Download 106 Micropropagación: cultivo in vitro de menta PDF

MICROPROPAGACIÓN
CULTIVO IN VITRO DE SEGMENTOS NODALES DE MENTA (HIERBABUENA)
Las mentas o hierbabuenas son
plantas
perennes,
raramente
anuales,
que
se
expanden
mediante estolones. El fenómeno
de hibridación interespecífica que
ocurre naturalmente, dificulta la
caracterización de las especies,
clasificadas dentro del género
Mentha (familia Lamiaceae).
Originarias del Mediterráneo, las
mentas fueron introducidas en
Europa por los romanos. En
medicina natural, la menta es
utilizada en tizanas, infusiones y
cataplasmas por sus propiedades
estimulantes,
carminativas
y
antiespasmódicas. Debido a su
aroma y sabor característicos, la
menta es muy apreciada en el arte
culinario. Tanto su óleo esencial
como el mentol, son aromatizantes
populares en la instruida cosmética
y
de
alimentos
(dulces
y
chocolates).
Por otro lado, las propiedades
insecticidas del aceite esencial
explican su inclusión como plantas
acompañantes en la agricultura
orgánica.
En Brasil, las especies más comunes son la Mentha spicata o hierbabuena común (en la foto superior),
la Mentha piperita (menta piperita), y la Mentha pulegium o poleo.
BIBLIOGRAFÍA
ACADÉMIE DE TOULOUSE. Culture in vitro de la menthe. http://pedagogie.ac-toulouse.fr/svt/serveur/lycee/st
gaudens/menthe/civmenth.html
HORTAS. www.hortas.info
MALAJOVICH M.A. e MANN V.S. Micropropagación. Guía 80: Micropropagación en el laboratorio de enseñanza;
Guía 85: Desinfección de los instrumentos; Guía 90: Desinfección de los explantes y Guía 96: Los medios de
cultivo. http:/www.bteduc.bio.br
Guía 106
María Antonia Malajovich / Guías de actividades
Biotecnología: enseñanza y divulgación
http://www.bteduc.bio.br
MICROPROPAGACIÓN / CULTIVO IV DE SEGMENTOS NODALES DE MENTA
ACTIVIDAD PRÁCTICA
OBJETIVO
Cultivo in vitro de hierbabuena (Mentha piperita) a partir de segmentos nodales.
MATERIALES
Una planta de hierbabuena, azulejo, cuchillo, 1 frasco con agua sanitaria diluida al medio, 3 frascos
con agua estéril, 6 tubos de ensayo o frascos pequeños con medio nutritivo* estéril, palitos estériles,
mechero Bunsen (opcional).
* El medio nutritivo (Murashige & Skoog, Taji o Knop) es una solución de sales minerales a
la que se adiciona sacarosa (1 a 5%), agar (0,7%) y agua de coco, como se indica en las
Guías 111: Micropropagación: medios clásicos y 112: Micropropagación: medios alternativos.
PROCEDIMIENTO
La limpieza del lugar de trabajo es fundamental, así como la higiene de las manos. El
lugar de trabajo será desinfectado con alcohol 70º. Los participantes se lavarán muy
bien las manos y los antebrazos con agua y jabón, antes de pasarse alcohol 70º.
Cuidado! El alcohol es inflamable. Esterilizar el material contaminado antes de
descartarlo.
A. ESTABLECIMIENTO DE UN CULTIVO ASÉPTICO
1. Separación de los explantes
En un azulejo bien limpio, cortar segmentos del tallo de la hierbabuena conteniendo un nodo y
eliminar las hojas. Lavar los explantes.
2. Desinfección de la superficie de los explantes
Pasar rápidamente el material por alcohol 70º y sumergir el explante durante 10 minutos, en una
solución de agua sanitaria diluida al medio adicionada con 1 gota de detergente. Agitar
suavemente durante todo el proceso de desinfección.
3. Lavados en agua destilada estéril
Hacer tres lavados de 1, 3 y 5 minutos, con agitación suave.
Guía 106
María Antonia Malajovich / Guías de actividades
Biotecnología: enseñanza y divulgación
http://www.bteduc.bio.br
MICROPROPAGACIÓN / CULTIVO IV DE SEGMENTOS NODALES DE MENTA
4. Establecimiento del cultivo
En condiciones asépticas, transferir los explantes a los recipientes con medio nutritivo.
5. Incubación
A 20-28ºC, en presencia de luz.
6. Seguimiento
Registrar semanalmente as observaciones.
Guía 106
María Antonia Malajovich / Guías de actividades
Biotecnología: enseñanza y divulgación
http://www.bteduc.bio.br
MICROPROPAGACIÓN / CULTIVO IV DE SEGMENTOS NODALES DE MENTA
B. REGENERACIÓN DE LA PLANTA
Luego del crecimiento de hojas y raíces, transferir los explantes a un medio sin agua de coco y sin
azúcar. Siempre en condiciones asépticas.
Una vez que se desarrollan las raíces y antes de transferir la planta a tierra, eliminar el agar por
lavado. Controlas la humedad por un tiempo y proteger las plantas de la iluminación solar directa
hasta su adaptación a las condiciones ambientales.
NUESTRO COMENTARIO
La hierbabuena comprada en el comercio viene muy sucia, y a pesar del cuidado en la desinfección
de los explantes tuvimos un alto número de contaminaciones. Para contrarrestar este problema,
sembramos Mentha piperita en un vaso y retiramos los segmentos nodales de las plantes que crecían
(Figura 1).
El protocolo puede simplificarse. La hierbabuena no es una planta exigente y también se desarrolla
bien en medio de Knop adicionado con agua de coco o, inclusive, en un medio sólo con agua de coco
al 50%. Sin embargo, hasta que crecen las hojas es conveniente mantener las plántulas en un medio
con azúcar.
En relación con la esterilización, se puede reemplazar el agua destilada estéril de los lavados por
Clor-in 10. El único inconveniente es que los explantes quedan pegajosos y resulta necesario usar
un palito estéril para despegarlos de la pinza. Resulta más fácil si el trabajo es realizado en parejas.
¿CÓMO MONTAR UN PROYECTO?
Comparar el crecimiento con diferentes medios.
Cultivar in vitro otras variedades de hierbabuena, tales como Mentha pulegium o poleo.
Guía 106
María Antonia Malajovich / Guías de actividades
Biotecnología: enseñanza y divulgación
http://www.bteduc.bio.br
MICROPROPAGACIÓN / CULTIVO IV DE SEGMENTOS NODALES DE MENTA
Figura 1. Las plantas de hierbabuena utilizadas en este experimento.
A. Planta de Mentha piperita (semillas comerciales).
B. Mentha spicata (comprada en mercado de la calle)
Guía 106
María Antonia Malajovich / Guías de actividades
Biotecnología: enseñanza y divulgación
http://www.bteduc.bio.br