Download Grapevine virus A

UNIVERSIDAD DE CHILE
FACULTAD DE CIENCIAS
AGRONÓMICAS
ENFERMEDADES DE LA VID
CAUSADAS POR VIRUS,
VIROIDES Y FITOPLASMAS:
DIAGNÓSTICO,
EPIDEMIOLOGÍA Y CONTROL
Nicola Fiore Ing. Agr., Dr.
PROSPECCIÓN
III Región
IV Región
V Región
Región Metropolitana
VI Región
VII Región
DETECCIÓN CON ELISA
2535 muestras
analizadas con
ELISA
FIA BIOT BID PI C 2001-1-A-013
14,8
6,2
0,7
GVA
GLRaV-7
GLRaV-3
0,3
Virus analizados
0,0
0,0
0,0
SLRSV
5,8
ArMV
4,1
GLRaV-2
0,0
6,1
GLRaV-1
10,0
5,0
14,4
GVB
15,0
29,2
ToRSV
20,0
GFkV
30,0
25,0
Total
35,0
GFLV
Porcentaje positivos
%
VIRUS
PORCENTAJE DE INFECCIÓN DE VIRUS EN VIDES
FIA BIOT BID PI C 2001-1-A-013
MUESTREO
DETECCIÓN CON
RT-PCR
821 bp
551 bp
600 bp
442 bp
353 bp
330 bp
155 bp
M
100 bp
GLRaV-2
GRSLaV
GVA
GFkV
GRSPaV
GVB
Grapevine rupestris stem pittingassociated virus (GRSPaV)
Virus
N° de
muestras
N° de
positivos
Porcentaje
(%)
GRSPaV
654
532
81,3
Muestras analizadas mediante RT-PCR desde 2009 a 2013
PROSPECCIÓN VID en la REGIÓN
DE ATACAMA
III
Región
Copiapó
1000 muestras
analizadas con RT-PCR
Porcentaje
positivos
PORCENTAJE DE %
INFECCIÓN
DE VIRUS EN
VIRUS
PARRONALES DE LA REGIÓN DE ATACAMA
68,7
80,0
46,8
60,0
30,7
40,0
20,0
9,6
9,1
8,8
13,2
0,0
LV
F
G
1
Va
R
GL
2
Va
R
GL
3
Va
R
GL
A
GV
Virus analizados
kV
F
G
tal
o
T
PRINCIPALES VIRUS EN VID
FAMILIA
SECOVIRIDAE
GÉNERO
ESPECIE
NEPOVIRUS
-Grapevine fanleaf virus
(Subfamilia COMOVIRINAE)
CLOSTEROVIRIDAE
CLOSTEROVIRUS
- Grapevine leafrollassociated virus 2
FAMILIA
CLOSTEROVIRIDAE
GÉNERO
AMPELOVIRUS
ESPECIE
- Grapevine leafroll-associated
virus 1
- Grapevine leafroll-associated
virus 3
TYMOVIRIDAE
MACULAVIRUS
BETAFLEXIVIRIDAE
VITIVIRUS
- Grapevine fleck virus
- Grapevine virus A
- Grapevine virus B
FOVEAVIRUS
-Grapevine rupestris stem
pitting-associated virus
SÍNTOMAS DE LOS
PRINCIPALES
VIRUS DE LA VID
EN CHILE
Género Nepovirus
Grapevine fanleaf virus (GFLV)
Crimson/Paulsen
1103 con GFLV
Género Ampelovirus
Grapevine
virus 1, 3
leafroll-associated
(GLRaV-1, -3)
Género Closterovirus
Grapevine
leafroll-associated
virus 2 (GLRaV-2)
Crimson
Red Globe
Autumn Royal
Complejo de la madera rugosa
(GVA, GVB, GRSPaV, LN33 stem grooving)
Género Vitivirus
Grapevine virus A
Grapevine virus B
(GVA)
(GVB)
Género Foveavirus
Grapevine rupestis stem pittingassociated virus (GRSPaV)
110R
GVA en la
var. Superior
GRSPaV en
Superior/Freedom
Género Maculavirus
Grapevine fleck virus
(GFkV)
ENFERMEDADES EMERGENTES A
ETIOLOGÍA VIRAL
Incompatibilidad en la zona de injerto
Los virus implicados en la etiología de la
incompatibilidad del injerto son algunos de
los agentes asociados con el leafroll y
el rugose wood
VIRUS INVOLUCRADOS EN LA
INCOMPATIBILIDAD
•Kober incompatibility, Europa:
GLRaV-2 (cepa leafroll)
•Young vine decline, California:
GLRaV-2 (cepa leafroll),
+ GVB
•Young vine decline, Australia:
GLRaV-2 (“nueva” cepa)
•Redglobe decline, California:
