Download Podredumbre Ácida de racimos de Vid

LA PODREDUMBRE ÁCIDA
DE LOS RACIMOS DE LA VID
RODRIGUEZ ROMERA, M. 1 ORIOLANI, E. 1; COMBINA, M. 1,2
1EEA Mendoza – INTA, 2 CONICET
San Martín 5838- (5505) Luján de Cuyo. Mendoza.
[email protected]
INTRODUCCIÓN
En Francia fue detectada hace más de 100 años.
Presente en otros países Europeos, Americanos y en
Sudáfrica
En Francia y Chile comenzó a ser importe hace más
15 años.
Causa pérdidas de producción en Mendoza y San Juan.
La incidencia y la severidad se incrementó en los
últimos tiempos.
Esta enfermedad frecuentemente se confundía con la
“podredumbre de los racimos” (Botrytis cinerea, Aspergillus sp.,
Penicillium sp., Rhizopus, Cladosporium sp. y Alternaria sp.)(ORIOLANI, E et.al 1982),
Ing. Agron. Rodriguez Romera, M.
INTRODUCCIÓN
Investigadores de distintos países han asociado esta
enfermedad a un complejo de microorganismos que incluye:
Levaduras
Hongos
filamentosos
Bacterias
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El origen etiológico y la secuencia de aparición de cada
patógeno no han sido aclaradas totalmente:
‰ Algunos investigadores señalan que los hongos son los principales responsables de esta
enfermedad y que las levaduras y bacterias actuarían como patógenos secundarios .
(LATORRE, B. Et al 2002 ).
‰ Otros afirman que la presencia de microfisuras o heridas en la epidermis de la baya es el
factor desencadenante permitiendo la entrada de levaduras y bacterias, las que actuarían
como patógenos primarios, siendo los hongos los secundarios . (GRAVOT ,E. et al 2001),( LAURENT J.C
1998 ), (SNOWDON A. L. et al 1990 ).
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SINTOMAS
ƒComienzan en el racimo después del envero hasta poscosecha.
ƒEn bayas aisladas o en grupos.
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SINTOMAS
ƒOxidación de la cutícula u hollejo
ƒAblandamiento y maceración de la pulpa
ƒVaciamiento de la baya,
ƒPérdida de mosto
ƒFuerte olor a ácido acético
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SINTOMAS
ƒ Presencia de larvas y adultos de la mosquita del vinagre
(Drosophila melanogaster).
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PODREDUMBRE DE LOS RACIMOS Vs PODREDUMBRE ÁCIDA
Podredumbre de los
racimos
Podredumbre ácida
de los racimos
≠
PODREDUMBRE DE LOS RACIMOS
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PODREDUMBRE DE LOS RACIMOS
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PODREDUMBRE DE LOS RACIMOS
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PODREDUMBRE ACIDA
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PODREDUMBRE ACIDA
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PODREDUMBRE ACIDA
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PODREDUMBRE ACIDA
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PODREDUMBRE ACIDA
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PODREDUMBRE ACIDA
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PODREDUMBRE ACIDA
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PODREDUMBRE ACIDA
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CONSECUENCIAS
Mostos con elevada
acidez volátil
Uva de mesa no
comercializable
PODREDUMBRE
ÁCIDA
Vinos inestables
Perdida de producción
en poscosecha en uva de
mesa
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ESTUDIOS REALIZADOS DESDE EL 2004-2008 EN EEA-MZA
“Se determinó e identificó el complejo etiológico que
produce la podredumbre ácida de los racimos en las
condiciones ecológicas de los viñedos de las provincias
de Mendoza y San Juan.”
Parte I - AISLAMIENTO DE PATÓGENOS.
Parte II - PRUEBA DE PATOGENICIDAD.
Ing. Agron. Rodriguez Romera, M.
Parte I - AISLAMIENTO DE PATÓGENOS.
Ing. Agron. Rodriguez Romera, M.
MATERIALES Y MÉTODOS
2004/05
de bayas sintomáticas
y asintomáticas
Aislamientos
Chenín, Bonamico,
Tempranilla, Pedro
Gímenez y Red Globe
Cultivares
Procedencia
Lavalle, San Martín, Luján de Cuyo y
Tunuyán de la provincia de Mendoza
El Zonda de la provincia de San Juan.
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MATERIALES Y MÉTODOS
Bayas sin síntomas, sin y con
desinfección (hipoclorito de calcio).
Siembra en placas de Petri en
Bergey modificado para bacterias.
Purificación de
bacterias en GYCa.
Conservación bacterias :
- GYCa a 4ºC.
- glicerol 30 % a -18º C.
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Bayas con síntomas, sin y con
desinfección (hipoclorito de calcio).
