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DETECCION DE
VIRUS
DETECCION
DE VIRUS
RESPIRATORIOS:
RESPIRATORIOS:
NUEVAS ESTRATEGIAS
NUEVAS
ESTRATEGIAS
Loreto
Fuenzalida
Loreto Fuenzalida
INTRODUCCION
Los virus
respiratorios
son un problema
a nivel mundial
INTRODUCCION
En muchas situaciones biológicamente complejas,
como puede ser una enfermedad causada por
diferentes virus, el agente etiológico no se ha
identificado.
 Las nuevas técnicas están enfocadas al
desarrollo de microarrays.
 Microarrays: Chips o arrays de una serie de
biosondas en un soporte sólido, en una
disposición regular y prefijada.
 La tecnología actual de los microarrays, sin
embargo, involucra la compleja y estricta
ejecución de múltiples procesos experimentales y
la contaminación cruzada puede conducir a
falsos resultados.
SARS-CoV
 El Síndrome Respiratorio Agudo Severo (SARS)
es una enfermedad infecciosa seria, de impacto
mundial.
 Esta enfermedad es producida
por un coronavirus humano
(SARS-CoV).
 El estadío temprano de la infección por SARS es
caracterizado por fiebre, disnea y rápidos cambios
en el pulmón visibles por rayos X.
Problema: puede ser diagnosticado como influenza
Técnicas actuales para
detectar el SARS
 Métodos serológicos que prevalecen para la
detección de SARS:
- Ensayo de inmunofluorescencia indirecta
- ELISA
 Detección de ácidos nucleicos mediante PCR
Integra procesos múltiples de PCR y microarrays
de DNA en un tubo Eppendorf para la detección de
múltiples virus
El sistema consta de 3 partes:
 Tapa ópticamente transparente que lleva un
microarrays de oligonucleótidos en su superficie
interior.
 Recipiente interno negro.
 Cuerpo del tubo Eppendorf
The Structure and the Operation of the
Microarray-in-a-tube
Solution prepare
PCR
Hybridization
Detection
A
B
Imagen del microarray en tubo
con muestras negativas (A) y
muestras positivas (B).
 Es un sistema rápido para la detección de múltiples
virus respiratorios.
 Disminuye las horas de trabajo.
 Prevención de contaminación cruzada de
los productos de PCR.
 Uso potencial para la detección de múltiples
genes.
Construcción de un microarray de proteína que
contiene el proteoma completo del coronavirus
humano SARS
 Detección de anticuerpos contra SARS-CoV en
muestras de suero humano, además de otros
coronavirus.
 Se utilizaron 82 proteínas purificadas de los
diferentes virus.
 Muestras diagnosticadas clínicamente y por
ensayo de ELISA.
 Se utilizó menos de 1 µl de suero para el
ensayo de microarray de proteína.
 La técnica identificó y distinguir entre SARS-CoV
y HCoV-229E, rápidamente en pacientes, con alta
sensibilidad y especificidad.
 El ensayo fue 50 veces más sensible que el
ensayo de ELISA (dilusión 1/200 v/s 1/50).

El fragmento carboxilo terminal de la proteína N
muestra una elevada actividad antigénica.
 Los microarrays de proteínas pueden ser un
método rápido, sensible y simple para
identificación a gran escala de anticuerpos
específicos en suero.
Conclusiones
 Debido al problema actual que representan las
infecciones respiratorias virales, se está tratando
de diseñar nuevos métodos de detección más
rápidos y sensibles.
 La técnica de microarrays tiene un gran potencial
para la detección de agentes patógenos.
 Utilizando nuevos formatos, es posible hacer que
esta técnica sea de más fácil manipulación en el
laboratorio.
GRACIAS¡¡