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UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA
FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS
UNIDAD DIDACTICA DE INMUNOLOGIA Y MICROBIOLOGIA
TERCER AÑO
ACTIVIDAD PRACTICA NO. 16
METODOS DIAGNOSTICOS DE HEPATITIS
Dr. Fernando Mérida
INTRODUCCION
Para el diagnóstico de las enfermedades, el médico debe tomar en consideración el patrón
epidemiológico de la enfermedad, así como sus síntomas y signos es decir lo que el paciente
presenta en la historia clínica, como en la mayoría de las enfermedades den las hepatitis los datos
del laboratorio pueden ser útiles para confirmar el diagnóstico.
En las hepatitis, se puede confirmar el diagnóstico con la búsqueda de los agentes infectivos
directamente o por la respuesta que estimula la presencia del virus en el hospedero.
Para el primer parámetro o aspecto se utiliza, la microscopía electrónica, en la búsqueda del
antígeno viral, ya sea el virus completo o la detección de ácidos nucleares, así mismo se utilizan
técnicas especiales, por ejemplo ELISA. Hemaglutinación, inmunocromatografía en membrana,
Western Blot y PCR, la mayoría de los cuales por su alto costo solo los realizan laboratorios de
referencia.
En forma indirecta el diagnóstico se puede realizar por medio de la determinación de anticuerpos,
como ensayos inmunoenzimaticos y la inhibición de la hemaglutinación. Así mismo el diagnóstico
anatomo-patológico es de gran ayuda.
Objetivo General
Esta práctica tiene como objetivo general que el estimulante conozca los aspectos más
importantes relacionados con la hepatitis y los métodos más utilizados en nuestro medio para la
detección de antígenos y anticuerpos contra la hepatitis.
Objetivos específicos
Conocer las pruebas de Inmunocromatografía en Membrana que se utilizan en Hepatitis B
(antígenos virales y anticuerpos virales)
Conocer las pruebas de ELISA en microplaca que se utilizan en la determinación de anticuerpos
contra el virus de la Hepatitis A.
Conocer las técnicas de PCR y electroforesis en gel
Materiales proporcionados por el laboratorio
a. Cassettes de prueba rápida en combo para detección de marcadores serológicos de
Hepatitis B
b. Microplaca de ELISA con reacciones positivas y negativas para anticuerpos contra el virus
de la Hepatitis A
Fundamentos:
Detección de Antígenos y Anticuerpos mediante la técnica de Inmunocromatografía en
Membrana (Pruebas rápidas)
En estas pruebas se procede a formar un complejo antígeno anticuerpo (específico) los cuales se
diseminan en un papel filtro y reacción con un marcador cromógenico, reacción que se observa sin
ningún aparato, son sencillas (2 pasos), baratas y rápidas (menos de 20 minutos).
Prueba rápida en combo (panel) para identificación de marcadores de Hepatitis B en suero.
Esta es una prueba de un solo paso que detecta simultáneamente la presencia de dos antígenos
del Virus de la Hepatitis B y de tres anticuerpos contra sus respectivos antígenos.
Detección de antígenos:
La membrana dentro del cassette está impregnada de una mezcla compuesta de oro coloidal u
otra sustancia unida a anticuerpos, contra el antígeno de superficie (anti-HBs) y contra el antígeno
“e” (anti-HBe) en carriles separados.
Si en el suero se encuentran dichos antígenos virales, estos se unirán al complejo anticuerpo-oro y
migran por capilaridad hacia una zona T, en donde se encontrara otro anticuerpo. También
específico para los antígenos uniéndose este al complejo anterior por los antígenos virales
precipitándose formando una banda cuando no existe antígeno, el anticuerpo conjugado
reaccionara con un anticuerpo específico contra él y se depositara en una banda de control
Detección de anticuerpos:
Para la detección de anticuerpos Anti-HBs, la membrana contiene oro coloidal y otra sustancia
unida a antígenos de superficie, si el paciente tiene anticuerpos, estos se difunden reaccionando
con os antígenos de superficie unidas con el oro, formando complejos, difundiéndose hacia la zona
denominada “T” en donde se encuentran anticuerpos anti-anticuerpo observándose precipitación
por una banda de color
Detección de Anticuerpos Anti-HBc y Anti-HBe
En este caso la reacción, se basa en un principio de unión competitivo. Por lo tanto se interpreta
como resultado positivo cuando NO se forma la banda de color.
