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UNIVERSIDAD PEDAGOGICA Y TECNOLOGICA DE COLOMBIA FITOPATOLOGIA GENERAL GUIA DE LABORATORIO PARA LA TINCION DE GRAM EN BACTERIAS FITOPATÓGENAS INTRODUCCIÓN. Las bacterias en la agricultura son importantes patógenos de plantas las cuales producen diferentes tipos de síntomas, como manchas foliares, tizones, pudriciones suaves, sobrecrecimientos, entre otras. Al igual que para cualquier otro patógeno en los diferentes grupos de microorganismos, es importante realizar un diagnostico de la enfermedad, que para el caso de bacterias debe iniciarse con el test de Gram, el cual permite distinguir entre bacterias Gram positivas y Gram negativas, partiendo de la base que algunas en su pared celular pueden formar o no complejos con los colorantes (cristal violeta). OBJETIVO. Clasificar bacterias fitopatógenas como Gram positivas o negativas, mediante tinción de Gram. METODOLOGIA. 1) En un mililitro de agua destilada estéril realice una suspensión de la bacteria en cuestión. 2) Coloque sobre una lamina portaobjetos una gota de la suspensión bacterial, con ayuda de un asa bacteriológica distribuya la gota en toda la superficie. 3) Flamee la base de la lámina portaobjetos (frotis) para fijar las bacterias. 4) Adicione sobre el frotis cristal violeta y deje reposar por un minuto. 5) Lave y retire el exceso de colorante con agua. 6) Adicione sobre el área de frotis una solución de yodo y deje reposar durante un minuto. 7) Lave y retire el exceso de colorante con agua. 8) Agregue alcohol etílico (solvente) por treinta segundos sobre el área de frotis. 9) Agregue la solución de safranina por un lapso de diez segundos. 10) Lave con agua destilada estéril y seque. 11) Realice observaciones al microscopio y determine a qué grupo pertenece la bacteria basada en la coloración respectiva. Nota: si las bacterias presentan o tiñen de un color purpura o violeta son clasificadas como Gram positivas, mientras que si se tiñen de color rojizo a rosado son Gram negativas. REFERENCIAS Agrios G. N. 1999. Fitopatología. Segunda edición, quinta reimpresión. Ed. Limusa – Grupo. Noriega Editores. México. 838 p. Agrios, G .N, 2005, fitopatología, Segunda edición. México, Limusa, 952 p. Arauz. C. L, F. 1998. Fitopatología, un enfoque agroecológico. Universidad de Costa Rica. 467 p. Carrillo, L. 2003. Microbiología agrícola. Capítulos 1 al 7. Blog: Futuro Agrónomo. [Consultado enero 2014]. Disponible en: http://networkedblogs.com/ugI3c Gilchrist. S, L., G; Fuentes. D, C; Martínez, C, R. M; López, A, E; Duveiller, R. P; Singh, M. Henry e I. García A. 2005. Guía práctica para la identificación de algunas enfermedades de trigo y cebada. Segunda edición. México, D.F.: CIMMYT. Duran. Q. J. A. 1998. Enfermedades y otros problemas de las plantas, reconocimiento de campo. 1. Ed. San José de Costa Rica. Editorial de la Universidad de Costa Rica. 256 p. Echandi. E. 1967. Manual de laboratorio par fitopatología general. Primera edición. Ed., IICA. Lima. Perú. [Consultado enero 2014]. Disponible en: http://books.google.com.co/books?id=i8QOAQAAIAAJ&printsec=frontcover#v=onepa ge&q&f=false Rivera. C. G. 2007. Conceptos introductorios a la fitopatología. San José de Costa Rica. EUNED. 346 p. [Consultado enero 2014]. Disponible en; http://books.google.com.co/books?id=xpTHXEWG_t8C&pg=PR6&lpg=PR6&dq=Rivera+ 2007+fitopatologia&source=bl&ots=OPRK-4hH_l&sig=PQbPd5o2HFlQeRUwO42Jd3otc8&hl=es419&sa=X&ei=FeITU7a6DIajkQeKzYHACA&redir_esc=y#v=onepage&q=Rivera%202007% 20fitopatologia&f=true Sosa. M. C; Perdomo. R. F; W.D. Brathwaite. C y Salazar. C. J. J. 1997. Técnicas para el diagnostico de enfermedades en plantas. Primera edición. Ed., IICA. México. [Consultado enero 2014]. Disponible en: http://books.google.com.co/books?id=EuMNAQAAIAAJ&printsec=frontcover&dq=GUI A+de+laboratorio+fitopatoloGia&hl=es-419&sa=X&ei=OuwXU_mYKIukQe_roAg&ved=0CEwQ6AEwBg#v=onepage&q&f=true