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Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. Título: Comportamiento de plantas in vitro de piña (Ananas comosus), c.v MD2 a diferentes tiempos e intensidades de iluminación en fase de aclimatización. 1 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. Pensamiento Me he sacrificado en esta vida para buscar el valor de un profesional: “luchar y sacrificarse es el mejor camino de la verdad” Yudismer La verdad no mancha los labios de quien la dice sino la conciencia de quien la calla. . José Martí. 2 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. Dedicatoria Dedico este trabajo a todos que colaboraron en hacerme un profesional, especialmente mi padre a mi madre Virginia, mis hermanos a mi abuela a mi querida tía Tina, mis primos y a mi adorable novia. 3 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. Agradecimientos Agradezco este trabajo a todas aquellas personas que de una manera u otra me ayudaron a realizar mis sueños, a mi querido padre mi querida hermana y hermano a mi abuela mi querida madrastra que con su amor me ayudó mucho y la llevo en el corazón igual que a mi querida madre en estos momentos, especialmente mi adorable tía (Tina) que en sus manos rescató lo que mi madre engendró en mi “ Educación y Amor “ a mi amigo Miguelito(Ñato) que en su esfuerzo demostró su valor, mis primos, y que no se me quede por alto a mi gran querida novia “Yadira” a mis compañeros de estudio mis profesores especialmente a mi tutora Lidia Galindo a todos, Muchas “Gracias” 4 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. RESUMEN El trabajo se desarrolló en el área de aclimatización del Centro Universitario “Vladimir Ilich Lenin” de Las Tunas, para evaluar el comportamiento de la piña (Ananas comusus (L). Merr) c.v MD2 con diferentes tiempos e intensidades luminosas. Los tratamientos utilizados fueron, el testigo que permaneció durante todo et experimento al 50% de reducción de la iluminación (R.I), 15 días al 50% R.I + 65 días al 25% R.I y 30 días al 50% R.I + 50 días al 25% R.I, 45 días al 50% R.I y 35 días al 25% R.I, 10 días al 75% R.I + 70 días al 50% R.I y 10 días al 75% R.I + 40dias al 50% R.I + 30 días al 25% R.I. Se evaluaron los siguientes parámetros fisiológicos altura de la planta, largo, ancho, área y el número de hoja, porcentaje de supervivencia y número de raíz largo máximo y media de la misma. El tratamiento que mostró los mejores resultados en la mayoría de los parámetros evaluados fue el testigo. 5 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. ABSTRACT The work was developed in the area of acclimatization of the University Center “Vladimir Ilich Lenin” of Las Tunas, to evaluate the behavior of the pineapple (Ananas comusus (L). Merr) c.v MD2 with different times and luminous intensities. The used treatments were, the witness that remained during the whole experiment to 50% of reduction of the illumination (R.I), 15 days to 50% R.I + 65 days to 25% R.I and 30 days to 50% R.I + 50 days to 25% R.I, 45 days to 50% R.I and 35 days to 25% R.I, 10 days to 75% R.I + 70 days to 50% R.I and 10 days to 75% R.I + 40dias to 50% R.I + 30 days to 25% R.I. The following parameters physiologic height of the plant were evaluated, long, wide, area and the leaf number, percentage of survival and number of root long maximum and mediates of the same one. The treatment that showed the best results in most of the evaluated parameters was the witness. 6 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. I. INTRODUCCION La piña, (Ananas comosus (L) Merr), está considerada como una de las frutas mas finas de las regiones tropicales. En la actualidad es conocida y estimada por todo el mundo, aunque su cultivo se limita a las regiones tropicales y subtropicales. La piña es un cultivo de gran importancia alimenticia y económica ya que aporta a la alimentación los componentes principales de la nutrición, y desde el punto de vista económico representa una fuente segura de obtención de divisa, por su apreciable demanda. Cuba cuenta en la actualidad con cerca de 4000 ha plantadas, las mayores áreas dedicadas a este cultivo se encuentran en la provincia de Ciego de Ávila con un área total de 706 ha y la gran mayoría de ellas, plantadas con la variedad Cayena Lisa, Peña et al; (1996)Recientemente la industria de la piña ha respondido a un aumento en la demanda de fruta fresca en los mercados templados con la introducción de cultivares más atractivos como 'MD2', también nombrada 'Golden Ripe', la cual tiene una buena aceptación para la exportación, especialmente en los países europeos Coppens y Leal, (2001). Teniendo en cuenta el incremento del área plantada y conociendo que la piña es una planta auto estéril, la producción de semilla es muy limitada para su propagación utilizándose la vía de bulbillos, claveles y criollos, pero estos presentan ventajas y desventajas. Según Villalobos et al, (1993), las herramientas biotecnológicas han demostrado ser de gran utilidad para mejorar los cultivos agrícolas en la propagación masiva de plantas superiores. El desarrollo de la micropropagación ha demostrado resultados altamente significativos en la rápida propagación de diversas especies de importancia económica ofreciendo varias ventajas sobre los métodos tradicionales de propagación de plantas Ponce (1999). En Cuba la piña se propaga según los 7 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. protocolos de (Daquinta y Escalona, 1998). La etapa crítica de estos protocolos es la fase de aclimatización. Esto tiene como objetivo elevar los porcentajes de supervivencia y acelerar el crecimiento y desarrollo de las vitroplantas mediante el manejo de varios factores en esta etapa. Además, según Sandoval, (1991) del resultado de esta, dependerá en gran medida la calidad final de las plantas y la eficiencia total del proceso. Esta situación ha ocasionado que en pocos programas de propagación masiva las pérdidas se produzcan en la fase de aclimatización. Estas pérdidas están dadas por dos causas fundamentales; una es, que las plantas in vitro obtenidas no reúnan las características adecuadas para pasar a la fase de aclimatización y la otra causa es que no se realiza un manejo adecuado en esta fase, trayendo un aumento en los costos de producción. Para lograr un desarrollo rápido y favorable de las plantas in vitro en esta fase, es preciso tener presente el manejo de factores tales como: la correcta selección y tratamientos del material de propagación, el empleo del sustrato adecuado y una intensidad luminosa acorde con las exigencias de las especies. La luz es uno de los factores más importantes que influye en esta fase y el más difícil de medir y regular (Ponce, 1999). Su gran importancia está dada por el perfil que se desempeña en la fotosíntesis, fundamentalmente por los procesos de síntesis y producción de energía necesarias para el crecimiento y desarrollo. El control de intensidad de la luz en esta fase es importante ya que las plantas provienen de un ambiente con intensidad baja y son expuestas a uno con alta intensidad y por lo tanto esta se debe regular para evitar la fotoinhibición del aparato fotosintético (Van Huylenbroek y col, 1995) Cada especie tiene exigencias muy propias en la fase de aclimatización y sobre todo a las intensidades de iluminación. Relacionado con esto, Rodríguez, (1999), al estudiar en plantas in vitro de caña de azúcar y Yanes, (2001) en piña cv. Cayena Lisa encontraron exigencias de iluminación que difería en dependencia de la especie, por lo que se desconoce con exactitud los valores adecuados de intensidad de iluminación durante toda la fase de aclimatación en planta in vitro de piña, constituyendo esta el problema Científico de 8 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. Investigación. La hipótesis de solución del problema es: que si se determina el tiempo y las intensidades de iluminación óptima contribuirá a mejorar la supervivencia y calidad de las plantas in vitro de piña. Por lo que el objetivo de este trabajo estuvo encaminado a evaluar el comportamiento de plantas in vitro de piña (Ananas comosus), cv MD2 a diferentes tiempos e intensidades de iluminación en la fase de aclimatización para obtener plantas de mejor calidad. 