Download guia de laboratorio para la tincion de gram en bacterias fitopatógenas

UNIVERSIDAD PEDAGOGICA Y TECNOLOGICA DE COLOMBIA
FITOPATOLOGIA GENERAL
GUIA DE LABORATORIO PARA LA TINCION DE GRAM EN BACTERIAS FITOPATÓGENAS
INTRODUCCIÓN.
Las bacterias en la agricultura son importantes patógenos de plantas las cuales
producen diferentes tipos de síntomas, como manchas foliares, tizones, pudriciones
suaves, sobrecrecimientos, entre otras. Al igual que para cualquier otro patógeno en
los diferentes grupos de microorganismos, es importante realizar un diagnostico de la
enfermedad, que para el caso de bacterias debe iniciarse con el test de Gram, el cual
permite distinguir entre bacterias Gram positivas y Gram negativas, partiendo de la
base que algunas en su pared celular pueden formar o no complejos con los
colorantes (cristal violeta).
OBJETIVO.
Clasificar bacterias fitopatógenas como Gram positivas o negativas, mediante tinción
de Gram.
METODOLOGIA.
1) En un mililitro de agua destilada estéril realice una suspensión de la bacteria en
cuestión.
2) Coloque sobre una lamina portaobjetos una gota de la suspensión bacterial,
con ayuda de un asa bacteriológica distribuya la gota en toda la superficie.
3) Flamee la base de la lámina portaobjetos (frotis) para fijar las bacterias.
4) Adicione sobre el frotis cristal violeta y deje reposar por un minuto.
5) Lave y retire el exceso de colorante con agua.
6) Adicione sobre el área de frotis una solución de yodo y deje reposar durante un
minuto.
7) Lave y retire el exceso de colorante con agua.
8) Agregue alcohol etílico (solvente) por treinta segundos sobre el área de frotis.
9) Agregue la solución de safranina por un lapso de diez segundos.
10) Lave con agua destilada estéril y seque.
11) Realice observaciones al microscopio y determine a qué grupo
pertenece la
bacteria basada en la coloración respectiva.
Nota: si las bacterias presentan o tiñen de un color purpura o violeta son
clasificadas como Gram positivas, mientras que si se tiñen de color rojizo a rosado
son Gram negativas.
REFERENCIAS
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