GLRaV-2 (cepa Red Globe)
•Merlot decline, Nueva Zelandia: GLRaV-2 (cepa Red Globe)
Respuesta de algunos portainjertos a la
infección con GLRaV-2 RG
Susceptible
Tolerante
Kober 5BB
Freedom
3309 C
Harmony
5C
Salt Creek
1103 P
039-16
AxR 1
101-14 Mtg
(hojas rojas,
stem lesion,
declinación)
(canopia normal)
ENFERMEDADES EMERGENTES A
ETIOLOGÍA VIRAL
Syrah decline (GRSPaV?)
Enrojecimiento precoz de
las hojas
ENFERMEDADES EMERGENTES A
ETIOLOGÍA VIRAL
Genéro Trichovirus
Grapevine Pinot gris virus (GPGV)
Pinot gris
Pinot gris
Atraso de
brotación
Traminer
Traminer
ENFERMEDADES EMERGENTES A
ETIOLOGÍA VIRAL
Poojari et al., 2013
Familia Geminiviridae
Grapevine redleaf-associated virus (GRLaV)
Grapevine red blotch-associated virus
(GRBaV)
Grapevine Cabernet Franc-associated virus (GCFaV)
Viroides en vid
Fam. POSPIVIROIDAE
Genero
Apscaviroid
Especie
1
Grapevine yellow speckle viroid 1 (GYSVd-1)
2
Grapevine yellow speckle viroid 2 (GYSVd-2)
3
Astralian grapevine viroid (AGVd)
Pospiviroid
4
Citrus exocortis viroid (CEVd)
Hostuviroid
5
Hop stunt viroid (HSVd)
Yellow
speckle
Vein
banding
Vein banding es una enfermedad
resultado de la infección mixta entre
el Grapevine yellow speckle viroid y
Grapevine fanleaf virus
GYSVd-1
Strain
Variety
Cabernet
1100YS1
Sauvignon
6059YS
Syrah
1
6061YS Thompson
1
Seedless
6119YS1 Crimson
6139YS
Pinot noir
1
6356YS
Syrah
1
6421YS
Ramsey
1
6556YS
Flame
1
6576YS
Syrah
1
Region
Metropolitana
Metropolitana
Metropolitana
O’Higgins
Valparaíso
O’Higgins
Coquimbo
Atacama
O’Higgins
Cabernet Sauvignon 1100
GYSVd-1 + GFLV
VECTORES DE
VIRUS EN VID
- GFLV
Xiphinema index
ALGUNOS VECTORES
CONOCIDOS DE AMPELOVIRUS
(Cóccidos y Pseudocóccidos)
-GLRaV-1
Parthenolecanium corni
Neopulvinaria innumerabilis
Heliococcus bohemicus
Phenacoccus aceris
- GLRaV-3
Planococcus ficus
Pseudococcus longispinus
Ps. viburni (ex affinis)
Pulvinaria vitis
Heliococcus bohemicus
Pl. citri
Ps. maritimus
Ps. comstocki
Ps. calceolariae
ALGUNOS VECTORES
CONOCIDOS DE VITIVIRUS
(Cóccidos y Pseudocóccidos)
-GVA
Planococcus citri
Pl. ficus
Pseudococcus longispinus
Ps. viburni (ex affinis)
Pulvinaria vitis
Ps. comstocki
Neopulvinaria innumerabilis
- GVB
Ps. longispinus
Pl. ficus
Ps. viburni (ex affinis)
Pseudococcus viburni (ex affinis)
hembras
GLRaV-3
GVA
GVB
Parthenolecanium corni
GLRaV-1
hembra preovigera
ninfa invernante
FITOPLASMAS
Dimensiones:  0,2 ÷ 1 μm
50.000 x
SÍNTOMAS
FITOPLASMAS
CARACTERIZACIÓN
MOLECULAR DE
FITOPLASMAS EN
VIDES
Ch3b AY741532 16SrI-B
PC2.1014R AY739024 16SrI-B
OenP M30970 16SrI-B
Ch13 DQ177149 16SrI-B
BaDef AY734453 16SrI-B
PBG AY725209 16SrI-B
BoAP AY725211 16SrI-B
THP EF199549 16SrI
se analizaron
94 plantas
OatP AF453416 16SrI-A
AY-WB NC007716 16SrI-A
FesY DQ640504 16SrI-C
AGY L76865 16SrXII-B
STOL11 AF248959 16SrXII-A
34 plantas
positivas
Gajardo A., Fiore N.,
Prodan S., Paltrinieri S.,
Botti S., Pino A.M.,
Zamorano A., Montealegre
J., Bertaccini A. 2009.