Detección de Antígenos y Anticuerpos mediante la técnica de ELISA (Ensayo Inmunoabsorbente
ligado a enzimas)
La técnica de ELISA combina la especificidad de la unión antígeno-anticuerpo con la sensibilidad de
los análisis enzimáticos. Son pruebas en las que se inmovilizan ya sea un antígeno o anticuerpo en
superficies sólidas (microplacas de poliestireno). Se realizan en varios procesos. Primero se pega
el antígeno contra el que se va a estudias. Luego se aplica la secreción plasma del paciente que
contiene el anticuerpo, luego se procede a aplicar un conjugado (anticuerpo ligado a una enzima)
que reaccionaria específicamente al anticuerpo estudiando, luego se aplicaría el sustrato de la
enzima del conjugado
Lecturas obligatorias:
Murray Patrick. Microbiología 7ma edición, capitulo 63
Referencias
Dra. Velez Möller, Patricia. Practica de laboratorio de virus. Facultad de Ciencias Médicas USAC
documento 2008
Dra. Villagrán de Tercero. Carmen. Video técnicas de diagnóstico viral por PCR. Agosto 2012
GUIA DE TRABAJO Y ESTUDIO: ACTIVIDAD PRACTICA DE HEPATITIS
Completar los datos que se le solicitan en los siguientes cuadros:
1. Indique las características principales de los virus de las hepatitis
Virus
Familia
Genoma
Transmisión
Evolución
A
B
C
D
E
G
2. Explique la fisiopatología de los siguientes síntomas de las hepatitis
a. Fiebre
b. Exantema
c. Orina oscura
d. Anorexia
e. Dolor en cuadrante superior derecho
f. Prurito
g. Elevación de transaminasas
h. Elevación de las fosfatasas.
Complicaciones
3. Tomando como base la figura 63-12 de su libro de texto complete el cuadro haciendo las
curvas que presentan los procesos serológicos en la evolución de la Hepatitis B aguda.
Interpretación de marcadores serológicos de la infección por virus de la Hepatitis B
1 mes
2 meses
3 meses
4 meses
5 meses
6 meses
12 meses
24 meses
Ictericia
Síntomas
Diseminación del virus
HBsAg
HBeAg
Anti-HBs
Anti-HBc
Anti-HBe
Enzimas hepáticas
4. Indique como se encuentran los marcadores serológicos de la Hepatitis B en las siguientes
fases ESTADO PATOLOGICO
ESTADO SANO
Marcador
Anti-HBc
Anti-HBe
Anti-HBs
HBeAg
HBsAg
Aguda
Crónica
Tardía aguda
Curado
vacunado
5. Lea los casos clínicos que aparecen en su libro de texto (página 596) y responda las
interrogantes
PROCEDIMIENTOS A REALIZAR
Identificación directa e indirecta viral
A. Pruebas rápidas para detección de antígenos virales y anticuerpos contra virus de la
hepatitis B
Observar las reacciones de las diferentes pruebas rápidas que se presentan, discutir la
interpretación y la utilidad en el diagnóstico.
B. Microplaca de Elisa para detección de anticuerpos contravirus
Observar las reacciones en los diferentes pozos de la microplaca de ELISA que se presenta, discutir
la técnica de realización e interpretar resultados.
Lecturas obligadas:
1. Murray, Patrick. Microbiología 7ª edición capítulo 63