9 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. II. Revisión Bibliográfica. 2.1. ORIGEN E IMPORTANCIA La piña es considerada originaria de América y más precisamente de América del Sur. (Brasil). Su diseminación en el mundo comienza con la gran apertura de las vías marítimas por los portugueses y españoles en el transcurso del siglo XVI. Se plantea que la planta era conocida en la mayoría de las regiones tropicales del mundo a fines del siglo XVII. Smith, (1990). La primera introducción de la piña en Europa se plantea que ocurrió alrededor del año 1935, se cultivó en invernadero, pero debido a su desarrollo en los principales países productores, las producciones europeas disminuyeron, y en la actualidad sólo es cultivada en muy pocos países europeos en locales apropiados. Johoson, (1989). En Cuba el cultivo de la piña se conoce desde antes del descubrimiento, y alcanzó en la primera mitad del siglo XX un amplio desarrollo. En los años 1959 y 1960 Cuba ocupaba el noveno lugar de los principales países productores del mundo. Después del triunfo de la Revolución y más concretamente con la ruptura de relaciones con el gobierno de Estados Unidos y el inicio del bloqueo económico, se perdió el principal mercado comprador, con lo que el cultivo tuvo un decrecimiento casi total. En la actualidad se trabaja por su recuperación con vistas a satisfacer las necesidades nacionales y el mercado internacional. Peña, (1988). Entre los principales países productores y exportadores están Hawai, Brasil, México, Tailandia, Filipinas, Australia, Costa de Marfil y Guinea. Las principales provincias productoras de piña en Cuba son Ciego de Avila, La Habana, Guantánamo, Matanzas y Camagüey. Peña, (1988). 2.2 CARACTERISTICAS BOTANICAS La piña es una planta herbácea perenne. Después de la cosecha las yemas axilares del tallo siguen su desarrollo y forman una nueva planta que da un 10 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. segundo fruto, cuyo tamaño y calidad dependen de la variedad. Esta segunda planta también desarrolla sus yemas axilares y origina un tercer fruto. Aunque estas generaciones vegetativas pueden sucederse, en la práctica, los rendimientos alcanzados en las terceras plantas son bastante bajos comparados con los anteriores por lo cual generalmente sólo se permiten tres generaciones. La clasificación taxonómica de la piña es la siguiente, Mederos, (1988) División: Spermatophyta Subdivisión: Magnoliophytina Clase: Liliatae (Monocotiledoneae) Orden: Bromeliales Familia: Bromeliaceae Género: Ananas Especie: (Ananas comosus( L) Merr) La piña está formada por el tallo, las hojas, las raíces adventicias, el pedúnculo, el fruto y los hijos. TALLO La piña se caracteriza por poseer un tallo en forma de mazo que puede lograr entre 25 y 30 cm de altura por 2,5 a 3,5 cm de ancho, en dependencia del cultivar. Está rodeado por hojas dispuestas en espiral que impiden la observación directa del mismo. La parte subterránea puede ser ligeramente curvada de acuerdo al tipo de vástago que le dio origen. Almaguer (1987). Los entrenudos son bastante cortos, presentándose los más largos en la porción central, que es la más ancha del tallo, en cada nudo se encuentra una yema axilar a partir de la cual forman vástagos que difieren de su morfología y su comportamiento. 11 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. A partir del meristemo apical se desarrolla un pedúnculo, portado de la inflorescencia primero y del fruto después. Sobre el pedúnculo y debajo de la inflorescencia, hay hojas modificadas y cercanas a éstas se forman yemas axilares, que se desarrollan dando origen a los vástagos denominados bulbillos o basales. HOJAS Las hojas de las plantas de piña son numerosas, se disponen en forma de roseta con una filotaxcia 5/13 y difieren entre sí por su forma y tamaño. Las hojas más viejas, situadas en la base del tallo, presentan formas lanceoladas, con una constricción cercana a la base y levemente cóncava en unión con el tallo. Las hojas sucesivas más viejas son más largas y conservan su porción basal larga. Las hojas aun más jóvenes son más cortas y más estrechas, García; (1981). Las hojas tienen forma acanalada, lo que incrementan su rigidez en relación con otras plantas con el mismo espesor. Esta forma le permite a la planta aprovechar las pequeñas cantidades de agua provenientes de lloviznas o del propio rocío, pues ésta se desplaza hasta ponerse en contacto con las raíces situadas en las axilas de las hojas viejas y las ubicadas en el suelo. RAICES La piña, como todas las monocotiledóneas, presenta raíces primarias que tienen por origen el embrión de la semilla botánica y desaparecen rápidamente cuando las plántulas alcanzan cierto nivel de desarrollo. Posee además raíces adventicias, típicas de las monocotiledóneas que nacen entre el cilindro central y la corteza del tallo y las raíces secundarias que son ramificaciones de las raíces adventicias. En general el sistema radical es muy superficial, formado por raíces adventicias, extendiéndose una parte de ellas alrededor del tallo que no llegan alcanzar el 12 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. suelo y el resto que penetran en éste, encontrándose su mayor porciento en los 15 primeros cm de profundidad. Entre las características del sistema radical de la piña que deben tenerse en cuenta en el momento de realizar las labores fitotecnias se destacan: La elevada necesidad de oxigenación del suelo, su poca distribución vertical y horizontal, el alto porciento de raíces ubicadas en la superficie del suelo y su alta susceptibilidad a plagas y enfermedades, Peña et al; (1988). FLOR Las flores de la piña están agrupadas en una inflorescencia que se origina en el meristemo apical del tallo, y es sostenida en el pedúnculo. La inflorescencia es una espiga cuyo eje es la continuación del pedúnculo fibroso. La inflorescencia posee en su extremo superior un racimo de hojas denominado corona. Las flores hermafroditas, con cáliz de tres sépalos de color rojo a verde, corola de tres pétalos blancos o violetas, sus estambres dispuestos en dos verticilos de tres, un ovario tricarpelar y una bráctea gruesa y carnosa en la base y fina en su extremidad, Treto y Guzmán, (1979). FRUTO El fruto de la piña es compuesto llamado sorosis, formadas por un conjunto de frutos individuales y consta de: el eje de la inflorescencia, comúnmente llamado “corazón”, la corona o racimos de la hoja, la cáscara, el ovario, la base de los sépalos y las brácteas. El fruto se forma a partir de la inflorescencia, Trujillo, (1991). La corona se desarrolla durante el proceso de formación del fruto, entra en estado de reposo cuando este está maduro y continúa su desarrollo en el momento de ser plantada. 2.3. DESCRIPCION DEL CULTIVAR MD2' ('Golden Ripe', 'Extra Sweet', ‘Maya Gold’): 13 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. 'MD2' es un híbrido desarrollado por el Instituto de Investigación de Piña Hawaiano. Tiene un peso promedio (1.3 - 2.5 kg), la fruta es cilíndrica, con los ojos llanos grandes y un intenso color naranja amarillento. La pulpa es amarilla clara, dulce, compacta y fibrosa. Tiene un alto contenido de azúcares (15-17 ° Brix) y ácido ascórbico pero más bajo contenido en ácidos totales que la 'Cayena Lisa'. (Coppens y Leal, 2001) La variedad MD2 es susceptible a la putrefacción del tallo por el hongo Phytophthora. También es susceptible a la putrefacción del corazón de los frutos, y al amarillamiento relacionado con la cochinilla harinosa. Dicha variedad realmente no es “nueva”, ya que desde hace más de 20 años se viene cultivando en Costa Rica y otros países. Desde hace más de 10 años se tienen parcelas de esta variedad en Panamá, con material introducido por productores desde Costa Rica. Aizprúa, (2002) Recientemente la industria de la piña ha respondido a un aumento en la demanda de fruta fresca en los mercados templados con la introducción de cultivares más atractivos como 'MD2', también nombrada 'Golden Ripe', la cual tiene una buena aceptación para la exportación, especialmente en los países europeos (Coppens y Leal, 2001). 