Phytoplasmas associated
with grapevine yellows
disease in Chile.
Plant Disease 93:789-796
SGY AJ964960 16SrXII-A
Ch59 DQ177148 16SrXII-A
Ch38a AY739654 16SrXII-A*a
Ch38b AY739653 16SrXII-A*b
ArAWB AY147038 16SrVII-C
RPWB AF411592 16SrVII-B
Ch24 DQ232752 16SrVII-A
Ch41 DQ194355 16SrVII-A
AshY1 AF092209 16SrVII-A
AshY5 AF105316 16SrVII-A
AYColM3 EF150368 16SrVII
Ch3a AY741531 16SrVII-A
Acholeplasma laidlawii
Fitoplasmas detectados en vides en el mundo
16SrI (Aster yellows group)
Tomato big bud (EEUU:Virginia)
Aster yellows (Italia, Chile)
Clover phyllody (Italia, Chile)
16SrII (Peanut witches’ broom)
Sweet potato little leaf (Australia)
16SrIII (X-disease group)
Virginian Grapevine yellows (EEUU, Chile)
16SrV (Elm yellows group)
Elm yellows (Alemania, Italia, Chile)
Flavescencia dorada (Francia, España, Norte de Italia, Serbia)
16SrVII (Ash yellow group)
Ca. Phytoplasma fraxini (Chile)
16SrX (Apple proliferation group)
European stone fruit yellows (Hungría, Serbia)
16SrXII (Stolbur group)
Madera Negra (U. Europea, Croacia, Serbia, Israel, Chile)
Ca. Phytoplasma australiense (Australia)
Grapevine yellows (Chile)
16SrI-A
16SrI-B
16SrI-C
16SrII-D
16SrIII-J
16SrV-A
16SrV-C
y 16SrV-D
16SrVII-A
16SrX-B
16SrXII-A
16SrXII-B
16SrXII-?
Vc33 16SrIII-J phytoplasma
genome annotation
Fitoplasmas
y GLRaV-3
Fitoplasmas,
GFkV y GLRaV-2
UNIVERSIDAD DE CHILE
FACULTAD DE CIENCIAS
AGRONÓMICAS
Estudio epidemiológico de
fitoplasmas que infectan a la vid en
Chile
16SrIII-J
X-disease group
vid
Polygonum aviculare L.
Cicadellidae
Deltocephalinae
Paratanus
exitiosus
(Beamer)
Convolvulus arvensis L.
PRUEBAS DE
TRANSMISIÓN
CON……
.....Paratanus exitiosus (Beamer)
y...