Siembra en placas de Petri en AEM
modificado para levaduras.
Purificación de levaduras
en WL nutriente agar.
Conservación levaduras:
- YPD a 4ºC.
- glicerol 30 % a -18º C.
IDENTIFICACIÓN DE LEVADURAS
Técnicas moleculares de identificación
Reacción en Cadena de la Polimerasa
(PCR) del fragmento del ADN ribosomal
5.8S-ITS
Restricción o RFLPs con las endonucleasas
Hinf, Cfo y Hae (Esteve-Zarzoso y col., 1999).
Secuenciación del fragmento 5.8S-ITS
Los patrones de amplificación y de restricción obtenidos fueron analizados utilizando la base de
datos Yeast-Id (Universidad de Valencia-CSIC) lo que permitió una adecuada asignación de las
especies. Secuencias obtenidas analizadas por BLAST con base de datos de nucleótidos
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Zygosaccharomyces baillii
Saccharomyces cerevisiae
Pichia membranifaciens
Dekkera bruxellensis
Especies de
levaduras
identificadas
Pichia kluyveri
Issatchenkia orientalis
Pichia galeiformes
Candida apicola
Candida sorbosa
Candida magnoliae
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IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS
‰ A nivel de grupo por :
– Tinción de Gram
– Reacción de la catalasa
– Producción de ácido
‰A nivel de género por :
– Reacción de oxidación o superoxidación del etanol.
Gluconobacter
Etanol
ox
ácido acetico (amarillo)
Acetobacter
Etanol
ox
ácido acetico (amarillo)
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ox
CO2 + H2O (verde)
RESULTADOS
Identificación de bacterias a nivel de grupo:
BACTERIAS
ÁCETICAS
•Tinción de Gram : 100% Gram negativa
•Reacción de la catalasa :100% catalasa positiva
•Producción de ácido : 100% producción de ácido
Tabla 3: Identificación de bacterias a nivel de género
Géneros de Bacterias
Acetobacter,
Gluconobacter
Acetobacter + Gluconobacter
Bayas con síntomas
71,8 %
6,4 %
21,8 %
Tabla 4: Desarrollo de hongos filamentosos
Géneros de hongos
Aspergillus
Penicillium
Botrytris
Rhizopus
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Presencia
10-17%
2-9%
0-6%
0-2%
Bayas sin síntomas
85,7%
14,3%
-
Parte I - AISLAMIENTO DE PATÓGENOS.
Parte II - PRUEBA DE PATOGENICIDAD.
Ing. Agron. Rodriguez Romera, M.
MATERIALES Y MÉTODOS
Prueba de
patogenicidad
cultivar
Microrganismos
Método
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2005/06
Red Globe
Levaduras
ƒ Agrupadas en 5 categorías por
similitud de las colonias
ƒ Suspensión de 6x108 lev /mL
Bacterias
ƒ Agrupadas en Gluconobacter
y Acetobacter
ƒ Suspensión de 8.108 UFC/ml
•cámara húmeda
• 10 grupos de tres bayas c/u , con repetición
•Se inocularon bayas con levaduras y bacterias, solas o
combinadas, con y sin microheridas.
•se mantuvieron a 27° C, durante tres semanas
RESULTADOS
Tabla 5: Comparación de medias de bayas infectadas entre
muestras con superficie sana y herida
Tratamiento
Medias
Sin heridas
9,7%a*
Con heridas
99,6% b
*Letras distintas indican diferencias significativas (p ≤ 0,05)
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RESULTADOS
sin heridas
con heridas
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RESULTADO DEL RE-AISLAMIENTO
DE LA PRUEBA DE PATOGENICIDAD
Las bacterias correspondieron al grupo de las acéticas, 83 % al género Acetobacter y
17% a Gluconobacter
A partir de las bayas sintomáticas se re-aislaron los microorganismos, recuperando sólo
4 especies de levaduras: 1. Saccharomyces cerevisiae 2. Issatchenkia orientalis 3. Pichia
membranifaciens 4.Pichia galeiformes.
Tabla 6:Agresividad de las levaduras re-aisladadas de la prueba de patogenicidad
MUESTRA
Pichia galeiformes.
Testigo
Picchia membranifaC iens
Issatchenkia orientalis
Saccharomyces cerevisiae
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Medias
15%
30%
58%
88%
100 %
a
a
b
c
c
DISCUSIÓN
Microheridas
Levaduras
(Degradan)
Azúcares de bayas
Alcohol
Bacterias
(Oxidan)
Acido acético
Perdida de mosto
Hongos
(Patógenos secundarios)
Ing. Agron. Rodriguez Romera, M.
LABORATORIO DE FITOPATOLOGIA – EEA MZA