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Electroforesis Electroforesis | ES UNA TÉCNICA SEPARATIVA QUE SE BASA EN EL DIFERENTE COMPORTAMIENTO DE LAS ESPECIES BAJO LA INFLUENCIA DE UN CAMPO ELÉCTRICO APLICADO Fundamento Cuando una mezcla de moléculas ionizadas y con carga neta es colocada en un campo eléctrico, éstas experimentan una fuerza de atracción hacia el polo que posee carga opuesta. Dejando transcurrir un cierto tiempo, las moléculas cargadas positivamente se desplazarán hacia el cátodo (el polo negativo) y aquellas cargadas positivamente se desplazarán hacia el ánodo (el polo positivo). Fundamento | | | El movimiento de las moléculas está gobernado también por dos fuerzas adicionales: - inicialmente la fricción con el solvente dificultará este movimiento originando una fuerza que se opone, -por otro lado, las moléculas tienen que moverse en forma aleatoria (o movimiento browniano) debido a que poseen energía cinética propia denominada difusión. Factores en que se basan los distintos tipos de electroseparciones | Los iones negativos tiendan a migrar hacia el voltaje más alto (positivo). Los positivos tiendan a migrar hacia el voltaje más bajo (negativo) Factores en que se basan los distintos tipos de electroseparciones | La velocidad promedio de migración de una especie de analito es proporcional a la carga promedio del ion. Factores en que se basan los distintos tipos de electroseparciones | | | | La velocidad promedio de migración de una especie de analito es proporcional al voltaje que se aplica La relación cuantitativa entre la velocidad del ion y el campo eléctrico (campo eléctrico = voltaje / distancia) se obtiene mediante un factor de proporcionalidad llamado movilidad iónica. La movilidad iónica en la solución se representa como µ vion = μ × V / L Donde V es el voltaje aplicado, v es la velocidad y L es la distancia en la cual se aplica el voltaje. El sentido del movimiento depende de la polaridad del voltaje. Factores en que se basan los distintos tipos de electroseparciones | La velocidad de desplazamiento promedio de un ion es inversamente proporcional a su sección transversal promedio Factores en que se basan los distintos tipos de electroseparciones | | | | La calidad de las electroseparaciones en líquidos mejora a medida que se suprime la convección. La convección de un líquido puede suprimirse de dos maneras: usando una red polimérica o gel donde las cadenas moleculares de la red detienen la convección macroscópica porque el líquido queda retenido entre ellas Llevando a cabo la separación dentro de un capilar pequeño, donde la pared interna del capilar ejerce el mismo efecto benéfico que las moléculas de polímero y, además, el tamaño reducido del capilar reduce al mínimo las diferencias de temperaturas que puedan surgir. Factores en que se basan los distintos tipos de electroseparciones | | La calidad de la electroseparación mejora cuando se mantiene constante la temperatura El calentamiento del líquido en el curso de las electroseparciones debe evitarse, ya que la corriente eléctrica que atraviesa la solución, la calienta en una cantidad igual a la potencia (P = V × I =I2 × R) donde V es el voltaje, I es la corriente en la solución iónica y R es la resistencia de la solución. Primer paso antes de llevar a cabo una separación electroforética estimar las cargas de los analitos en las condiciones experimentales. | Cuando una molécula tiene grupos positivos y negativos a la vez se llama ion doble o zwitterion | Separaciones en una matriz de gel Geles: son redes tridimensionalesde cadenas de polímeros y los espacios entre cadenas están llenos de líquido Impiden la convección Actúan como tamices retrazando la migración de los analitos de gran tamaño Se verifican dos mecanismos de separación: relación carga masa y por tamaño Electroforesis capilar | | | | | La velocidad de separación y la resolución mejora si se aumenta el campo eléctrico. Pero esto aumenta la temperatura, y se arruina la calidada de la separación. Para resolver el problema se usan tubos capilares de 0,1 cm de diámetro interno. El uso del capilar es eficaz porque la resistencia eléctrica de la solución es tan alta que la corriente permanece en niveles bajos (10 µA). El problema es que el tamaño de la muestra es de nL. Por lo tanto hay pocos métodos de detección. Podemos detectar | | | | | proteínas péptidos aminoácidos ácidos nucleicos iones inorgánicos | | | | iones orgánicos bases orgánicas ácidos orgánicos células enteras