2.4. ECOLOGIA TEMPERATURA Se plantea que es el factor climático más importante. En el proceso de crecimiento y desarrollo de las plantas influye de manera decisiva en cada fase que se origina, se ha comprobado que el desarrollo del sistema radical se detiene con temperaturas menores de 19 a 20 oC al igual que cuando están por encima de los 35 oC el desarrollo máximo se alcanza con temperaturas entre 27 y 32 oC. También se ha determinado mediante algunos investigadores que el máximo desarrollo de la elongación de las hojas se produce entre los 27 y 32 oC estos dos órganos (raíz y hoja), tan importante para las plantas, se ven completamente limitados cuando las temperaturas son bajas, lo que comprueba el carácter tropical de este cultivo. 14 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. En otros procesos como la fructificación, se observa que los valores por encima de 32 o 33 oC provocan frutos con menor calidad que con valores entre 21 y 27 o C, que se reportan como los óptimos para la fructificación y diferenciación floral. Mederos, (1988). HUMEDAD Se puede plantear que entre los frutales, la piña es uno de los cultivos exigentes al agua. Este está dado por la disposición y acanalamiento de las hojas, lo cual permite recoger toda el agua que recibe. Para que este cultivo se desarrolle de manera óptima, necesita durante su ciclo de 1200 a 1500 mm de agua. Generalmente las plantaciones de piña se desarrollan sin aplicación de riego, no obstante, cuando se usa se debe hacer por aspersión. Al suministrarle a la planta alrededor de 60 mm mensual, esta mantiene una eficiencia hídrica correcta y se desarrolla todos sus procesos fisiológicos de manera óptima. VIENTOS Es un factor muy importante, por el daño que le pueda ocasionar a la planta, debido principalmente al poco desarrollo de su sistema radical. El viento puede provocar la caída de la planta, por el peso de los frutos, aumentar la transpiración de la planta, provocar la erosión del suelo y causar heridas en las hojas lo que puede permitir la entrada de algunos hongos patógenos que ocasionen dificultades en el desarrollo de la plantación , Peña, (1986). LUZ Este es otro factor que unido a las temperaturas, puede determinarse como limitante para la obtención de altos rendimientos. Se ha determinado que cuando las radiaciones solares disminuyen, como promedio el 20%, el rendimiento disminuye en un 10%, lo cual se debe a la relación de la síntesis de carbohidratos en las hojas y la utilización de nitrógeno. Se plantea que la luz tiene una acción notable en la coloración del fruto debido a su actuación en los pigmentos clorofílico y caroténicos, además influye en la composición química del fruto. En cuanto a la respuesta de la planta a la duración del día, este es variable, por ejemplo la variedad Cayena Lisa es una planta de días cortos, 15 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. mientras que la variedad cabezona, responde muy débilmente a las variaciones de las duraciones de los días. Mederos, (1988). SUELO Los suelos que se utilicen en el cultivo de la piña deben ser suelos sueltos, bien aireados y tener una topografía llana, lo que evita encharcamiento que puede provocar la presencia de Phytophtora parasítica (hongo que produce diversas enfermedades). Además deben de tener un alto contenido de materia orgánica, que su ph oscile entre 4,5 y 7,5 y buen drenaje, tanto interno como externo. En general debe de tener excelente condiciones físicas y químicas, aunque la mano del hombre es capaz de mejorar algunas condiciones que no fuesen ideales para el suelo, Torres et al; (1985). 2.5. REQUERIMIENTO DE LOS PRINCIPALES NUTRIENTES Según Peña et al; (1996) la planta de piña es alta consumidora de nutrientes, dentro de los que se destacan el nitrógeno y el potasio. En el metabolismo de la piña actúan otros elementos como el fósforo, calcio, magnesio, azufre, boro, manganeso, cobre, zinc y otros. Extracción de NPK en Kg según diversos autores. Autores N P2 O5 K2 O Stemart y col 67 19 238 Krauss 350 121 1131 Follett-Smith y Bourne 107 87 411 Bonane 83 28 437 Cowie 123 34 308 NITROGENO El nitrógeno es un componente principal de las proteínas constituyendo alrededor del 7% de las sustancias secas de la piña. Este elemento estimula el 16 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. crecimiento, estando las necesidades de la piña en este elemento, en función del nivel de crecimiento máximo posible que depende de otros factores, siendo el climatológico el principal. Las investigaciones realizadas sobre la nutrición de la piña en numerosos países, incluyendo Cuba, arrojan que este es un cultivo de gran consumo de nitrógeno. Es conocido que el nitrógeno es el elemento que más influye sobre el crecimiento y desarrollo de la planta, dado por sus funciones como constituyentes de la clorofila, las proteínas, los aminoácidos, los ácidos nucleicos, las auxinas y otros. FOSFORO A pesar de la piña absorber cantidades reducidas de fósforo, éste debe de ser bien aprovechado, pues se conoce con precisión que forma parte de diversas combinaciones orgánicas y enzimas, y además interviene en forma inorgánica en metabolismo de la planta. La carencia de este alimento hace que la planta produzca hojas de color sombrío, verde azulosa y marchitamiento en sus extremidades, las plantas con deficiencias de fósforo tiene un crecimiento erecto con hojas largas y estrechas. Las raíces son filamentosas y más largas, el fruto es pequeño con color carmelita y disminuye el número de vástago. El exceso de este elemento baja la producción y acelera la fructificación o sea, que a pesar de ser el macroelemento de menos importancia en la piña, su carencia causas fuertes perturbaciones en el metabolismo. POTASIO El potasio es tan importante como el nitrógeno y el fósforo, ya que como hemos planteado anteriormente, la piña tiene grandes necesidades de este elemento. La carencia de potasio en la piña produce un follaje verde a verde oscuro; las hojas con puntas secas, pequeñas, amarillas, puntiagudas, estrechas y con manchas cloróticas cerca de los bordes que se extienden progresivamente en 17 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. toda la hoja; la planta es de porte erecto, pedúnculo fructífero de poco diámetro y fruto pequeño, poco ácido y sin aroma. El potasio, junto con el nitrógeno, es el elemento nutritivo más importante en la piña. Entre ambos nutrientes existen estrechas relaciones, contrarrestando el potasio múltiples efectos indeseables de nitrógeno, por ejemplo la tendencia al acamado y el bajo contenido de ácido. Las dosis de potasio empleadas son variables en las diferentes zonas productoras, pues la nutrición depende de varios factores tales como el clima, el suelo, el cultivar, la calidad de la cosecha y otros. SUSTRATOS Se considera sustratos, a los materiales sólidos y porosos de origen natural o sintético, que solos o combinados garantizan un adecuado crecimiento de las plantas bajo condiciones ambientales. (Abad, 1989). Este tiene como función, dar a las plantas sostén mecánico y a la vez permiten tomar aire y agua, este puede o no intervenir en complejo proceso de la nutrición vegetal. Los sustratos que se emplean en canteros o en contenedores de diferentes materiales, uno de los requisitos que debe de cumplir para su utilización, es la sanidad. Cuando éstos se elaboran, almacenan o manejan correctamente, pueden contaminarse y provocar serios daños a las plantas durante su aclimatización. TIPOS DE SUSTRATOS Los sustratos pueden estar solos o combinados. Utilizándose suelo, cachaza, humus de lombriz, estiércol vacuno, ceniza, zeolita entre otros. A continuación se relacionan algunas particularidades de los sustratos objeto de la investigación realizada. CACHAZA 18 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. La cachaza se puede definir como un residuo en forma de torta que se elimina en el proceso de clarificación del jugo de la caña de azúcar, durante la fabricación del azúcar crudo Treto, (1982). El residuo que se obtiene por sedimentación del jugo suspendido y con posterioridad se somete a filtración que se denomina cachaza primaria y cachaza