Download desarrollo de estrategias de control de virus y fitoplasmas en vid

XIII Foro INIA “Retos de la I+D+i en
viticultura y enología: nuevas
demandas y cambio climático”
INSTITUTO VALENCIANO DE INVESTIGACIONES AGRARIAS
DESARROLLO DE ESTRATEGIAS DE
CONTROL DE VIRUS Y FITOPLASMAS
EN VID
AVANCES EN EL DIAGNÓSTICO Y DETECCIÓN
SANEAMIENTO DE MATERIAL VEGETAL
Antonio OLMOS
Lab. Virología e Inmunología. Centro de Protección Vegetal y Biotecnología
Instituto Valenciano de Investigaciones Agrarias (IVIA). Moncada, Valencia
Instituto Valenciano de Investigaciones Agrarias (IVIA).
Centro de Protección Vegetal
INSTITUTO VALENCIANO DE INVESTIGACIONES AGRARIAS
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Laboratorio de Virología e Inmunología
Experiencia:
- Desarrollo y validación de métodos y protocolos serológicos y moleculares para
la detección de patógenos de plantas.
-  Control de virus de especies leñosas mediante métodos convencionales y
biotecnológicos.
CARACTERÍSTICAS DE
LAS VIROSIS DE VEGETALES
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INCURABLES (No sistema inmune)
IMPOSIBLE CONTROL QUÍMICO
TRANSMISIBLES: vegetativamente (injerto,
multiplic. vegetativa), semilla, polen,
vectores ...
SELECCIÓN SANITARIA DE PLANTAS MADRE
CARACTERÍSTICAS DE
LAS VIROSIS DE VEGETALES
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FRECUENTES (Fácil infección, tiempo exposición
largo especialmente en plantas leñosas ...)
GRANDES POBLACIONES HOMOGÉNEAS DE
PLANTAS CULTIVADAS (Inmóviles)
NUMEROSAS MUESTRAS
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El movimiento de material vegetal infectado (con o sin
síntomas) y el comercio legal e ilegal, han sido y
continúa siendo la principal causa de dispersión de
agentes patógenos a larga distancia.
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Métodos biológicos:
Demostración del poder patógeno
•  Valoración de la agresividad
•  Detec. enfermedades etiología desconocida
(a pesar de sus inconvenientes)
Tecnicas serologicas:
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La técnica ELISA convencional
ha hecho posible la
realización de millones de
muestras de forma rutinaria.
Su único inconveniente: la
necesidad de realizar extractos
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TÉCNICAS MOLECULARES
•  Métodos de amplificación isoterma:
•  3SR, NASBA (Nucleic acid sequence based
amplification)
•  SDA (Strand displacement amplification)
•  LAMP (Loop-mediated isothermal amplification)
•  MDA (Multiple displacement amplification)
•  Amplificación enzimática mediante variantes de PCR:
•  PCR and RT-PCR
•  Immunocaptura PCR (IC-PCR)
•  Print y squash-capture PCR (PC or SC-PCR)
•  Heminested or nested PCR en un solo tubo cerrado
•  PCR cooperativa (Co-PCR)
•  PCR cuantitativa a tiempo real
PCR CUANTITATIVA A TIEMPO REAL
PARA LA DETECCIÓN DE DIANAS
VIRALES EN PLANTAS Y VECTORES
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TaqMan probes
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VIROSIS DE VID
Las enfermedades causadas por virus ocasionan pérdidas
importantes en el cultivo de la vid en todo el mundo.
"   Las cepas producen menos y con peor calidad.
"   Se reduce la longevidad de las plantas.
Se han descrito 61 virus que infectan vid.
Alrededor de 30 enfermedades se asocian a virus
(20 de ellas con agente etiológico identificado)
Entrenudo corto infeccioso
Grapevine fanleaf virus
Pérdidas de 30-90%
en producción
Transmitidos por
Xiphinema y
Longidorus spp
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Enrollado
Grapevine leafroll associated virus -1 a -11
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Provoca importantes pérdidas en todo el
mundo (30-40% producción)
Transmitidos por
Planococcus y
Psuedococcus spp
Jaspeado Grapevine fleck virus
Distribución mundial Efecto sinérgico con
otros virus
El complejo de la madera rizada
1. Ahoyado del rupestris (Rupestris stem
pitting) Rupestris stem pitting associated
virus
2. Acanalado del Kober 5BB (Kober stem
grooving)Grapevine vitivirus A
3. Acanalado del LN 33 (LN33 stem
grooving) Sin identificar agente etiológico
4. Madera acorchada (Corky bark
disorder)Grapevine vitivirus B
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Fitoplasmas
Candidatus Phytoplasma vitis
(Grapevine flavescence dorée o fitoplasma de
la flavescencia dorada)
Fitoplasma causante de “bois noir”
•  Diseño y validación en métodos de detección basados en multiplex
PCR a tiempo real
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•  Secuenciación masiva para caracterización de virosis establecidas y
emergentes, y búsqueda de nuevos virus en material de vid
•  Detección de virosis en diversas áreas vitivinícolas de Cataluña,
Comunidad Valenciana, Galicia, Aragón, La Rioja y Extremadura.
Caracterización de los aislados virales
•  Secuenciación completa del genoma de los nuevos aislados
españoles del virus del mosaico del arabis
•  Seguimiento de especies de insectos pertenecientes a familias
potencialmente transmisoras de fitoplasmas identificados en
Extremadura, Valencia, Galicia y Cataluña
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Programa para la producción de vid libre de
virus mediante termoterapia y cultivo de ápices
caulinares in vitro
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Muchas gracias por su
atención