Download Electroforesis en geles de Agarosa

Universidad de Carabobo
Facultad de Ciencias de la Salud
Escuela de Medicina“Dr. Witremundo Torrealba"
Departamento de Fisiología y Bioquímica
Br. Pérez José
Br. Pérez Eleanny
Br. Pérez Ana
Marzo, 2012
Objetivos Específicos
 Analizar los fundamentos teóricos de la
electroforesis y su utilidad.
Contenido
 Movimiento iónico en un campo eléctrico.
 Proceso electroforético.
 Cámara electroforética.
 Materiales de soporte.
 Utilidad de cada una de ella:
 Electroforesis en geles de acrilamida.
 Electroforesis en geles de acrilamida SDS.
 Electroforesis bidimensional.
 Electroforesis en geles de agarosa.
Electroforesis
Es una técnica para la
separación de moléculas
según la movilidad de
estas en un campo
eléctrico
Desventajas
Afecta la estructura
de las proteínas por
lo tanto, también
afecta a la función de
la misma.
Ventajas
Separación,
visualización y
cuantificación
del numero de
proteínas
de
una solución.
Movimiento iónico en un campo
electromagnético.
Las moléculas de soluto
con carga neta positiva
se desplazan hacia el
cátodo y las moléculas
con carga neta negativa
se desplazan hacia el
ánodo.
http://www.micruxfluidic.com/es/tecnologia.html
Movimiento iónico en un campo
electromagnético.
La movilidad
depende en
de
La movilidad
μ expresada
la carga
de la partícula que, a su
cm2 por Volt-s de una
vez, depende del pH del medio
molécula
en un Por
campo
en
el que se encuentre.
esta
eléctrico,
viene dada
por lael
razón
es necesario
indicar
velocidad o
de elemigración
V
electrolito
pH utilizado
expresada
en cm/s,
respecto
para
determinar
la movilidad.
de la fuerza del campo E,
expresada en voltios/cm.
Proceso electroforético
En la electroforesis libre una
disolución tamponada de la
mezcla de proteínas se coloca
en una célula de observación
en forma de U mayúscula,
depositando una capa de
tampón (buffer) puro sobre la
disolución de proteínas.
Cámaras electroforéticas.
Unidades Horizontales:
Unidades Horizontales:
Unidades Horizontales:
Tipos de electroforesis
Electroforesis de
frente móvil
Es aquella en la cual
las partículas se
mueven de forma
libre en el medio en
que se encuentran
dispersas.
ELECTROFORESIS DE ZONA
La muestra esta obligada a
desplazarse sobre un soporte solido
tal como el papel o ciertos geles.
¿Qué se necesita para realizar
una electroforesis de zona?
FACTORES QUE EFECTAN
LA ELECTROFORESIS
CARGA NETA
TAMAÑO Y FORMA
POTENCIAL DEL
CAMPO ELÈCTRICO
MECANISMOS DE
SOPORTE
PAPEL
• Separación
de sustancia
de bajo peso
molecular
ACETATO
CELULOSA
• Se usa en
análisis
biológicos
• Débil
resolución
AGARASO
• Es un
polisacárido
• Se usa para
la
separación
de ácidos
nucleicos
ELECTROFORESIS
CON PAPEL
ELECTROFORESIS
CON AGAROSA
GELES DE
ALMIDÒN
• Proviene de
diversas fuentes
naturales
POLIACRILAMIDA
• El mas usado en la
electroforesis
• Son geles
completamente
inertes, estables y
transparentes
ELECTROFORESIS DE
POLIACRILAMIDA
Electroforesis en geles de
acrilamida
Proteínas
presentes en el
extracto celular
• Son químicamente inertes.
• Son transparentes
• Son estables en un amplio
intervalo de valores de pH,
temperatura y fuerza iónica
• Son resistentes a los agentes
desnaturalizantes.
• Pueden prepararse con Enzima RNA
polimerasa de la
tamaños de poro muy variados.
Lehninger Principios de Bioquímica 4ta Edición
bacteria E coli
Electroforesis en geles de
acrilamida SDS
 Compuesto de gran
carga negativa.
 Utilizado para estimar la
pureza y la masa
molecular.
 Se une a las proteínas en
una cantidad proporcional
a la masa molecular.
Lehninger Principios de Bioquímica 4ta Edición
 Confiere a todas las
proteínas un cociente
Carga/Masa similar.
SDS - PAGE
• Separa a las proteínas
casi exclusivamente
en función de su masa
molecular
Lehninger Principios de Bioquímica 4ta Edición
Electroforesis bidimensional
Es la combinación secuencial del enfoque
isoeléctrico y la electroforesis en gel con
SDS.
Lehninger Principios de Bioquímica 4ta Edición
Electroforesis en geles de
Agarosa
Los geles se
comportan como
un tamiz
molecular y
permiten separar
moléculas cargadas
en función de su
tamaño y forma.
Resumen
 Los procedimientos de fraccionamiento se usan para




purificar las proteínas sobre la base de sus
solubilidades, cargas, tamaños y especificidades de
unión.
La electroforesis separa las moléculas según su tamaño
y su carga.
La SDS-PAGE las separa principalmente por su
tamaño.
La electroforesis en gel con SDS y el Enfoque
Isoeléctrico se pueden utilizar por separado o
combinados para obtener una mayor resolución.
La electroforesis bidimensional (2D) puede separar
cientos de proteínas.
Bibliografía
 http://www.uco.es/organiza/departamentos/bioquimi




ca-biol-GELES%20AGAROSA.pdf
http://idibam.blogspot.com/2008/09/electroforesisen-gel-de-agarosa.html
Lehninger. Principios de bioquímica Cuarta Edición.
Harold A .Harper .Manual de química Fisiológica
Sexta Edición.
Biochemistry (3rd Edition) by Christopher K. Mathews
Kensal E. van Holde Kevin G.
Ahern