final al residuo que descarga de los filtros para ser desechado. Su constitución depende de varios factores: Tipo de suelo, variedad de la caña, tipo de cosecha (mecanizada o manual), grado de extracción del jugo, cantidad de cal y otros productos utilizados en la clarificación, métodos de filtración empleados y tamaño de los orificios de los coladores de jugos, Arzola, et al. (1997). Según Torres, (1985) la cachaza no posee una composición química definida pues depende de la zona cañera, del proceso seguido para la extracción etc. En comparación con el nitrógeno y el fósforo el potasio es muy bajo como puede verse en el siguiente ejemplo. Humedad 70% N 3,6% P2 O5 4,1% K2O 0.38% La cachaza representa para las plantas un buen aporte de nitrógeno y fósforo, no así de potasio, existiendo un efecto residual no inferior a cuatro cosecha. ZEOLITA En la actualidad escasean las materias primas para la producción de fertilizantes y los precios se incrementan, por lo que obtener una alta eficiencia se hace cada vez más necesaria, especialmente en las condiciones naturales del trópico: altas temperaturas, lluvias, características de los suelos etc donde aumentan las pérdidas de fertilizantes por vías diferentes (Volatización, lavado, etc.), causando pobre utilización de las mismas. Arzola, (1997). Zeolita en la aclimatización. 19 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. El empleo de zeolita como material constituyendo sustrato, se ha expandido en la actualidad con incrementos con rendimientos de los cultivos. Se ha utilizado la zeolita con otros materiales en la vitroplantas de plátano, papa, caña y malanga; esquejes de guayaba, uva u algunos forestales. Cuando se utiliza se logran menor tiempo de aclimatización, mayor desarrollo radical y foliar de las plantas, además de favorecer el manejo de sustrato se puede utilizar la zeolita en la fase, en dependencia del cultivo desde un 15% hasta un 100%. Jiménez, (1998). 2.6. FORMAS DE PROPAGACION La piña es una planta autoestéril, por lo cual su producción de semillas es muy limitada lo que conlleva a la forma asexual para su propagación. Anteriormente fue planteado que esta planta produce varios tipos de vástagos o hijos, que son las distintas formas, por las cuales se pueden propagar. Todas presentan ventajas y desventajas y a continuación se analizan brevemente Py, (1968). BULBILLOS De todas las formas, son las preferidas por los agricultores cubanos, debido a su recogida fácil y menor susceptibilidad a las pudriciones. El peso promedio del bulbillo para la plantación debe de estar entre 150 y 200 g y presenta un ciclo natural de 17 a 18 meses. En la variedad Española Roja, son los vástagos más abundantes. CLAVELES Son los hijos que salen de las axilas de las hojas y en el tallo en cantidad de dos o tres por planta son muy susceptibles al ataque de los hongos, lo que limita su uso, su peso oscila entre 250 y 500 g y su ciclo natural de producción puede variar entre 13 y 16 meses Py, (1968). CRIOLLOS 20 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. Son de mayor tamaño que los explicados anteriormente, pueden alcanzar un peso hasta 700 g, brotan de la base o del cuello de la planta. CORONA La corona, también llamada penacho, se encuentra situada en la base superior del fruto, solo se recomienda como material de propagación cuando no existan otros, debido a su susceptibilidad al ataque de hongos. 2.7. MICROPROPAGACION La micropropagación de clones o individuos genéticamente iguales en corto tiempo a pasado de la fase de laboratorio de investigación, al establecimiento de la producción masiva, para muchas especies a escala comercial, mediante técnicas del cultivo in vitro. En nuestro país con el desarrollo de la biotecnología se han establecidos tecnologías que garantizan la micropropagación de la piña, entre ellas la variedad Cayena Lisa, Peña et al; (1996). El cultivo de tejidos vegetales, in vitro como sistema de propagación consiste en extraer pequeños fragmentos de tejidos jóvenes de la planta que se desinfectan y crecen en un medio artificial estéril que comprende diversos tipos de sustancia de crecimiento, destinada a inducir la proliferación de plántulas, en una cámara de ambiente controlado. El tipo de tejido empleado (explante) es muy variable: Tejido floral, tejido juvenil, yemas laterales de brote, corona o tallo, fragmentos de hojas jóvenes Hurtado et al; (1988). La propagación por este método, puede resumirse en cuatro etapas, según Pérez, (1988). 1. Etapa de establecimiento El objetivo de esta etapa consiste en obtener el desarrollo del tejido sembrado libre de contaminaciones bacterianas y fúngicas, así como obtener plántulas de tamaño más fácilmente manipulables. El método de desinfección del explante hay que adecuarlo al tipo del tejido que se siembra y al grado de contaminación presente. Daquinta y Martínez (1991). 21 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. El tratamiento de desinfección se realiza con Na.CLO según el grado de infestación. 2. Etapa de multiplicación. Consiste en inducir el desarrollo de yemas en las plantinas formadas en la etapa anterior. Esto se logra adecuando el tipo, la concentración y el balance de las fitohormonas que se añaden al medio de cultivo. En esta etapa se pueden obtener hasta diez plantas, a partir de cada plantina. Su duración es de 30 a 45 días y puede repetirse cuantas veces se desee, separando del racimo de plantas formadas pequeñas agrupaciones de dos – cuatro e incluso individuales. Hay autores que no recomienda efectuar muchas repeticiones de cada etapa por lo que aparecen mutaciones genéticas. 3. Etapa de enraizamiento Consiste en la individualización de las plantas formadas y su siembra en un medio de cultivo hormonal que induzca la formación de raíces siendo la etapa más costosa y laboriosa. 4. Etapa de aclimatización La etapa de aclimatización garantiza un retorno gradual de las plantas in vitro a sus características morfológicas normales, es trascendental para la preparación comercial pues del resultado de ésta, dependerá en gran medida la calidad final de las plantas y la eficiencia total del proceso. Agramonte et al; (1998). La aclimatización de vitroplantas a condiciones ambientales, constituye una etapa muy crítica en la propagación masiva de especies vegetativas mediante cultivo de tejidos, ya que estas después de permanecer durante un prolongado período de tiempo en condiciones muy controladas de luz, temperatura, humedad relativa y necesidades nutricionales, sufren un gran estrés cuando son puestas en contacto con condiciones del ambiente. Agramonte et al, (1998). 22 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. La fase de aclimatización es de vital importancia para lograr plantas sanas y vigorosas aunque en muchos casos este importante requisito se ve obstaculizado por la incidencia de plagas y enfermedades. La alta humedad relativa que se requiere, sobre todo en los primeros momentos después del trasplante para evitar transpiraciones excesivas y con ello lograr un desarrollo adecuado de los estomas y la cutícula favorece la aparición de numerosos organismos entre los que predominan, algas, hongos, fitopatógenos aéreos y del suelo, moluscos y enfermedades bacterianas, Leiva, (1999). En este proceso, lo más importante es garantizar que las plantas que se extraen del ambiente controlado no mueran, es decir alcanzar altos porcentajes de supervivencia, Aguilera, (1999). Dentro de los factores que influye en esta fase la luz es uno de los más importante y el más difícil de medir y regular (Ponce, 1999). Su gran importancia está dada por el perfil que se desempeña en la fotosíntesis, fundamentalmente por los procesos de síntesis y producción de energía necesarias para el crecimiento y desarrollo. 