Download Huella Genética o “Fingerprinting”

Alianza para el Aprendizaje de Ciencias y Matemáticas (AlACiMa)
Huella Genética o “Fingerprinting”
Original de Essy Levy, M.S. y Julie Mathern
Huella genética
o
“Fingerprinting”
de ADN
Temas
Cubiertos
• Digestión de las muestras de ADN con
enzimas de restricción
• Introducción a la base teórica de Huella
Genética o “Fingerprinting” de ADN
• Electroforesis de geles de agarosa
• Análisis e interpretaciones de los
resultados
Aplicaciones al
mundo real de
Huella genética
o
“Fingerprinting”
de ADN
• Escena del crimen
• Relación entre humanos
• Paternidad
• Relación entre animales
• Estudios antropológicos
• Estudios de organismos que causan
enfermedades
• Identificación de alimentos
• Restos Humanos
• Monitoreo de transplantes
El kit de Huella
genética o
“Fingerprinting”
de ADN Forense
Puede ayudar a
enseñar:
• La estructura de ADN
• Análisis de patrones de restricción de ADN
• Electroforesis en gel de agarosa
• Determinación de tamaño
• Simulación de “Fingerprinting” de ADN
forense real
Huella
Genética
Resumen de los
Procedimientos
Huella
Genética
Procedimiento
Primera Parte
Huella
Genética
Procedimiento
Segunda Parte
Huella
Genética
Procedimiento
Tercera Parte
Equipo de
Electroforesis de
Agarosa
Bio-Rad
PowerPac™ Junior
PowerPac™ Basic
• Cubetas de
Electroforesis
• Fuentes de Electricidad
• Geles de agarosa
preparados
PowerPac™ HC
PowerPac™ Universal
Mini-Sub® Cell GT
PowerPac™ 3000
Wide Mini-Sub Cell GT
Enzimas de
Restricción de
ADN
• Son proteínas que
cortan el ADN en
secuencias específicas
que son palindrómicas
(leen igual en dirección
5’ a 3’) .
• Fueron evolucionadas
por bacterias para
protegerse contra
infecciones virales
• Se llaman
endonucleasas porque
cortan en el interior de
las hebras del ADN
• Se conocen más de
3,000 enzimas
Otros
Componentes
en la
Reacción de
la Digestión
del ADN
• Búfer Restricción permite las condiciones
óptimas para la reacción
• NaCI proporciona la concentración correcta de
iónes
• Tris-HCI proporciona el pH correcto
• Mg2+ es un co-factor enzimático
Temperatura
de la
Digestión
del ADN
¿Por qué incubamos a 37°C?
• La temperatura del cuerpo es la temperatura
óptima para éstas y otras enzimas.
¿Qué pasa si la temperatura de la reacción
es demasiado fría o demasiado caliente?
• Muy caliente: la enzima puede ser desnaturalizada.
• Muy fría: la actividad de la enzima puede ser más
lenta, requiriendo más tiempo para digerir el ADN.
Las muestras de ADN digeridas se guardarán en la
nevera para ser analizadas el día siguiente.
Asegúrese de que los pozos
están en el lado del polo (-).
Electroforesis
en Agarosa:
aplicando las
muestras
• Corriente Eléctrica
La corriente mueve el
ADN, que tiene una
carga negativa, hacia
el electrodo positivo
(+, rojo).
Búfer
Tinta
Gel de agarosa
Fuente de Poder
Electroforesis
en Agarosa:
corriendo las
muestras
• La gel de agarosa
separa los
fragmentos de ADN
por tamaño.
Los fragmentos más
pequeños se
mueven más rápido y
progresan más lejos
que los fragmentos
más grandes.
Corriendo la Gel
Fuente de Electricidad
Electroforesis
en Agarosa:
resultados
típicos
• La gel de agarosa
separa los
fragmentos de ADN
por tamaño.
Los fragmentos más
pequeños se
mueven más rápido y
progresan más lejos
que los fragmentos
más grandes.
Análisis de la
Gel Teñida
Determine los tamaños
de los fragmentos de
restricción.
• Cree una curva estándar
utilizando un marcador de
ADN.
• Mida la distancia (en mm)
recorrida por los
fragmentos de restricción.
• Determine los tamaños de
lo fragmentos de ADN.
Identifique la relación
entre las muestras.
Determinación
del Tamaño
Molecular
Distancia (mm)
23,000
11.0
9,400
13.0
6,500
15.0
4,400
18.0
100,000
Tamaño (pares de baes)
Tamaño (pb)
Curva Estándar de “Fingerprinting”: Semilogritmico
10,000
B
1,000
2,300
23.0
2,000
24.0
pb = pares de bases
mm = milímetros
100
0
5
10
15
20
Distancia (mm)
A
25
30
“Fingerprinting
” de ADN
Extensiones a
la práctica de
laboratorio
• Estudios Independientes
• Aislamiento del plásmido de (mini-preps)
• La cartografía de un plásmido utilizando las
enzimas de restricción
• Análisis por “Southern blot”
• Prácticas de introducción a la
electroforesis:
Kool-Aid/FastBlast
Indicador de pH en un búfer