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Espec
[Año]
CLASIFICACIÓN, MICROMANIPULACIÓN Y CONGELADO DE
EMBRIONES BOVINOS
Fecha: 30/09/2012
Nombre y Apellido: Francisco Izaguirre Pons
Objetivo:
1. Transferir lo estudiado a lo largo del curso en la resolución de las actividades
presentadas.
Criterios de evaluación:
1. Manejo conceptual, nivel de profundización y capacidad para establecer
relaciones.
2. Capacidad crítica y posibilidad de realizar análisis personales.
3. Integración y transferencia de lo estudiado a situaciones concretas.
1. Observe las fotografías de embriones y en base al Sistema de Evaluación de
embriones de la Sociedad Internacional de Embriones (IETS) haga una
clasificación de los embriones según:
a. el estadio de desarrollo
b. la Calidad (grado 1,2,3,4).
c. Explique para cada fotografía la/s característica/s que tuvo en cuenta
para calificar los embrión.
A: 4 (Mórula compacta)
B: Calidad grado 1
C: Se observa una masa compacta, zona pelúcida gruesa y pocas blastomeras
de tamaño irregular (bueno)
A: 7 (Blastocisto expandido)
B: Calidad grado 2
C: El blastocisto se encuentra contraído pero se observa la zona pelucida con
el grosor disminuido, algunas células degeneradas pero más del 50% de la
masa celular intacta.
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A: 7 (Blastocisto expandido)
B: Calidad grado 1
C: La zona pelúcida con grosor disminuido con un embrión esférico y simétrico.
A: 5 (Blastocisto temprano)
B: Calidad grado 2
C: Comienza a visualizarse el blastocele y posee más del 50% de la masa
celular intacta.
A: 4 (Mórula compacta)
B: Calidad grado 2
C: Se observa la masa compacta pero con algunas células degeneradas
(menos del 50%)
A: 4 (Mórula compacta)
B: Calidad grado 2
C: Se observa la masa compacta pero con presencia de blastomeras sueltas
(menos del 50%)
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[Año]
A: 4 (Mórula compacta)
B: Calidad grado 3
C: Se observa la masa compacta pero con presencia de blastomeras sueltas
(más del 50%)
A: 1 (Infertilizado)
B: Calidad grado 4
C: Apariencia granular como puntillado.
2. Realice una comparación entre el método de congelado de embriones con
etilenglicol y la vitrificación teniendo en cuenta: medios de congelado, toxicidad,
curva de congelado, método de descongelado y practicidad (costos,
entrenamiento, etc.).
CONGELADO CON ETILENGLICOL
El medio es etilenglicol 1,5M donde se expone el embrión por menos de 5
minutos a 22°C para alcanzar el equilibrio entre la solución y el embrión. Luego
se induce la formación de cristales de hielo entre -5 y -7°C.
Después comienza el descenso lento y controlado de la temperatura (0,6°C por
minuto) hasta -35°C. Recién ahí se colocan en nitrógeno líquido (-196°C).
Para el descongelado de la pajuela hay que colocarla en Baño María a 30°C
hasta que se descongele, luego se seca y se transfiere el embrión dentro de los
15 minutos.
VITRIFICACIÓN:
Se realiza en altas concentraciones de criopreceptores, alrededor de 6M, de
glicerol, etilenglicol, DMSO o mezclas de estas soluciones. Estas altas
concentraciones pueden resultar toxicas, químicas y osmoticamente.
La curva de enfriamiento es muy rápida pasando directamente de temperatura
ambiente (20°C) a -196°C.
El proceso de descongelamiento se realiza a través de la exposición en gotas
de 0.25M de sacarosa, lo que permite el descongelamiento gradual y el control
de la entrada de agua a las células.