2.8. EFECTOS DE LA LUZ EN EL PROCESO DE FOTOSÍNTESIS. Según Vázquez y Torre, (1995), la fotosíntesis al igual que otros procesos biológicos, está sometido a las condiciones del ambiente. Dicho proceso solo se realiza entre determinados intervalos de temperatura, iluminación, humedad y concentración del CO2. Según Daubenmire, (1995), la luz es de fundamental importancia como fuente primaria de energía para el proceso fotosintético. La estructura básica de las plantas verdes, con las hojas dispuestas adecuadamente para interceptar grandes cantidades de luz, favorece el desarrollo de la fotosíntesis. La misma influye en la fotosíntesis desde tres puntos de vista: calidad, duración e intensidad. La hoja de la planta es el órgano fotosintético más importante y está particularmente adaptada para una eficaz absorción de la luz; precisamente las longitudes de onda absorbidas por las hojas son también las que se relacionan con el proceso de la fotosíntesis. Vázquez y Torres (1981). 23 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. Para que la planta pueda crecer, tiene que formar mediante la fotosíntesis, durante el día, más materia orgánica de la justamente necesaria para compensar las pérdidas ocasionadas por la respiración diurna y nocturna. Para que las hojas individuales de la mayoría de las plantas verifiquen una fotosíntesis óptima se necesita una intensidad luminosa mucho menor que la solar plena. Las hojas gruesas poseen la máxima absorción de la luz con un porcentaje más bajo de luz trasmitida, mientras que las hojas delgadas absorben menos luz y tienen un mayor porcentaje de luz trasmitida. La transmisión de la luz promedio de las hojas verdes oscila entre 25 y 35% de la luz incidente, impidiendo la radiación infrarroja, aunque debe aclararse que las hojas son casi transparente a las radiaciones infrarrojas y a las longitudes de onda superiores. Bidwell, (1979). 2.9. INTENSIDAD DE ILUMINACIÓN. La intensidad de la fotosíntesis tiene una relación directa con la intensidad de la luz, dentro de determinados intervalos cuando no existe ningún otro factor limitante. Si se ilumina una planta con una luz poco intensa, el resultado sería la fijación de cierta cantidad de CO2 y el desprendimiento de otra cierta cantidad de O2. Si la intensidad de la luz es muy débil, la cantidad de CO2 fijado en la fotosíntesis será menor que la cantidad de CO2 desprendido en la respiración. Cuando la intensidad de luz aumenta se llega a alcanzar un punto en el que el cambio fotosintético de gases se equilibra, es decir la cantidad de CO2 fijada en fotosíntesis será igual al CO2 desprendido en la respiración. Bohning, (1949). En la medida que la intensidad de la luz va aumentando, la cantidad de CO2 absorbido va siendo mayor que la cantidad de CO2 desprendido, de manera que un intervalo considerable, el valor del intercambio fotosintético va aumentando proporcionalmente con la intensidad luminosa, pero cuando esta alcanza un valor suficientemente elevado, su incremento no va acompañado del aumento correspondiente a la actividad fotosintética; en este caso, la planta ha alcanzado el punto de saturación luminosa. Lellninger, (1986). 24 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. Cuando la planta está lumínicamente saturada, nuevos incrementos de luz no van acompañados del aumento correspondiente de actividad fotosintética, y otro factor (el CO2 o la temperatura), pueden en este caso estar limitando la fotosíntesis, el valor de la cual se mantendrá estacionario hasta tanto no se eleve el valor de las temperaturas. El proceso de fotosíntesis puede mantenerse normalmente en la mayoría de las plantas durante largos períodos de exposición a la luz, sin que se observe ningún efecto dañino notable para la planta. Todo parece indicar que cuando la planta está expuesta a un periodo largo de luz, tiene más posibilidades de realizar mayor cantidad de fotosíntesis; no obstante, los periodos prolongados de iluminación pueden traer otras consecuencias secundarias al estado fisiológico de la planta , ya que el periodo de iluminación puede ir acompañado de altas temperaturas, lo cual suele ocasionar una pérdida prolongada de agua en la planta y afectar su balance hídrico y el valor de la intensidad fotosintética. Vázquez y Torres. (1995). La intensidad luminosa influye sobre las características de las plantas. Comparada con una intensidad luminosa reducida, la luz solar plena induce la formación de tallos gruesos, xilema bien desarrollado y entrenudos más cortos. El efecto de la intensidad luminosa sobre los rasgos fisiológicos de las plantas es tan pronunciado como sobre los morfológicos. El contenido de clorofila es usualmente más bajo en las plantas expuestas a la luz solar plena, esta puede ser la causante de una más baja proporción fotosintética, una elevada proporción de respiración y un alto punto de compensación. Una alta intensidad luminosa provoca en la planta un aumento de la transpiración y una disminución de agua respecto a su peso seco. Marsh, (1941). Según Verkerk (1955), las interacciones de la luz y temperatura bajo condiciones ambientales controladas se deduce que la luz relativamente débil ejerce el mismo efecto que la temperatura relativamente alta, ocasionando la producción de tallos más delgados, hojas más débilmente coloreadas, menos 25 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. yemas florales y menos y más pequeños frutos, con menor contenido de almidón y azúcares. En condiciones naturales, las plantas son capaces de adaptarse a una gran variedad de condiciones ambientales mediante cambios morfológicos, fisiológicos y bioquímicos. Entre estos factores la intensidad luminosa es uno de los que más influyen en la composición de pigmentos de las plantas. El efecto causado por la intensidad luminosa ejerce su acción de forma sinérgica con otros estreses que afectan a la planta durante su desarrollo. Cuando se produce estrés y la luz resulta excesiva, las plantas activan los mecanismos de disipación de la sobrexcitación del aparato fotosintético. Estos, básicamente, consisten en una reducción de la eficiencia de la captura energética, a través de modificaciones en la composición pigmentaria y una atenuación de los efectos oxidativos del estrés mediante el incremento de los sistemas antioxidantes de la planta. Artexe, (1999). 26 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. III. MATERIALES Y METODOS El trabajo se desarrolló en la fase de Aclimatización del Centro Universitario en plantas in vitro de piña de la variedad MD2 desde el mes de febrero hasta abril del 2003. Se realizó este experimento para evaluar diferentes intensidades luminosas en plantas in vitro de piña (Ananas comosus). Las plantas son provenientes de la Biofábrica de maleza provincia de Villa Clara de un 9 no de Santa Clara, subcultivo, se le realizó una selección de plantas para lograr homogeneidad en las condiciones experimentales. Los tratamientos utilizados fueron los siguientes: I- Testigo, las plantas permanecieron los 80 días expuestas al 50% de reducción de la iluminación. II- 15 días expuesta las plantas in Vitro al 50% de reducción de iluminación y 65 días al 25% reducción de la iluminación III- 30 días expuestas las plantas in vitro al 50% de reducción de iluminación y 50 días al 25% reducción de la iluminación. IV- 45 días expuestas las plantas in vitro al 50% de reducción de iluminación y 35 días al 25% reducción de la iluminación. V- 10 días expuesta las plantas in vitro al 75% de reducción de la iluminación y 70 días al 50% reducción de la iluminación. VI- 10 días expuesta las plantas in vitro al 75% de reducción de la iluminación y 40 días al 50% y 30 días al 25% reducción de la iluminación. Se utilizó como sustrato en todos los tratamientos de cachaza al 75% y zeolita al 25%, el cual se utiliza en la Biofábrica de Villa Clara para la piña. Se emplearon cajuelas de 70 alvéolos para cada tratamiento de los cuales se evaluaron 35 plantas, determinándose el número, largo, ancho y área promedio de las hojas, a los 15, 30, 45, 60 y 80 días se determinó la altura de la planta, 27 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. longitud máxima y media de las raíces así como el número de estas a los 80 días. El área de las hojas se determinó por el método de integración aproximada, para el cálculo del área de figuras irregulares. Riquenez, (2002). utilizándose la c, d y e. Fórmula: A= h/3 (yo +yn +4I+2y2 ) Donde: h= d/n d= diámetro n = # de los segmentos de partición yo,y1 ...yn= mediciones de las alturas trazadas desde los extremos de los segmentos. Se les determinó el porcentaje de supervivencia a los 10, 15, 30, 45, 60 y 80 días. El riego se efectuó diariamente según está instrumentado en la fase de aclimatización. (Minagric, 1999). La intensidad luminosa se determinó con un luxómetro variando entre 90015000 lux con una densidad de flujos de fotones fotosintéticos (DFFF) 16,65277,5 µ mol. m2. s-1 para el área del 75% de reducción de la iluminación(R.I) y de 1200 - 1800 lux con una (DFFF) de 22,2-525 µ mol. m2. s-1 para el área de 50% de R.I y de 900 a 7200 con una (DFFF) 166,5-1332 µ mol. m2. s-1 para el área al 25% de R.I. Para la evaluación de los resultados se utilizó el paquete estadístico del ICA versión 2 del 1998. Los porcentajes de supervivencia se transformaron por la fórmula 2 arcsen√ p donde P es el porcentaje en fracción, se utilizó el análisis de varianza simple completamente aleatorizado y como prueba de comparación de medias la de rangos múltiples de Duncan para un 5% de significación, Lerch,(1977). 