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EVELAM 2013 – MEXICO Diagnóstico Genético y Molecular de las Enfermedades Neuromusculares Hereditarias Dr. Alberto L. Rosa Laboratorio de Biología Celular y Molecular Laboratorio Diagnóstico de Genética y Biología Molecular Servicio de Genética Médica Sanatorio Allende & Fundación Allende – CONICET Córdoba, Argentina Debilidad Muscular Neurona motora Sindrome miasténico Neuropatía periférica Distrofia Muscular o Miopatía fibra muscular nervio asta anterior CMTs (Charcot-Marie-Tooth) AME Tipo I Tipo II Tipo III ELA Miastenia gravis Sindromes miasténicos congénitos Duchenne - Becker Cinturas (LGMD) Emery-Dreiffus FSHD Miopatías congénitas DMC Steinert / Thomsen Mitocondriales Metabólicas Miositis Heterogeneidad Clínica Heterogeneidad Genética α 7 INTEGRIN ITGA7 UCMD Collagen VI COL6A1,A2,A3 LOCUS 3p 23 (α α 9 INTEGRIN) ITGA9 RSMD-1 SEPN-1 L-CMD LMNA MDC1C FKRP,FKTN FCMD FKTN Marinesco-Sjoegren Sd” SIL-1 “Salih CMD” Titin MEB POMGnT1 WWS POMT1 POMT2 FKTN FKRP LARGE MDC1D LARGE MDC1A LAMA2 “Adducted Thumbs” Nesprin-1 Modified from S. Quijano Gen SMN1 AME tipos I, II y III Examen Clínico Imágenes (RMN músculos) Electrofisiología Anatomía Patológica Genética y Biología Molecular I I I II I I I I I I I II I II I I I II I II I II I I I I I I I I I II I I I 23 “pares” I 46 cromosomas (ADN) I I gen ATG TGA D 5'-UTR exón deleción intrón E F G exón inversión H 3'-UTR ATG A TGA B C A B 5'-UTR C D E F G H 3'-UTR duplicación ATG TGA 3'-UTR 5'-UTR ATG GCA ATT GCT TTT TTA CGT AAC CCG Mutación puntual DNA transcripción pre -mRNA procesamiento mRNA mRNA proteína ribosoma traducción ATG TGA 3'-UTR 5'-UTR ATG GCA ATT GCT TTT TTA CGT AAC CCG Mutación puntual DNA Amino ácido ATG GCA ATT GCT TTT TTA CGT AAC CCG Met Ala Ile Ala Phe Leu Arg Asn Pro ATG GCA ATT GCT TTT TCA CGT AAC CCG Met Ala Ile Ala Phe Ser Arg Asn Pro ATG GCA ATT GCT TTT TGA CGT AAC CCG Met Ala Ile Ala Phe STOP ATG GCA ATT GCT TTT TAC GTA ACC CG Met Ala Ile Ala Phe Tyr Val Thr normal Arg mutación de sentido cambiado (missense) mutación sin sentido (nonsense) deleción 1 pb cambio marco de lectura (frameshift) Gowers (+) Déficit muscular cintura pelviana Amiotrofia proximal MMii CPK: 8760 Ui/l Gen DYS: Estudio de PCR multiplex (deleción) 45 Pm 48 3 19 43 49 17 50 13 9 51 6 8 42 47 60 12 44 46 52 4 Chamberlain Beggs Set C Gen DYS: Estudio de MLPA (deleción o duplicación) Gen DYS: MLPA para estudio de portadora (deleción heterocigota) A- control Gen DYS B- paciente X X C- madre Microchips de ADN (DNA-microarrays) Estrategia CGH (Comparative Genomic Hybridization) “Fragmentos de DNA (oligonucleótidos) representativos del genoma humano inmovilizados sobre una matriz sólida” 1) 2) 3) 4) Duplication exons 2–4 Deletion exon 44 Deletion of exons 17–44 Deletion of exons 48–52 Hegde et al. (2008) Microarray-based mutation detection in the dystrophin gene. Hum Mutat. 29, 1091 WES WGS A B C LGMD1E / DNAJB6 - A LGMD1E / DNAJB6 - Diagnóstico molecular Metodologías PCR: deleción de exones (homocigota) MLPA: deleción y duplicación de exones (homo & heterocigota) PCR alelo específica y/o secuencia: mutación puntual PCR, TP-PCR, Southern blot: expansiones de nucleótidos Análisis de microsatélites: dosis génica (Ej. microduplicaciones) Secuencia de paneles de genes: gen no definido (screening) CGH-DNA arrays: escaneado del genoma, análisis global WES (Exoma) / WGS (Genoma): Next generation sequencing Servicio de Genética Médica y Laboratorio Biología Celular y Molecular Fundación Allende – CONICET - Argentina [email protected]
