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Aplicaciones de la PCR Análisis de alimentos Diagnóstico médico PCR Análisis medioambiental Medicina forense Arqueología Paleontología Application of PCR Prof. Dr. Baron 1 Application of PCR for Diagnosis Diagnóstico de infecciones. Application of PCR Prof. Dr. Baron 2 Diagnostico de Infecciones por PCR (selección) Patógeno Borrelia burgdorferi Chlamydia trachomatis Mycobacterium tuberculosis E. coli (ST producing)* Herpes simplex virus Varicela zoster virus Hepatitis B virus (HBV) Hepatitis C virus (HCV) HIV-1 Enfermedad Lyme borreliosis Artritis, neumonia Tuberculosis Enterocolitis hemorrágica meningitis, encefalitis meningitis, encefalitis hepatitis B hepatitis C SIDA * ST = Shiga-like-Toxin Protocolo de la prueba • Obtener muestra (sangre, suero, licor, frotis, pelo...) • Aislar ADN • Amplificar por PCR secuencias relevantes de ADN Application of PCR Prof. Dr. Baron 3 Diagnosis of Infections by PCR Ventajas del diagnóstico por PCR • Rápido diagnóstico en caso de largo periódo de cultivo de microorganismos (MOs), ejem. 3 semanas para mycobacteria, 4 hrs con PCR • Diagnóstico de MOs que son dificiles de cultivar (cytomelalovirus, chlamydia) • La cuantificación de los patógenos por PCR cuantitativa, importante para organizar una terapia apropiada y evaluar el éxito de la terapia. • Para evitar terapias innecesarias o altas dosis. • Para reducir efectos secundarios. • Para recortar costes. • Para evitar el desarrollo de MOs resistentes. ---------------------------------------------------------------------------- Application of PCR Prof. Dr. Baron 4 Application of PCR in Forensic Medicine PCR para huella genética Application of PCR Prof. Dr. Baron 5 Huella genética con VNTR/STR Gen de mioglobina 4 repeticiones en tándem 33- repetición de par de bases Cromosomas homólogos Application of PCR Prof. Dr. Baron 6 VNTR / STR para huella genética VNTR (Unidades de repetición de Tándem Diferentes) • Cada repetición es 10 – 40 pares de bases (bp) de largo. • Un locus VNTR contiene de 2 - 50 repeticiones. • Hay varios cientos de loci VNTR en el genoma humano. • El número de repeticiones varía de una persona a otra e incluso en una persona de cromosomas homólogos. Application of PCR Prof. Dr. Baron 7 Huella genética con VNTR/STR Cromosomas homólogos Separación de repeticiones aplificadas por el gel de electroforesis Application of PCR Prof. Dr. Baron 8 VNTR / STR for DNA Fingerprinting VNTR (Unidades de repetición de Tándem Diferentes) • Cada repetición es 10 – 40 pares de bases (bp) de largo. • Un locus VNTR contiene de 2 - 50 repeticiones. • Hay varios cientos de loci VNTR en el genoma humano. • El número de repeticiones varía de una persona a otra e incluso en una persona de cromosomas homólogos. STR (Repeticiones cortas en Tándem) • Cada repetición es de 2 - 10 bp de largo. • Un locus STR contiene: 10 - 50 repeticiones • Varios cientos de loci STR en el genoma humano • Identificación de 1:6 billones con 8 STR loci , 1:1017 con 16 STR loci Protocolo del test • Aislar ADN del material biológico (sangre, saliva, tejidos, pelos...) multiplex PCR (capilaridad) gel electroforesis leer Applicación • Medicina Forense, test de paternidad, alimentación animal, control de carnes,identificación celular ej. Células cancerígenas... Application of PCR Prof. Dr. Baron 9