Bergallia valdiviana Berg 1881
Síntomas en vinca
16SrIII-J
16SrIII-J
Síntomas en vid
DAÑOS
Daños causados por
Grapevine fanleaf virus
Francia:
-55 al -80% en Chardonnay
-77% en Muscat à petit grains
Alemania:
-53 al 93% en Traminer
-51 al 77% en Faber
-28-62% en diferentes variedades
Suiza:
-78% en Chasselas
-87% en Merlot
-98% en Pinot noir
Italia:
-23% en Moscato blanco
+50% en Nebbiolo, después de la
eliminación de GFLV
Hungría:
-60% en Chardonnay y Ezerfurtu
Peso de la madera de poda: + 38%
Producción: + 25%
Contenido en azúcares: + 8.6%
GFLV
Vid infectada por GFLV
Vid sana (termoterapia)
EL MISMO CLON de „NEBBIOLO MICHET‟
( Mannini et al., 2001)
DAÑOS POR FITOPLASMAS EN VID
en Chile
2002: Var. Carmenère y Petit Syrah
Deshidratación de las bayas al momento de la
cosecha.
Muerte de plantas asociada a presencia de
hongos fitopatógenos.
Baja producción.
DAÑOS POR FITOPLASMAS
en Chile
16SrIII-J
Pérdidas del 20 hasta el 40%
CONTROL
Basado principalmente en la
prevención
Control
- Monitoreo (diagnóstico)
- Controlar los vectores
- Usar plantas resistentes
- Selección sanitaria
- Saneamiento: Termoterapia y cultivo in vitro
de ápices meristemáticos
- Utilizar material de multiplicación sano
Uso de material
vegetal sano
(procedente de
certificación o
selección sanitaria)
“Screen house”
TERMOTERAPIA Y
CULTIVO IN VITRO
(actividad de largo plazo)
SANEAMIENTO
SELECCIÓN
SANITARIA
DETECCIÓN CON
RT-PCR para 10 virus
10 clones x 10 plantas x 6
sarmientos = 600 análisis
RESULTADOS SELECCIÓN SANITARIA
Porcentaje positivos
PREVALENCIA DE VIRUS INFECTANDO LOS
SARMIENTOS LIGNIFICADOS
100%
(600)
120,0
83%
(498)
100,0
80,0
60,0
30%
(180)
40,0
18%
(108)
20,0
10%
(60)
4,2%
(25)
0,0
G
aV
P
RS
600 sarmientos
lignificados analizados
con RT-PCR
kV
F
G
-2
V
Ra
L
G
-3
V
Ra
L
G
B
GV
TA
O
T
L
Virus analizados
No positivos para: GFLV, GVA, GLRaV-1, GLRaV-4, GLRaV-7
ENRAIZAMIENTO
INTRODUCCION
IN VITRO
TERMOTERAPIA IN VITRO
Obtención de ápices meristemáticos
Obtención de ápices meristemáticos
RESULTADOS SANEAMIENTO EN CHILE (GRSPaV)
N°
PLANTAS
ACLIMATADAS
N°
PLANTAS
SANAS
ACLIMATADAS
%
SANEAMIENTO
(sobre el N° total
de plantas
aclimatadas)
2
5
2
40,0
5
1
18
4
22,2
Var. 3 (SP, 2)
5
2
4
4
100
Var. 4 (SP)
5
1
5
1
20,0
Var. 5 (neg.)
2
2
8
5
62,5
Var. 6 (neg.)
4
3
6
5
83,3
Var. 7 (SP)
3
1
2
2
100
Var. 8 (SP)
3
3
9
8
88,9
Patrón 1 (2)
2
2
9
3
33,3
Patrón 2 (SP)
2
2
3
2
66,7
38
19
69
36
52,2
N°
LÍNEAS
in vitro
N°
LÍNEAS
SANAS
in vitro
Var. 1 (Fk)
7
Var. 2 (SP)
ACCESIONES
Total
ESTABLECIMIENTO DE UN BANCO DE
GERMOPLASMA CON EL MATERIAL
VEGETAL SANEADO
GRUPO DE TRABAJO
LABORATORIO DE FITOVIROLOGÍA, Universidad de
Chile, Fac. Cs. Agronómicas, Dpto. Sanidad Vegetal
Ana María Pino
Alan Zamorano
Claudia Abarca
Lucia Rivera
Nicolás Quiroga
¡MUCHAS
GRACIAS!
[email protected]