Download Biología Molecular

Biología Molecular
Vanessa Z. Cardona Cardona
Biol 3051
Objetivos
o Analizar el DNA
o Conocer los principios básicos de
la técnica de electroforesis y
aplicarla al análisis del DNA.
o Descubrir como funcionan las
enzimas de restricción para cortar
el DNA.
¿Que es la biología molecular?
o Estudia el AND y los genes que
contiene.
o El AND es el material genético
que caracteriza a los organismos
vivos.
o Es una herramienta potente para
estudiar las relaciones evolutivas
entre los organismos de la tierra.
Enzimas de restricción
o Las enzimas de restricción o
endonucleasas se extraen de
bacterias, donde actúan como
un mecanismo de defensa para
degradar material genético
extraño que entra a la célula.
o Las endonucleasas cortan o
digieren el material genético en
una secuencia que reconocen.
Enzimas de restricción
o La mayoría de estas secuencias son
palindromicas.
o El nombre se estas enzimas esta
dado por el genero y especie de
donde se aisló la misma por primera
vez.
o EcoR1
E= genero Escherichia
co= especie coli
R= cepa RV 13
1= primera enzima
aislada de esta cepa
Cortes de las endonucleasas
o Cortes cohesivos:
o Cortan el DNA de manera
escalonada
o Algunas enzimas que hacen este
corte lo son: EcoR1, HindIII, BamH1
o Cortes abruptos:
o Cortan el DNA en la misma
posición.
o Algunas enzimas que hacen este
corte lo son: SspI, SmaI
Factores que afectan la actividad de las
endonucleasas.
o Pureza del DNA= compuestos
como proteínas y altas
concentraciones de sal pueden
inhibir la actividad de la enzima.
o Temperatura y pH
o Amortiguador adecuado= este va
a proveer el ambiente necesario
para que la enzima trabaje en
condiciones optimas.
Electroforesis
o Se separan macromoléculas a
través de un flujo de corriente
eléctrico y se puede determinar el
tamaño de los fragmento de AND.
o Los fragmentos se separan por:
o Tamaño de la molécula
o Conformación del AND
o Tamaño de los poros de la gel
o Carga nata de la molécula
Carga del DNA
En la fosa se
coloca la muestra
y esta va a estar
el en electrodo
negativo
El DNA va a correr
del electrodo
negativo al positivo
Practica
o Practicando el uso de las micro
pipetas.
o Preparación del gel para la
electroforesis.
o Corrida del gel de electroforesis.