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Técnicas diagnosticas en
hematología
Pr Marc Maynadié
Desde 2000 la clasificación de las enfermedades
hematológicas se hace según varios elementos :
-
Tipo celular : mieloide, linfoide B, T, NK
El nivel de diferenciación
La arquitectura de la invasión : nodular o difuso
Las anomalías citogenéticas
El perfil molecular
En Hematología, el diagnostico es multifactorial
– Morfología :
• citología : células
• y/o histología : arquitectura
– Immunofenotypo :
• Immuno histo chimica
• Citometria de flujo
– Cariotipo : formula cromosómica
– Biología molecular : mutación, amplificación, deleción
– Congelación : colección de tejido maligno
Técnicas de base en Hematología:
– Citología :
•
•
•
•
Leucemia agudas
Síndromes mielodisplasicos
Síndromes mieloproliferativos
Algunas proliferaciones linfoides
– Histología :
• Todas las proliferaciones linfoides en tejidos solidos
• Síndromes mieloproliferativos
LLC
LCM
LMA
Sangre
LLA
LAM
SMD
Medula osea
LLA
LCM
Infiltración difusa
Infiltración nodular
Immunofenotipaje
• Immuno histo chimica : anticuerpos monoclonales
que se usan en laminas. La fijación se revela con
una reacción enzimática
• Citometria de flujo : anticuerpos monoclonales con
molécula fluorescente, se usan en células en
suspensión. Cada célula analizada individualmente
a gran velocidad.
Immuno Histo chimica
Citometria de flujo
Células en suspensión
10 colores
Populacion linfoide B monoclonale
Leucemia aguda
Leucemia mieloide aguda
Leucemia linfoide aguda
• Fenotipo :
– mieloide,
– Linfoide B, T o NK
– clonalidad
– Nivel de diferenciación : células inmaduras o maduras
– Marcadores de pronostico : CD34, …
– Minoración del numero de células malignas
– Enfermedad residual
Cariotipo convencional : técnicas de bandas R o G
Formula chromosomica : 46, XX
Hibridación in situ fluorescente( FISH) : sondas especificas
de unas parte de cromosomas
Multi FISH
FISH multibandas
Hybridacion genomica comparativa (CGH)
Cyanine 5 : jaune - Aqua : bleu - Cyanine 3 : violet - FITC : vert- Texas Red : rouge
-
MultiFISH métaphase normale
Multifish
Leucemia linfoide aguda
Chromosome 1
der1
der 19
Principio de la CGH
Zonas amplificadas
Biología molecular
Polymerase Chain reaction : PCR
diferentes tipos : - Reverse Transcriptase
- Real Time
- nested pCR…
ADN Chip o microarray
miniaturisacion de tecnicas de hybridacion
ADN patiente
ADN normal
Loci a estudiar
Trisomia en rojo
Monosomia en verde
Rouge : gène surexprimé
Vert : gène sous exprimé
1500 ADNc del X
ADNc H : verde
ADNc M : rojo
Amarillo : equivalente genico
ADN Chip
ADNc celular : rojo
ADNc de referencia : verde
cluster de genes con expresión
génica aumentada : rojo
• Congelación de tejido maligno
– Interés mayor
– Importante para el diagnostico a posteriori : colección
sanitaria
– Muy importante par la búsqueda : fundamental,
clínica y epidemiológica
– Tiene que ser automática y sistemática
Gracias por su atencion