquit ligasa E3 C6), gen que se utiliza como control). También se utilizan cebadores, lo cuales permiten la amplificación del cDNA y estos al unirse con un agente fluorescente (SYBR GREEN) permite la emisión de la fluorescencia y nos demuestren la presencia de cDNA, en este caso estamos trabajando con cuatro primers, ACC1 (acetil CoA carboxilasa), HXK2 (hexocinasa 2) y COX12 (subunidad c del complejo III), los cuales trabajan a diferentes temperaturas. El presente proyecto aún no ha concluido ya que hasta el momento solo se ha logrado amplificar el cDNA de ACC1 y HXK2, esto es debido a que todos los primers se amplifican a diferentes temperaturas y aun no se ha encontrado la ideal para amplificar COX12 y UBC6. Sin embargo, el RNA de la levadura se ha obtenido exitosamente por lo cual se ha logrado una correcta amplificación de cDNA. © Programa Interinstitucional para el Fortalecimiento de la Investigación y el Posgrado del Pacífico Agosto 2014
