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Staphylococcus aureus
Laboratorio de Microbiología de
Alimentos
Staphylococcus aureus
Dos Métodos

Sólido


> 100 S. aureus/g
Líquido

< 100 S. aureus/g
Baird-Parker Agar

Cloruro de Litio – Selectivo


Glicina – Selectivo


S. aureus can tolerate
S. aureus puede tolerarlo
Tellurite – Selectivo and Diferencial



Reducción a telurio (negro)
Yema de huevo – Diferencial
S. aureus Rompe la yema de huevo y deja zona clara
Método Sólido - Placas

Debe utilizarse la técnica de esparcido

NO puede ponerse 1 ml en la placa


No se absorverá en el medio
DEBE distribuirse 1 ml en 3 placas
0.3
0.3
0.4
Método Sólido


Incube Invertido a 35 C por 45-48 h
Cuente las placas con 20-200 colonias


Colonias Grandes
Colonia típica



Gris/Negra, suave, circular, convéxa y
húmeda
2-3 mm díametro
Zona clara alrededor de la colonia
Método Líquido - MPN

Medio





10% NaCl Trypticase Soy Broth
Utilice 3 Tubos MPN
Incube a 35 C por 48 h
Transfiera los positivos (loop) a BairdParker Agar
Positivos – TSA Agar y Prueba de Catalasa
Prueba de Coagulasa


Determina si Staph aglutina plasma
SIEMPRE




UILICE UN CONTROL POSITIVO
Coagulasa es una enzima producida por S.
aureus
Si 4+ - Probablemente sea S. aureus
1+ to 3+ - Requiere más pruebas
Otras Pruebas

Fermentación Anaeróbica de Mannitol y Glucosa



Fermentación de carbohidratos con media
conteniendo 0.5% mannitol/glucosa (dos tubos
separados)
Producción de ácid, NO gas – Positivo para S. aureus
Prueba de Catalasa


Tome de “slant” de medio no-selectivo (TSA)
Ponga el cultivo en laminilla

Producción de burbújas - Positivo
Otras Pruebas

Sensitividad Lisostafin



Lisostafin es una enzima producida por
OTRAS Staph que causa lisis de S. aureus
Lysostafin se anade a amortiguador de fosfato
salina
Incubar 2 horas a 35 C
Positivo – Tubo claro (lisis)
 Negativo - Turbio

Otras Pruebas

Prueba de termostabilidad Nucleasaa Test
 Enzima Producida por S. aureus




Estable al calor
Degrada DNA
Hierva un cultivo en BHI por 10 min
Estriado en Toluinine Blue – Deoxynucleic Acid
Agar



Incube por 24 h a 35 C
DNA +Dye – Azul (negativo)
No DNA – Rosado (positivo)