Download Demostración de proteína en la superficie de la HPN Demostración

LVI Congreso Nacional de la Sociedad Española de Hematología y Hemoterapia
clonal se ratifica posteriormente mediante cultivos de
colonias eritroides in vitro20.
Fisiopatología. Una encrucijada entre la
patología medular y la destrucción periférica
Demostración de proteína en la superficie de la HPN
Genética de la hemoglobinuria paroxística nocturna
Ya se había detectado que tres enzimas eran deficientes en la HPN: la colinesterasa en los hematíes, la fosfatasa alcalina en los granulocitos y la 5-nucleotidasa
en los linfocitos. Posteriormente, en 198221 se aísla de
los eritrocitos una proteína que se denominó “factor
acelerador de la degradación de la convertasa del complemento” (DAF, CD55), y posteriormente en 1989
otra nueva proteína a la que denominaron “inhibidor
de membrana de la lisis reactiva” (MIRL, CD59)22. Se
demuestra que estas dos proteínas protegen a la membrana frente a la lisis mediada por el complemento.
También se comprueba que estas dos nuevas proteínas
son deficitarias en los hematíes HPN23,24. La deficiencia de todos estos componentes de la membrana de
los hematíes llega a cuestionar el origen clonal de la
HPN16. Sin embargo, pronto se observa que todas estas
proteínas tienen algo en común, y es que se unen a la
membrana de las células hematopoyéticas mediante
un complejo grupo de anclaje denominado glucosilfosfatidilinositol (GPI)24. Finalmente a través de líneas
híbridas linfoblastoides de pacientes con el fenotipo
HPN25 demuestran que el defecto se encuentra en la
primera etapa de la síntesis de GPI. Hay una disminución o ausencia de síntesis de la enzima N-acetilglucosamina transferasa (GLcNa transferasa), impidiendo
que la N-acetilglucosamina se transfiera al fosfatidilinositol26,27.
La base genética de la HPN es una mutación somática
adquirida del gen PIG-A, localizado en el brazo corto
del cromosoma X, en la célula pluripotencial hematopoyética1, y como consecuencia no se sintetiza, o se sintetiza en menor cuantía, el grupo de anclaje denominado
glucosilfosfatidilinositol (GPI)34.
La síntesis de GPI se inicia en la cara externa del
reticuloendoplásmico y es un problema muy complejo, fruto de la participación de numerosas reacciones enzimáticas y en sucesivas y múltiples etapas34,35.
El primer paso de la síntesis consiste en la unión de
N-acetilglucosamina (GIcNAc) a PI por la acción de la
enzima N-acetilglucosamina transferasa (UDP-GPNac:
PI-alfa-1.6 GLCNAC transferasa)26. El compuesto sintetizado se transporta al aparato de Golgi y finalmente se
inserta en la membrana plasmática.
En la HPN se ha demostrado que existe una mutación somática del gen PIG-A que impide la síntesis de
N-acetilglucosamina transferasa, dando lugar a una
ausencia o disminución del grupo de anclaje GPI33, y
como consecuencia las células afectadas son deficientes
en proteínas, que se anclan a la membrana celular a
través de glucosilfosfatidilinositol1,36,37. Por lo tanto, la
característica fundamental de la HPN es que las células hematopoyéticas carecen de todas las proteínas de
superficie que utilizan GPI para fijarse a la membrana38.
Dentro de estas proteínas destacan MIRL (inhibidor de la lisis reactiva de la membrana: CD59) y DAF
(factor acelerador de la degradación del complemento:
CD55)22-24. Estas proteínas regulan la actividad lítica del
complemento, y su déficit, al activarse la cascada del
complemento en la superficie de la célula, es la causa de
la hemólisis intravascular, rotura del hematíe y la consiguiente liberación de la hemoglobina intraeritrocitaria2.
Debido a la localización de la mutación en el cromosoma X y a la inactivación de uno de los alelos X
en las células somáticas femeninas, solo se requiere la
mutación de un único gen, tanto en hombres como en
mujeres, para abolir la expresión del gen PIG-A y ocasionar la enfermedad39.
En el momento actual se han identificado cerca de
200 mutaciones del gen PIG-A31. Predominan las pequeñas deleciones o inserciones que producen una alteración del marco de lectura, con la aparición prematura de
un codón de terminación y en consecuencia un ARNm
acortado y no funcional, que anula completamente la
funcionalidad del gen PIG-A. Sin embargo, otras mutaciones no disminuyen completamente la función del
PIG-A. Generalmente son mutaciones sin sentido en
las que se produce un cambio de un aminoácido por
Demostración de la mutación genética adquirida
Dado que hipotéticamente tendrían que ser dos las
mutaciones genéticas necesarias para producir el fenotipo de HPN, se piensa que la única posibilidad es que
el gen originario de la mutación se encuentre en el cromosoma X26. El grupo de Kinoshita en Japón, utilizando
líneas celulares GPI- de tres pacientes con HPN, realiza
una serie de experimentos que demuestran que la HPN
resulta de la mutación de un solo gen, que mapean en
el cromosoma X, región 22.1 1. Introduciendo ADN
normal mediante un vector en la línea híbrida con el
fenotipo HPN (GPI-) consiguen corregir el fenotipo HPN
anormal28. Actualmente se han detectado cerca de 200
mutaciones diferentes del gen PIG-A29-31. La mayoría
son pequeñas deleciones o inserciones que anulan
completamente la funcionalidad del gen PIG-A. Otras
son mutaciones que disminuyen la actividad del gen31.
En ocasiones se observan dos mutaciones en el mismo
gen o incluso más, de ahí el distinto comportamiento
y sensibilidad de los hematíes al efecto lítico del complemento29,32,33.
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