28 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. En el número de hojas los datos fueron transformados a través de la fórmula √x +1 donde x es el número de hojas. Se tomaron muestras de plantas que estaban marchitas y se llevaron al laboratorio de Sanidad Vegetal de la provincia, para su análisis. Los datos climáticos están reflejados en la tabla1.1 y la tabla 1.2 los cuales se tomaron del Centro Provincial de Agrometeorología de Las Tunas. 29 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. IV. RESULTADO Y DISCUSIÓN En el proceso de aclimatización, lo más importante es garantizar que las plantas que se extraen del ambiente controlado no mueran, es decir que alcancen altos porcentajes de supervivencia, Aguilera. M, (1999). Al analizar este a los 10 días del trasplante tabla 2, el testigo presentó los mayores valores seguidos de los tratamientos en que permanecieron 30 días al 50 % de reducción de la iluminación (R.I) y 50 días al 25% de R.I y 45 días al 50% R.I y 35 días al 25% de R.I sin diferencias significativas entre si y con diferencias significativas con los restantes tratamientos. Los menores porcentajes de supervivencia los obtuvieron los dos tratamientos que permanecieron los 10 primeros días al 75% de R.I, esto puede ser debido al exceso de humedad ya que el riego se le aplicó la misma cantidad para todos los tratamientos y con la reducción de iluminación del 75% la transpiración se hace menor. A partir de los 15 días la mayoría de los tratamientos comenzaron a disminuir la supervivencia de forma marcada hasta los 45 días sin diferencias significativas entre el testigo y los restantes tratamientos. A los 60 días el testigo presentó el mayor porcentaje seguido del tratamiento que permaneció 10 días al 75% de R.I y 70 días al 50% de R.I sin diferencias significativas entre si, pero con diferencias significativas el testigo con los restantes tratamientos. A los 80 días no se observaron diferencias significativas entre los tratamientos, presentando el mayor porcentaje de supervivencia el testigo. En general los porcentajes de supervivencia en el experimento fueron muy bajos, pudiendo ser debido a diferentes factores, entre ellos la exposición a mayores intensidades luminosas de lo que normalmente están expuestas las vitroplantas, como por ejemplo los tratamientos que durante 65, 50, 35 y 30 días estuvieron colocadas a una reducción del 25% de intensidad de iluminación. Según Hurtado, (1988) las vitroplantas después de permanecer durante un prolongado período de tiempo bajo condiciones muy controladas de luz, 30 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. temperatura, humedad relativa y nutricional, sufren un gran estrés y pueden hasta morir cuando son puestas en contacto con las condiciones del ambiente. Por otro lado el exceso de humedad en algunos tratamientos fue dependiente de la exposición de diferentes intensidades luminosas, ya que a todos se le aplicó la misma cantidad de agua y también hubo muertes por enfermedades fungosas (Phytium debaryarum) que afectaron en su gran mayoría a todos los tratamientos. Leiva, (1999) la fase aclimatización es de vital importancia para lograr plantas sanas y vigorosas pero en muchos casos este importante requisito se ve obstaculizado por la incidencia de plagas y enfermedades. Yanes, (2001), trabajando en plantas in vitro de piña demostró buenos resultados de supervivencia con un buen manejo de la luz, los mayores porcentajes de supervivencia en la primera etapa se alcanzaron con baja densidad de flujo de fotones fotosintético (DFFF) 222-458 µ mol. m2. s-1. Sin embargo en la segunda etapa se elevó la DFFF hasta 920 µ mol. m2. s-1 sin que afectara la supervivencia. Según Cedeño (2002) en diferentes tiempos de intensidades luminosas en plantas in vitro de malanga (Colocasia sculenta) no encontró diferencias en este parámetro. 31 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. Tabla 2. Comportamiento del porcentaje de supervivencia Días Tratamientos 10 (Testigo) 15 30 45 60 80 95.7 a 87.1 81.4 72.8 71.4 a 67.1 87.1 b 78.5 67.1 61.4 55.7 b 47.1 30 d +50 d 90 a 77.1 70 60 54.2 b 50 452d + 353d 92.8 a 82.8 75.7 71.4 51.4 b 48.5 101d + 702d 85 bc 82.8 72.8 68.5 64.2 ab 61.4 101d + 402d + 80 c 72.8 65.7 62.8 61.4 b 58.5 CV:% 2.75 3.72 5.15 2.99 5.3 2.77 ES X 0.026 0.024 0.050 0.029 0.030 0.028 802d 152 d+ 653d 2 3 303d ¾ Leyenda ¾ d días. ¾ 1- 75% de reducción de la iluminación. ¾ 2- 50% de reducción de la iluminación. ¾ 3- 25% de reducción de la iluminación. Comportamiento de la parte Aérea. Al analizar el número de hojas, Tabla 3, hasta los 60 días no se presentaron diferencias significativas entre los tratamientos, pero sin embargo a partir de los 45 días se denotó mejores respuestas en el testigo y en el tratamiento donde se redujo la intensidad de iluminación en los primeros 10 días al 75% y los restantes 70 días al 50% R.I. A los 80 días el testigo se mantuvo entre los mejores resultados seguidos de los tratamientos donde durante los 10 primeros días del trasplante se les redujo la iluminación al 75% sin diferencias significativas entre sí y con diferencias significativas con los restantes tratamientos. 32 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. En todos los tratamientos se le observó disminución del número de hojas, pudiendo este ser debido a la aparición de larvas de Lepidópteros (Spodoptera sp) que se alimentaron de algunas hojas, así como la marchitez de las hojas más viejas. Tabla 3: Número de hojas activas Días Tratamientos 15 30 45 60 80 (Testigo) 7 6 10 9 8 a 6 5 7 8 7.4 b 30 d +50 d 6 6 7 8 6 452d + 353d 6 5 7 7 5.6 c 101d + 702d 6 6 10 9 8 a 101d + 402d + 6 6 9 8 7.6 ab CV:% 12.7 16.7 14.8 11.7 7.3 ES X 0.03 0.04 0.03 0.04 0.02 802d 152 d+ 653d 2 3 bc 303d ¾ Leyenda ¾ d días. ¾ 1- 75% de reducción de la iluminación. ¾ 2- 50% de reducción de la iluminación. ¾ 3- 25% de reducción de la iluminación. Al analizar el largo de la hoja, Tabla 4, se observó que hasta los 45 días no presentó diferencias significativas entre los tratamientos los 60 días la mayoría de los tratamientos disminuyeron el largo de la hoja a excepción del testigo y el tratamiento que transcurrió por las tres intensidades de iluminación no presentando diferencias significativas entre ellos y sí, diferencias significativas con los restantes tratamientos. 