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FARMACIA Y BIOQUÍMICA
BIOQUÍMICA I
DETERMINACIÓN DE LA NATURALEZA PROTEICA DE LA AMILASA SALIVAL
I. INTRODUCCIÓN
Los organismos vivos pueden obtener y gastar la energía más rápidamente debido a la presencia de
catalizadores biológicos llamados enzimas. Como sucede con los catalizadores inorgánicos, las enzimas
modifican la velocidad de una reacción química sin afectar el equilibrio final y sólo se requieren
pequeñas cantidades para efectuar la transformación de un gran número de moléculas de sustrato.
Sin embargo, a diferencia de la gran mayoría de catalizadores inorgánicos, las enzimas son bastantes
específicas, ya que catalizan un número comparativamente pequeño de reacciones y, en algunos casos,
pueden tener solo una reacción.
Las enzimas pueden ser descritas como catalizadores complejos de origen biológico que tienen un alto
grado de especificidad y eficiencia. Esto permite que las reacciones químicas dentro de una célula
ocurran rápidamente a través de vías bien definidas.
Sin estas proteínas especializadas, la vida tal como es no podría existir.
Para poder mostrar la actividad enzimática se debe tener presente fundamentalmente que la reacción
catalítica de las enzimas es de carácter específico, es decir, cada reacción química debe ser
catalizada por una determinada enzima.
El reactante o sustancia química que reacciona para dar un producto en un sistema se denomina
sustrato. Habría entonces tantos sistemas enzimáticos como sustratos reaccionantes existen en un
organismo vivo.
Debido a que sólo se necesitan muy bajas concentraciones de enzima para catalizar una reacción dada,
sólo muy pocas enzimas pueden medirse directamente.
La determinación de la actividad catalítica de una enzima en un medio biológico involucra dos aspectos:
uno cualitativo y otro cuantitativo.
En términos cualitativos se debe poner de manifiesto la presencia en el medio de la enzima en estudio.
Hecho esto se debe proceder a determinar la cantidad en que se halla presente. Par lo primero se
recurre a la reacción específica por ella catalizada. En cuanto a la actividad de enzima presente, así
como en la mayoría de los casos es imposible determinar en términos absolutos ( por ejemplo,
miligramos o microgramos de proteína enzimática), ya que por lo general se trata de medios que
contienen una mezcla compleja de diversas proteínas además de la proteína en estudio.
En general, la actividad de cualquier sistema enzimático puede ser demostrada de dos maneras:
1.
Verificando el sustrato no transformado (sustrato residual) después de un tiempo
determinado de incubación en condiciones específicas de pH y temperatura.
2.
Verificando los productos liberados después de un tiempo determinado de incubación en
condiciones específicas de pH y temperatura.
Q.F. FREDY MARTOS RODRÍGUEZ
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La finalidad del presente trabajo experimental es determinar la actividad enzimática, utilizando la
enzima amilasa salival, que tiene la capacidad de producir degradación del almidón en maltosa (disacárido
reductor) y algo de glucosa, como ejemplo de un sistema enzimático.
II. OBJETIVOS
Demostrar la actividad catalítica de la amilasa salival, determinando:
-
La presencia de almidón no transformado (sustrato residual).
-
Determinando la presencia de carbohidratos reductores (productos de la reacción).
III. MATERIALES Y REACTIVOS
- Solución de almidón PH 6,0 al 1%
- Cloruro de sodio 0,1 M
- Amilasa salival 1%
- Ácido clorhídrico 0,05N
- Solución yodada
- Reactivo Folin Wu
IV. DIAGRAMA EXPERIMENTAL
1.
Armar el siguiente sistema:
Componentes
Solución de almidón 1% pH 6,0
Solución de cloruro de sodio 0,1 M
Agua destilada
Tubo (mL)
I
5
1
4
II
5
1
3
- Mezclar los tubos y colocarlos al baño María a 37 °C por 5 minutos.
- Agregar 1 mL de amilasa salival 1% al tubo II.
- Volverlos a colocar al baño María a 37 °C durante 10 minutos.
2. Control de la actividad enzimática por el sustrato residual:
-
Inmediatamente cumplidos los 10 minutos, transferir 0,5 mL a sus correspondientes tubos
del siguiente cuadro.
Componentes
Ácido clorhídrico 0,05N
De los tubos I y II
Solución yodada
Tubo (mL)
I
5,0
0,5
0,5
II
5,0
0,5
0,5
-
Mezclar los tubos.
-
Observar y anotar los resultados de cada tubo de acuerdo a la intensidad del color
resultante.
3. Control de la actividad enzimática por los productos formados (Folin Wu):
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Componentes
De los tubos I y II
Solución cúprica alcalina
Hervir 8 minutos
Luego enfriar
Solución fosfomolíbdica
Agua destilada
Tubo (mL)
I
1,0
1,0
II
1,0
1,0
1,0
2,0
1,0
2,0
-
Mezclar los tubos.
-
Observar y anotar los resultados de cada tubo de acuerdo a la intensidad del color
resultante.
V. RESULTADOS
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VI. DISCISIÓN
VII. CONCLUSIONES
VIII. BIBLIOGRAFÍA
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ESUQMA DEL PROCEDIMIENTO DE LA PRÁCTICA
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