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A la vanguardia en DGP
DGP de aneuploidías mediante arrays de CGH (CGHa)
Fundamento del DGP-CGHa
La aneuploidía es un fenómeno muy frecuente en embriones en estadios preimplantación. Se estima que hasta el 70% de los
embriones generados mediante FIV son aneuploides. El DGP-CGHa permite detectar la aneuploidía estudiando los 24 cromosomas
tanto en embriones en división como en blastocistos.
¿Qué es un array de ADN?
Un array de ADN (chip o microchip de ADN) es una superficie sólida
a la que se adhieren unas secuencias de ADN en unos micro-puntos
conocidos como spots.
Se analizan
regiones génicas
que cubren el
cromosoma
completo
Cromosoma
¿Qué son los arrays de CGH o CGHa?
Los CGHa estan basados en la hibridación genómica comparada
(CGH; del inglés Comparative Genome Hybridization). Esta técnica
compara el genoma de nuestra muestra con un genoma de referencia
(“normal”), de forma que podemos detectar ganancias o pérdidas de
material genético.
¿Cómo funcionan los CGHa en DGP?
En el array están fijadas regiones de ADN de todos los cromosomas.
Sobre el array añadimos ADN del blastómero o trofectodermo, junto
con un ADN normal. Estos dos ADNs compiten entre sí para unirse a
las regiones adheridas al soporte. Los dos ADNs se marcan con unas
moléculas fluorescentes. Cada ADN emite un color diferente (uno rojo
y el otro verde). Un sistema láser “lee” cada uno de los puntos (spots)
donde están las regiones genéticas concretas de cada cromosoma.
El software interpreta las señales fluorescentes y nos permite
determinar si el ADN del blastómero o trofectodermo, tiene ganancia
o pérdida de material cromosómico respecto al patrón normal.
ó
Amplificación
genómica
Embrión euploide (normal)
Embrión aneuploide, con varias monosomías:
-7,-8,-16,-20
Marcaje
ADN
«normal»
Hibridación
competitiva
Ventajas del DGP-CGHa frente al DGP-FISH

Obtenemos información de todos los cromosomas.

Se estudian regiones génicas distribuidas a lo
largo de todo el cromosoma.

Eliminamos la subjetividad de la FISH tanto en la
fijación de los núcleos como en la interpretación de
los resultados.

Se detecta hasta un 50% más de aneuploidía y un
20% más de embriones anormales.
Limitaciones de los CGHa

No se detectan embriones haploides y poliploides
homogéneos (69 XXX, 92XXXX, 92 XXYY).
Representan un 0.2% del total de embriones.

No se detectan deleciones/duplicaciones de muy
pequeño tamaño (<1MB).
Lectura
Duración total del proceso: 30 h
6/10/2011 v2.0
A la vanguardia en DGP
DGP molecular combinado:
DGP de enfermedad monogénica + aneuploidías (24 cromosomas)
DGP de enfermedad monogénica + translocación/inversión + aneuploidías (24 cromosomas)
Esta tecnología combina las técnicas de amplificación genómica completa, la PCR y los microarrays de CGH. Permite
realizar el diagnóstico genético preimplantación de una determinada enfermedad monogénica, y el screening de
aneuploidías para todos los cromosomas de forma simultánea y en la misma célula. Además podemos detectar
embriones normales/equilibrados generados a partir de padres portadores de translocaciones/inversiones
equilibradas.
Fundamento del DGP molecular combinado con el
screening de aneuploidías (24 cromosomas)
El DGP de enfermedades monogénicas mediante
técnicas de PCR no permite obtener información del
número de cromosomas del embrión analizado. De
esta forma, el DGP de una enfermedad monogénica
no asegura que el embrión sea euploide.
Por otro lado, está bien establecido que la
aneuploidía es un fenómeno común en embriones en
estadios preimplantación, implicando monosomías y
trisomías de los 22 autosomas y de los cromosomas
sexuales.
En consecuencia, el DGP molecular combinado
permite la transferencia de embriones libres de la
enfermedad monogénica y normales en cuanto al
número de cromosomas.
Opción 1. Biopsia de blastómero
(D+3)
Blastómero ó
trofectodermo
El proceso:
El DGP molecular combinado se inicia con una
amplificación del genoma completo de cada
blastómero o de cada muestra de trofectodermo. Una
parte del ADN amplificado se procesa mediante
técnicas de PCR fluorescente, obteniéndose el
diagnóstico de la enfermedad en 24 h.
Simultáneamente, otra alícuota del mismo ADN
amplificado, se hibrida en un microarray de CGH para
el estudio de aneuploidía de los 24 cromosomas.
Finalmente, en 36 horas se obtiene el resultado
completo de los dos análisis. El informe final incluye
el resultado individualizado de cada embrión en
relación con la enfermedad monogénica y la
aneuploidía.
Opción 2. Biopsia de trofectodermo (D+5)
Parte del ADN se
estudia por PCR para
diagnosticar la enfermedad
monogénica
Amplificación
del genoma
completo
36 h
Informe de resultados
conjunto
Parte del ADN se
estudia por CGHa
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A la vanguardia en DGP
DGP cromosómico combinado:
DGP simultáneo de translocación/inversión + aneuploidías (24 cromosomas)
Fundamento del DGP cromosómico combinado
Las parejas con un miembro portador de un reordenamiento
cromosómico equilibrado (translocación o inversión) tienen un
riesgo elevado de generar embriones anormales, como
consecuencia de la segregación del reordenamiento. Esto se
traduce en abortos recurrentes y, en muchos casos, infertilidad.
El DGP mediante técnicas de FISH permite detectar los embriones
alterados (desequilibrados) para un reordenamiento cromosómico
concreto. Sin embargo, la principal limitación es que no aporta
información del resto de cromosomas.
El DGP cromosómico combinado está basado en la técnica de
arrays de CGH. Permite identificar los embriones alterados
(desequilibrados) en relación con la translocación/inversión y
además podemos estudiar las aneuploidías para los 24
cromosomas, simultáneamente y en la misma célula.
La información relativa al resto de cromosomas no implicados en
los reordenamientos es importante por dos motivos:
1. La aneuploidía es un fenómeno muy frecuente en embriones
en estadios preimplantación. Se estima que hasta el 70% de
los embriones generados mediante FIV son aneuploides.
2. El efecto intercromosómico: existen cromosomas no implicados
en las traslocaciones, que se ven afectados en la descendencia.
Conclusión: el DGP cromosómico combinado permite seleccionar
embriones normales/equilibrados y libres de aneuploidías para el
resto de cromosomas.
Se analizan
regiones génicas
que cubren el
cromosoma
completo
Cromosoma
Embrión normal/equilibrado
Embrión desequilibrado procedente de una
paciente con cariotipo: 46,XX,t(12;14)(q24,q22)
Opción 1. Biopsia de blastómero
(D+3)
Blastómero ó
trofectodermo
Amplificación
genómica
Opción 2. Biopsia de trofectodermo (D+5)
Marcaje
ADN
«normal»
Hibridación
competitiva
30 h
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