33 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. A los 80 días todos los tratamientos aumentaron la longitud de las hojas presentando el testigo la mayor longitud, seguido del tratamiento en que se le disminuyó la intensidad luminosa los 10 primeros días al 75% y 70 días al 50% sin diferencias significativas entre sí y con diferencia significativa con el resto de los tratamientos. En general se observa que no hay una repuesta positiva cuando las plantas in vitro pasan a mayor intensidad de iluminación, los tratamientos que permanecieron mayores tiempos expuestos a menor intensidad de iluminación presentaron los mejores valores, lo que indica que la intensidad luminosa pudo influir sobre el crecimiento de la hoja. Según Devlin, (1975) a medida que crece la intensidad de la luz, se va produciendo una reducción de la intensidad fotosintética, a algunos factores limitantes o a los efectos destructores de la alta intensidad luminosa. Estos resultados coinciden con Cedeño (2002) al analizar en diferentes tiempos de intensidades luminosas en planta in vitro de malanga (Colocasia sculenta). Tabla 4 Comportamiento del largo de la hoja (cm) Días Tratamientos 45 60 80 3.92 3.57 3.60 a 4.48 a 152 d+ 653d 3.14 3.36 3.12 b 3.63 b 302d +503d 3.59 3.50 3.25 b 3.96 bc 452d + 353d 3.59 3.63 3.14 b 3.62 dc 101d + 702d 3.64 3.99 3.26 b 4.07 a 101d + 402d + 3.15 3.42 3.65 a 3.47 d CV:% 20.5 18.7 19.8 20.2 ES X 0.13 0.12 0.10 0.13 (Testigo) 30 802d 303d 34 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. ¾ Leyenda ¾ d días. ¾ 1- 75% de reducción de la iluminación. ¾ 2- 50% de reducción de la iluminación. ¾ 3- 25% de reducción de la iluminación. Al analizar el ancho de la hoja, Tabla 5, a los 30 días del trasplante, el mayor valor correspondió al testigo presentando diferencia significativa con el tratamiento que permaneció 15 días al 50% de R.I y 65 días al 25% y sin diferencias significativa con el resto de los tratamientos. Este resultado puede ser debido a que en ese muestreo fue el único tratamiento que había variado de intensidad luminosa y los restantes tratamientos no la habían realizado. A los 45 días no se observó diferencias significativas entre los tratamientos siendo el mejor el que permaneció los 10 primeros días al 75% de R.I 70días al 50% de R.I. En el tercer muestreo (60 días) el mejor ancho de la hoja correspondió al tratamiento donde se redujo la iluminación durante los 10 primeros días del trasplante al 75% + 70 días al 50%, seguido del testigo y el otro tratamiento que también presentó reducción de iluminación los 10 primeros días al 75% + 40 al 50% y 30 al 25% sin diferencias significativas entre ellos y con diferencias significativas con los restantes tratamientos. Estos mayores anchos correspondieron con los tratamientos que permanecieron el menor tiempo en intensidades de iluminación del 25%, lo que corrobora lo planteado por Wuilsie (1978), en que la luz solar plena induce a hojas más pequeñas, pero más gruesas y estomas más pequeños y numerosos. En el ultimo muestreo (80 días) el testigo presentó los mejores resultados seguidos de los dos tratamientos que se mantuvieron los 10 primeros días a la reducción de intensidad luminosa del 75% y el tratamiento que permaneció los 45 días al 50% y 35 días al 25% sin diferencias significativas entre sí y con diferencias significativas con los dos restantes tratamientos. 35 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. Es de señalar que los tratamientos que presentaron los menores anchos fueron los que se mantuvieron mayor tiempo expuesta a mayores intensidades de iluminación lo que corrobora por Cedeño (2002) al evaluar en diferentes tiempos de intensidades de iluminación en planta in vitro de malanga(Colocasia esculenta). Por otro lado Vázquez y Torres, (1995) que en el período de iluminación puede ir acompañada de altas temperaturas, lo cual suele ocasionar una perdida prolongada de agua en la planta y afectar su balance hídrico y el valor de la intensidad fotosintética. Los resultados obtenidos están relacionados con estos planteamientos pues, tanto el largo y ancho de las hojas presentaron a los 80 días los menores valores en los tratamientos en que las vitroplantas permanecieron más tiempos expuestas a mayor intensidades luminosa que trae consigo mayor perdidas hídricas por la transpiración. Tabla 5 Comportamiento del ancho de la hoja (cm) Días Tratamientos 2 30 45 60 80 (Testigo) 80 d 0.50 a 0.48 0.88 a 1.24 a 152 d+ 653d 0.41 b 0.45 0.75 c 0.93 b 302d +503d 0.48 a 0.48 0.79 bc 0.98 b 452d + 353d 0.47 a 0.46 0.76 c 1.18 a 101d + 702d 0.46a 0.52 0.95 a 1.19 a 101d + 402d + 303d 0.46 a 0.49 0.86 ab 1.16 a CV:% 20.8 21. 0 20.7 18.5 ES X 0.017 0.017 0.029 0.043 36 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. ¾ Leyenda ¾ d días. ¾ 1- 75% de reducción de la iluminación. ¾ 2- 50% de reducción de la iluminación. ¾ 3- 25% de reducción de la iluminación. Al medir indicadores fisiológicos cuando se hace en la planta, el área de la hoja es importante y sobre todo cuando se trata de determinar la posible influencia de diferentes intensidades de iluminación en plantas in vitro. Como se observa en la Tabla 6, no se evidenció diferencias significativas entre los tratamientos, aunque el testigo presentó el mejor valor y una tendencia en el largo y ancho de la hoja, iluminación lo que indica que a mayores intensidades de presentan menores valores. Estos resultados coinciden con Cedeño (2002) en que a mayor tiempo de exposición de intensidades de iluminación menores son los valores. Según Devlin (1975) cuando la intensidad de luz incidente sobre un órgano fotosintetizador aumenta por encima de un cierto punto, las células de este órgano se hacen vulnerables a las fotooxidaciones catalizadas por la clorofila. Al resultar de ello, son excitadas mucha más moléculas de clorofilas de los que probablemente pueden ser utilizadas, provocando efectos secundarios notablemente dañinos. 37 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. Tabla 6 Comportamiento del área de la hoja en (cm2) Tratamientos 80 días (Testigo) 802d 10.72 152 d+ 653d 8.62 302d +503d 9.09 452d + 353d 9.12 101d + 702d 9.57 101d + 402d + 303d 9.19 CV:% 18.7 ES X 0.78 ¾ Leyenda ¾ d días. ¾ 1- 75% de reducción de la iluminación. ¾ 2- 50% de reducción de la iluminación. ¾ 3- 25% de reducción de la iluminación. Son muchos los factores que influyen en el comportamiento de la altura del tallo, Tabla 7, a los 80 días no se encontró diferencias significativas entre los tratamientos lo que nos indica que en el caso específico de la piña, que posee una característica forma en espiral de sus hojas se hace difícil medirlo No obstante a esto se denota que la mayor altura correspondió al testigo que fue el tratamiento que permaneció todo el tiempo al 50% de R.I. 38 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. Tabla 7 Comportamiento de la altura del tallo Tratamientos 80 días 802d (Testigo) 0.38 152 d+ 653d 0.34 302d +503d 0.36 452d + 353d 0.34 1 2 10 d + 70 d 0.34 101d + 402d + 303d 0.36 CV:% 17.1 ES X 0.015 ¾ Leyenda ¾ d días. ¾ 1- 75% de reducción de la iluminación. ¾ 2- 50% de reducción de la iluminación. ¾ 3- 25% de reducción de la iluminación. Comportamiento del sistema radical Al analizar el sistema radical, Tabla 8, se observó que en la longitud máxima no hubo diferencias significativas entre los tratamientos. En cuanto el número de raíz los tratamientos que permanecieron más tiempo en intensidades de iluminación altas fueron menores el número de estas, los tratamientos de mayor números de raíces fueron el testigo los que permanecieron los 10 primeros días al 75% de R.I. El largo medio de las raíces mostró cierta repuestas a las diferentes intensidades luminosas estudiadas, presentando el mejor comportamiento el testigo y el tratamiento de los 10 días al 75% de reducción de la iluminación + 70 días al 50%, seguido de los tratamientos que se utilizó las tres variantes de intensidad luminosa y el tratamiento que mantuvo 45 días al 50% + 65 días al 25%, no 39 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. existiendo diferencias significativas entre ellos pero si con los demás tratamientos. Dá Silva, et al, (1997). Informa que en las plantas micropropagadas es muy importante un buen desarrollo de la raíz. Tabla 8 Comportamiento del sistema radical. Número de Largo máximo Largo medio raíces de la raíz de la raíz (Testigo) 802d 9.3 8.01 2.43 a 152 d+ 653d 8.4 7.3 2.06 b 302d +503d 8.3 7.97 1.94 b 452d + 353d 8.6 8.6 2.25 ab 101d + 702d 9.2 8.3 2.39 a 101d + 402d + 303d 8.7 8.4 2.33 ab C.V 7.7 19.5 18.6 ES X 0.12 0.18 0.13 Tratamientos ¾ Leyenda ¾ d días. ¾ 1- 75% de reducción de la iluminación. ¾ 2- 50% de reducción de la iluminación. ¾ 3- 25% de reducción de la iluminación. 40 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. V. Análisis climáticos Durante el desarrollo del experimento las diferentes variables climáticas, Tabla 1,1, como se observa se mantuvieron bastantes estables. En cuanto las precipitaciones, Tabla 1.2, en el mes de febrero cayeron 23,5 mm a los 20 días del trasplante no influyendo en las plantas in vitro. En el mes de marzo aunque las precipitaciones fueron bastantes no influyó en los resultados. En abril las precipitaciones fueron mayores espaciadas en los primeros días y seguido a finalizar el mes pero en pequeña cantidad, lo que no influyó en el desarrollo del experimento. 41 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. VI. CONCLUSIONES ¾ De los tiempos de permanencia estudiados con diferentes intensidades de iluminación, el que ejerce mayor influencia en el porcentaje de supervivencia, es el testigo, el cual permaneció durante todo el experimento al 50% de reducción de la intensidad luminosa. ¾ Los tratamientos que presentaron mejor comportamiento en la mayoría de los parámetros fisiológicos evaluados, corresponden al testigo y al que permaneció los 19 primeros días al 75% de reducción de iluminación y 70 días al 50% de la reducción de la iluminación. ¾ Existe cierta tendencia que a mayor tiempo de intensidad luminosa al 25% de reducción de la iluminación los valores son menores. ¾ El tratamiento que se mantuvo durante todo el tiempo del experimento con reducción de la intensidad luminosa al 50% (Testigo), las plantas in vitro presentaron mejor comportamiento de la parte aérea y largo medio de la raíz y número de raíces. 42 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. VII. RECOMENDASIONES ¾ Repetir el experimento en otra época del año. 43 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. VIII. BIBLIOGRAFÍA 1- Abab, M.1989. Los sustratos en horticultura ornamental. Revista Agrícola Vergel. 3: 146-152 p. 2- Agramonte, D; Terry. F; Rodríguez, A. 1998, Aclimatización. En: Pérez, Ponce. Propagación y mejora genética de plantas por Biotecnología. Instituto de Biotecnología de las plantas, Santa Clara. Cuba. p. 193-206. 3- Agramonte. R M.1998. Manejo integrado de vitroplantas en fase de aclimatización. XI Seminario Científico. INCA. Programa y resúmenes. Nov 17-20. 115 p. 4- Aguilera. M. 1999. AClimatización de clones de ñame (Dioscoria alata) IBP Las Villas. 5to Coloquio Internacional de Biotecnología Vegetal Junio 16-19. 145 p. 5- Almaguer Vargas Gustavo. Fruticultura general. 1987. P. 198. 6- Anuario Estadístico de Cuba.1996. Edición del 1998. Ed. Fotomecánica DAVINCI de Cuba. 7- Artetxe, A. Hernández, J.I. García-Plazaola, y J.M. Becerri. 1999. Efecto del la intensidad de luz en la composición y contenido de pigmentos fotosintéticos y antioxidantes en Lemna minor. Departamento de Biología Vegetal y Ecología, Universidad del País Vasco, Aptdo 644, 48080-Bilbao. 8- Aizprúa, J.C. Las desventajas de cultivar piña en la región oeste del país. [en línea] julio 2002. Disponible en: http//www. ciat. cqiar. orq/ipqri/fruits from Americas/frutales/more% 20ab out% 20pineaple. htm. [Consulta: junio 12 2003]. 9- Arzora, N. P. y Garcia E. R. 1997. Enmiendas fuentes de alternativas de nutrientes para la caña de azúcar. SERFE. INCA, 52 p. 10- Bidwell, R. G. S. 1979. Fisiología vegetal. Edit Limusa, S. A, México. 44 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. 11- Bohning, R. 1949. Time course of photosynthesis in apple leaves exposed to continuous illumination, plant physiology. 24: 222. 12- Cedeño. Y. 2002. Influencia de diferentes tiempos de iluminación en cultivo in vitro de malanga (Colocacia sculenta). Trabajo de Diploma en opción a la ingeniera. 34 p. 13- Coppens, G and Freddy Leal. Pineapple. [en línea] enero 2001. Disponible en: http//www. ciat. cqiar. orq/ipqri/fruits from Americas/frutales/more% 20ab out% 20pineaple. htm. [Consulta: junio 12 2003]. 14- Claude Py. La Piña; 1968 15- Daubenmire, R. F. 1959. Plants and Environment. Wiley, New York. 16- Daquinta. R. 1998. Propagación in vitro de piña, tesis presentado al grado del autor en Ciencia Agrícola en la UNICA. 17- Devlin, R. M. 1975. Fisiología Vegetal. E. d. Omega S., A. Barcelona 468 p. 18- Jiménez. F. A. 1998. Manejo de la zeolita en la fase de aclimatización XI. Seminario Científico. INCA. Programa y resúmenes. Nov 17- 20. 115 p. 19- Leal, F. y María A. García. 1981. Investigaciones sobre la piña (Ananas comosus) en la Facultad de Agronomía de la U.C.V. “Revista de la Facultad de Agronomía de la Universidad Central de Venezuela, Maracay, (29) : 1377 p. 20- Hurtado, D. M. 1988. Adaptación de plantas a condiciones ambientales. Cultivo de tejidos vegetales. Editorial Trillas. México. 21- Lehniger. AL. 1986. Bioquímica. Las bases moleculares de estructura y función celular. E. Revolucionaria, I. C, del libro, Ciudad de la Habana. 22- Lerch, G. 1977. La Experimentación en las Ciencias Biológicas y Agrícolas. Edición científico técnica. La Habana. 23- Leiva Mon. M. y M. A. Dita Rodríguez 1999. IBP. Las Villas. 5to Coloquio Internacional de Biotecnología Vegetal Junio 16-19 . pp 25-26. Marchites de vitroplantas de bananos (FHIA-18) Gran enano causa por pytium debaryanun Hesse en fase de aclimatización. 24- Smith. E. F. Roberts y Motley. 1990. The paration in vitro of chreyso nthemun for trnsplantion to. Soil. 45 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. 25- Mederos Eugenio.1988. Fruticultura Tropical. 26- MINAGRI, 1999.Tecnología para el cultivo en fase de aclimatización. Guía técnica Empresa de semillas, Las Tunas. 27- Peña, H. 1988. Cultivo de la Piña, Instituto Superior Agrícola de Ciego de Avila. 28- Peña. H y J. Avila. 1996. Indicadores relacionados en Agricultura no Cañera. Documento interno. Dirección Nacional de Frutales. 29- Peña. H y J.A. Díaz. 1986. Cultivo de la piña, Instituto Superior Agrícola de Ciego de Avila. 30- Pequeño, Pérez, J. Col. 1968. Agroquímica. Ciencia y Técnica. Instituto del libro, Cuba, p. 354 - 363. 31- Pérez Ponce. J.N. 1999. Propagación y mejora genética de las plantas por Biotecnología. 32- Pérez, M. 1988. Control Químico de (Cyperus rotundus )en piña”, Agrotecnia de Cuba. 9 (2):49 p. 33- Riquenez. R. M. 1998. Aplicaciones del cálculo integral al calculo del área foliar. CULT. 34- Rodríguez. M. 1999. Comportamiento de las plántulas de caña de azúcar proveniente de sistema de Inmersión temporal en la fase de aclimatización. 177-179 p. 35- Sandoval. R. 1991. Observaciones sobre la variabilidad encontradas en plantas micro propagadas de musa C. V. Falso cuerno AAB. 36- Torres, E. 1985. Crispín y Q. Domínguez “. Influencia de diferentes dosis de fertilizantes sobre la calidad de la piña (Ananas comosus (L) Merr) variedad Española Roja. Cultivos tropicales, 7 (2): 47-55. 37- Treto, E. 1979. Como cultivar la piña para obtener altos rendimientos, Instituto Nacional de Ciencias Agrícolas La Habana. 38- Treto, E. 1982. “Influencia de la aplicación de cachaza a la piña cultivada en un suelo ferralítico rojo compactado. Efectos sobre la nutrición y producción alcanzada por las plantas”. Cultivos tropicales, 4 (2): 209-217 p. 46 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. 39- Van Huylenbroeck, J. M., H. Huygens y P. C. Debergh, 1995. Photoinhibition during acclimatization of micropropagated spathiphyllum petite plantets. In vitro Cell. Dev. Bi0l Plant 31: 160 – 164 p. 40- Vázquez. B. E y Torres. S. G. 1981. Fisiología vegetal. Editorial pueblo y educación. Ciudad de la Habana. 41- Vázquez. B. E y Torres. S. G. 1995. Fisiología vegetal. Editorial pueblo y educación. Ciudad de la Habana. P. 143. 42- Verkerk, K. (1955). Interaction of photosynthetic light and temperature. Meded. Landb Hogesch. Wageningen 55: 175-224 p. 43- Villalobos, V y Theyse, T. 1993. Micropropagación, concepto, Metodología y resultados. En: Roca, M. Mrojinki (Eds), cultivos de tejidos en la agricultura: 127-141 p. 44- Yanes. R. 2001. Aclimatización de vitroplantas de piña (Ananas comous (L) Merr). Centro de Bioplantas, UNICA, 140 P. 47 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. IX. ANEXOS Tabla 1.1 Datos climáticos Meses Febrero Marzo Temperaturas (0C) Humedad relativa (%) 24.7 78 25.8 76 25.2 74 Abril Precipitaciones (mm). Tabla 1.2 Meses Días Febrero Marzo Abril 4 2.6 9 10.2 10 13 2.6 14 25.2 15 0.1 17 0.9 19 0.5 21 6.0 23 5.7 4.3 24 4.3 30.7 25 13.5 47.3 13.5 2.8 26 5.8 27 1.6 28 0.4 Total 23,5 67.7 48 86.8 Yudismer Pichardo Pérez_____________________________Trabajo de diploma. 49